MatTek’sNormalHumanCornealEpithelialCells (NHCE)andgrowthmedia(NHCE-GM)provideanidealserum-freeculturesystemtostudycell-cellandcell-matrixinteractions,generegulation,celldifferentiation,tissuedevelopment,woundhealing,andtoxiceffectstothecornealepithelium.
NHCE-CRY–ALDH3A1(green),Phalloidin(red),DAPI(blue),60x
NormalHumanCornealEpithelialCells,10x
NHCE-CRY–Cytokeratin3/12(green),Ki67(white),DAPI(blue),60x
NHCE-CRY–Cytokeratin15(red),DAPI(blue),60xProductDescription:
NHCEcellsareisolatedfromtheProgenitor-richlimbalregionofwholecorneas. MatTek’sNHCEcellsare characterizedbytheircobblestonemorphologyandpositiveexpressionof cytokeratin3/12,cytokeratin15andaldehydedehydrogenase3A1.
Donor-matchedcornealkeratocytes(NHCK)areavailableuponrequest.
DownloadtheHumanCornealEpithelialCellsDataSheet
Specifications:
Allcellsarenegativeformycoplasma,bacteria,yeast,andfungi.HIV-1,hepatitisBandhepatitisCarenotdetectedbyPCRforalldonorsandcelllots. Thisproductisforresearchuseonly. Notforuseinanimals,humansordiagnosticpurposes.
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1新生大鼠鼠龄的选择新生大鼠心肌细胞在出生后3 d内具有部分的增殖能力，成年大鼠心肌细胞则为终末分化细胞，不再具有分裂增殖能力.因此，大鼠出生时间越短，其心肌细胞分离后成活率越高，越容易贴壁生长.大量观测表明，选择1~3 d龄大鼠分离其心肌细胞进行原代培养较为理想.其中尤以半日龄大鼠心肌细胞培养效果最佳.
2消化酶的选择及使用
新生大鼠心肌细胞的分离可采用组织块法和消化法，前者因不易获得密度均一的细胞且难控制成纤维细胞的生长而较少采用.消化法中常使用的酶有3种：胰蛋白酶、胶原酶I或Ⅱ以及透明质酸酶.透明质酸酶多与胰蛋白酶或胶原酶联合应用.胰蛋白酶作用较强，容易造成心肌细胞损坏.胶原酶作用较缓和，能消化细胞间质中的胶原纤维以释放细胞，对细胞损伤小，且在新生大鼠心肌组织，以胶原I为主,故我们选用胶原酶I.文献报道胶原酶的工作浓度一般在0.6~1 g・L1,我们使用的为0.8 g・L1.胶原酶最好现用现配.
3消化程度的把握
新生大鼠心肌细胞对酶消化极为敏感.消化过度可使肌原纤维出现萎缩，细胞死亡率增加或丧失贴壁能力及搏动能力;消化不足，细胞聚集成团，无法分清细胞边界，难以形态学观测.消化过程中使用磁力搅拌器时应注意1)转速一般控制在60~80 r・min1左右.(2)每次消化的时间须结合消化酶浓度确定.(3)将粘附在搅拌子上的心肌组织吹散，使酶液充分接触组织.(4)适宜温度为35~37℃.(5)当组织由红转白呈半透明状态时，应停止消化.
4接种的细胞密度
心肌细胞接种密度不仅影响细胞间的相互接触，进而影响细胞对肥大刺激的反应，而且影响长期培养细胞的成活率.接种细胞的绝对数量应经精确计算.一般而言，应根据实验的观测目的决定单位面积上的细胞数量.例如，如作形态学观测,六孔板中每孔的接种细胞数量应控制在1×105~2×105个;若需收获心肌细胞作mRNA或蛋白表达水平的观测，则每孔的接种密度可增加到5×105~6×105个.
