最佳固定和处理，第 2 部分 – 组织处理

LabStorage | 2020 年 3 月 1 日 | LabStore 亮点 | 0 条评论

上一篇文章（最佳固定）讨论了作为组织处理基础的固定，所有其他步骤的成功都取决于固定。在本文中，我们将讨论常规组织学组织处理中的固定后步骤（脱水、透明、渗透），以及如何管理和维护这些步骤以实现完整和最佳的处理。在细胞中的所有酶活性被抑制或\"固定”以防止细胞降解后，应用前面提到的三个连续步骤首先去除组织中的所有水分。含有脱水剂（主要是分级酒精）的组织；其次清除组织中的酒精（通常使用二甲苯），为下一步/解决方案做准备；第三，用包埋介质浸润组织（infiltration 蜡），这将为组织/细胞提供承受切片所需的结构支撑。

在讨论的所有溶液转换中，必须观察到的一个重要作用是从一种试剂到另一种试剂的最佳液体交换。由于溶液完全渗透到细胞水平，因此在施用下一种溶液之前，一种溶液不太可能从固定组织中完全排出。因此，必须有一个从前一种溶液到新溶液的逐渐交换过程。右图显示了热对流，缓慢引入热量以改变较冷元件的环境温度。 这些与整个组织处理过程中的液体交换所涉及的动力学相同。第一步，脱水，将组织直接放入纯脱水剂中，很可能会导致细胞破裂，细胞膜迅速收缩，形成褶皱、皱纹并扭曲自然形态。需要使用一系列分级酒精（70%、80%、95%、100%）来逐渐去除水分，而不影响结构或细胞成分。时间和溶液的多次更换不仅是脱水剂的关键因素，也是所有后续解决方案的关键因素。作为标准，应有 45 分钟的时间每种溶液浸泡一小时，根据溶液至少更换 1-2 次溶液。如前所述，溶液的施用方式至关重要。脱水不足会导致组织中残留结合水，从而阻碍后续试剂、组织轮廓不一致以及中心软化和糊状。右图在上一篇文章中使用，现在再次用于证明固定剂和/或脱水剂的不完全渗透。组织软中心的水分会阻碍下一个解决方案的有效性，导致处理不足、无法诊断的区域，并导致重新处理步骤。过度脱水会导致组织中分子键断裂、蛋白质分子解体以及切片过程中脆性碎片（薄片）。酒精（脱水剂）与最终溶液（渗透蜡）不混溶，因此必须有一种溶液可以清除酒精并为组织准备蜡。该溶液必须与酒精和蜡混溶。二甲苯是基本组织处理的最佳解决方案，因为我们在细胞水平上讨论这个问题，所以时间多次更换溶液也是彻底去除脱水剂的关键因素。通常，相同的时间/更换标准脱水剂中的二甲苯也适用于二甲苯。二甲苯是一种已知的致癌物质，使用时必须遵守与皮肤和呼吸系统暴露相关的安全标准。最后一步，渗透，用于为细胞和组织基质提供结构和支撑，以在切片过程中保持组织处于适当的关系。大多数包埋蜡是相当快的渗透，可以适应组织样本（乳房、骨骼等）中的各种尺寸和密度。分子水平的石蜡是一种简单的直链碳氢化合物，如右图所示。

市场上有各种石蜡包埋蜡，每种都有自己专有的成分混合物。主要分类区分渗透蜡可以通过制造的添加剂的数量和类型来观察聚合物和其他添加剂（塑料、树脂等）是具有重复单元的大型聚合物，当将其添加到原始石蜡分子中时，会形成一种专为特定目的和用途而设计的增强聚合物。就切片而言，聚合物添加剂为蜡提供了更多的带状强度，并且通常允许您在切片过程中获得更薄的切片。但是，将这些元素添加到原始分子中随后会产生更大的分子，并且\"理论上”会产生较慢的渗透介质。因此，\"理论上”高聚物蜡是一种较慢渗透蜡，更适合切片；而低聚物蜡，\"理论上”可能更适合加工过程中的初始蜡渗透。

上面的这种\"理论”讨论是为什么一些实验室选择在其组织处理机中使用一种低聚物蜡介质进行渗透，而高聚物蜡介质的来源。因此，组织学家在市场上有多种高/低聚物蜡可供选择。实际上，当今市场上的大多数石蜡包埋蜡都是为加工和/或切片术的通用应用而设计的。使用高聚物蜡进行切片术并不一定意味着相同的蜡在渗透中不会成功。至于一种蜡是否比另一种效果更好，取决于用户的个人喜好。笔者个人更喜欢高聚物蜡聚合物蜡，因为添加的聚合物确实在切片过程中提供了更高的性能。理想情况下，如果我可以为我的实验室选择两种蜡，我会\"个人”选择高和低，但如果只选择一种，我会选择一种用于包埋和切片机的高分子蜡。

讨论了固定后组织处理的三个要素，必须再次强调，最佳处理只能通过管理来实现解决方案的完整性（使用新鲜试剂）、解决方案的时间（强制处理器启动时间）以及最终结果的日常监控。处理器机器的日常维护以及组织启动和运行时间的一致性是实现最佳组织处理的支柱。有关更多技术信息，请立即联系实验室存储系统的客户关系代表。

参考文献：

Brown, HS，\"固定和处理中的流体传输动力学”，技术开发系列，实验室管理顾问， 2017.Carson, FL, ‘Histotechnology-A Self-Instruction Text’, Chicago, IL., ASCP Press, 1997.PaperNerdContributor, \"Heat Transfer”, Science Essays, Wikipedia, 2001.0 Comments 搜索类别新存储系统组织学细胞学研究标本收藏设备间隙最近帖子存储的耐久性和寿命 – 需要-站点扩展存储2023 年 4 月 4 日Box Storage Utilities –；活动文件和长期存储的简单性2023 年 3 月 1 日被遗忘的安全第 3 部分 - 个人防护护理2023 年 2 月 2 日