Steady-Glo荧光素酶检测试剂盒在Modulus单管型多功能检测仪上的应用
萤火虫荧光素酶检测试剂盒
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萤火虫荧光素酶检测试剂盒
(Fire-Lucy Assay Kit)
产品说明：
报告基因检测，是真核基因表达调控研究的常用方法。由于检测光量子的方法非常敏感，采用生物发光(bioluminescent)法，是报告基因检测最常用的有效手段。荧光素酶(luciferase)催化底物荧光素的转化，发射出光子。萤火虫荧光素酶(Firefly luciferase)催化的发光反应，具有很好的线性浓度范围(7~8个数量级的线性范围，酶的检测灵敏度达到10-20 mol。本试剂盒采用通用裂解缓冲液，能与其他类型的报告基因检测和蛋白含量检测兼容；优化的酶反应体系，使发光反应持续数十分钟，以便于手工操作多个样品。可与Ren-Lucy Assay Kit共同使用进行一体化的双荧光素酶检测。
产品内容与储存方法： 名称
5x Universal Lysis Buffer (通用裂解液)
Fassay Buffer (虫酶缓冲液)
Fassay Substrate (虫酶底物) 数量 25 ml 10 ml 0.5 ml 保存条件 -20℃ -20℃ -20℃
可作100次双荧光素酶检测。低温运输，-20℃或-80℃避光保存。有效期6个月。
所需其它试剂：
使用者需准备PBS 、双蒸水等。
操作方法：
裂解细胞：
1) 新鲜配制裂解液：临用前，取适量5xUniversal Lysis Buffer (ULB)，用双蒸水稀释至
1xULB，混匀。1xULB可在4℃存放数周。
2) 细胞清洗：倾去培养板/皿中的培养液，加入足量PBS，轻轻洗涤细胞。完全倾去
洗涤液。
3) 细胞裂解：推荐按照表中的体积，在孔/皿中加入1xULB，混匀。培养板可在微型
振荡器上震荡5~10 min；培养皿可直接用细胞刮刀刮下细胞，将细胞悬液移入1.5 ml离心管，在涡旋振荡器上充分混悬震荡30秒。裂解细胞悬液可直接用于发光测定，也可离心30秒，取上清做发光测定。
配制发光反应液：
测定前，在室温待Fassay Buffer和Fassay Substrate溶化，混匀（注意避光）。按20/1比例用Fassay Buffer稀释Fassay Substrate，配制所需体积的Fassay Reagent（注意避光）。 测定仪器的设置：
按仪器操作说明开启发光测定仪。手动操作型仪器，将测读时间设为10-20秒。自动操作型仪器，一般将测定延迟设为2秒，将测读时间设为10-20秒，Fassay Reagent的注入体积设定为100 μl。
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