作者：PriCells原生原代
1.原代细胞培养最大优点是：细胞直接来源于机体组织，生物性状尚未发生大的变化，在一定程度上能够反映体内的状态。
2.细胞株和原代细胞不是完全一样。
3.并非每一种组织源性细胞都有相应的细胞株，有些细胞必须养原代，
4.细胞株是来源于原代细胞，原代细胞导入了病毒增殖基因并转变为细胞株，细胞株带有癌变细胞的特点。
5.细胞株的遗传物质已经发生改变，并不再具有接触生长抑制现象。
6.细胞株形态及状态不如原代细胞，相对长时间传代；而原代细胞生长是有限性。
7.细胞株在传代过程中可能发生形态的改变及变异，细胞株没有用原代细胞稳定性。
8.原代细胞的受体能够正确反映体内的生理和病理状态。
9.原代细胞的信号传导信号系统能够正确反映体内的生理和病理状态。
10.原代细胞的蛋白质生物学特征能够正确反映体内的生理和病理状态。
11.原代细胞的RNA生物学特征能够正确反映体内的生理和病理状态。
12.原代细胞的DNA生物学和遗传学特征能够正确反映体内的生理和病理状态。
13.原代细胞对外界反应能够正确反映体内的生理和病理状态。
14.原代细胞对体外检测能够正确反映体内的生理和病理状态。
15.原代细胞对毒理和致畸反应能够正确反映体内的生理和病理状态。
16.原代细胞对药物筛选能够正确反映体内的生理和病理状态。
17.原代细胞对个体化药物治疗能够正确反映体内的生理和病理状态。
18.原代细胞培养与体内原组织在形态结构和功能活动上一样，绝对是检测判断、药物治疗最好的实验对象。
19.如在中国进行体外检测和药物研发进行细胞培养，请要用中国人组织源性原代细胞。
我是用24孔板做的，换液后第二天细胞就成这样了，第一张是孔中间的细胞状态，第二张是孔边缘的细胞状态，中间的细胞状态很差，几乎成活的可能性很小了。同样的操作，为什么会有这样的结果，加液量是1ml/孔，是不是加的液体量太多了，导致孔中间的细胞缺氧？还是其他的什么原因？
就好像撒一撮芝麻在培养基那么大的地方上，我们不能知道它会怎么落。
原代细胞(primary cell) 是指从机体的组织(如人组织、小鼠组织、大鼠组织和兔组织等)经蛋白酶或其它的方法获得单个细胞并在体外进行模拟机体培养的细胞，称为原代细胞。一般认为，培养的原代的第1代细胞和传代到第10代以内的细胞统称为原代细胞培养。在人工条件下使其原代细胞生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。
细胞株(cell strain) 是通过选择法或克隆形成法从原代培养细胞中获得具有特殊性质或标志物的细胞称为细胞株。一般认为，细胞株是用单细胞分离培养或通过筛选的方法，由单细胞增殖形成的细胞群。细胞株的特殊性质或标志必须在整个培养期间始终存在。
2.关键还是生长因子等的浓度；
3.如果需要的话,需要明胶包被.
如题，本人在做结肠肿瘤细胞时，每次从医院拿回来的组织都只有一指甲盖大小，我是剔除肉眼可见的一些血丝之类的，然后就进行处理了，不知道这样对不对，有没有清除干净，不知道大家在做肿瘤原代时，是怎么判断那一部分是肿瘤组织，有什么建议么？大家可以分享自己的经验。
不知道楼主明白没有,意思是说培养基上的癌细胞可能过密,导致营养缺乏,无法满足生长分裂的需要,所以进入G0期,暂时不生长分裂.
3,MHC基因位于第六号染色体上,MHC存在于人类和哺乳动物的细胞表面.根据MHC所编码的分子结构和功能不同而将其分为1,2,3类?.1,2类分子结构相似,主要功能是向T细胞呈递抗原,是被T细胞识别的重要靶分子.1类存在于除红细胞以外的机体所以细胞膜上,2类分子仅存在于成熟B细胞,一些T细胞和抗原呈递细胞膜上,3类分子不具备上述功能,属于血清蛋白.
现在楼主应该明白了,MHC是不参与抗原抗体特异性结合的,是专门用来呈递抗原的.
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