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SubcutaneousPreADIpocytes6-WellPlate,(POOLEDDonorLot)

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尽管个体的几乎所有细胞的基因组序列是相同的,但人体由数百种具有不同功能和行为的不同细胞类型组成。细胞功能作用的变化是由一个复杂的调节网络完成的,该调节网络由调节蛋白以及调节RNA如微小RNA组成。这种网络的失调在疾病发展中起主要作用,特别是在癌症中。由RIKEN领导的国际科学联盟FANTOM现在已经在人类原代细胞中创建了第一个microRNA表达的广泛图谱。利用作为第五版FANTOM的一部分建立的RNA样本的收集,该团队对数百个人类样本的microRNA文库进行了测序,包括许多以前从未 查看更多>
2018-01-28
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原代细胞不仅广泛应用于分子、细胞生物学和生物医学基础研究,如蛋白质组学、基因组学、细胞株(系)研究、DNA,RNA和遗传学研究等,还可应用于当今热门的生物医药产业如药物筛选、药物代谢和毒理研究、癌症药物的研究等。原代细胞在生物医药领域有不可替代性作用,大部分科研人士都用到,这样是它位于搜索前列的原因。 查看更多>
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取自动物并置于体外培养中的细胞在其传代之前称其为原代细胞,原代细胞一经传代便称为细胞系,一般正常细胞的这种细胞系的寿命只能维持一定的时间期限,经过一定代数传代后衰退而死亡,称为有限细胞系.一些细胞自发地或经人工诱导等方法而转化,细胞获得持久性增殖能力,这样的细胞群体称无限细胞系,也称连续细胞系.细胞只具有持久增殖能力而无成瘤性的细胞系称为永生化细胞系.详见 李健食管上皮永生化细胞系研究进展
循环肿瘤细胞(CTC)检测.pdf123
beijing19822021-08-10
一、原代细胞与细胞系有什么区别?

根据传统定义,自组织第一次收获和接种的细胞被称为原代细胞[Freshney,R.I.(1987).CultureofAnimalCells.AManualofBasicTechnique.(NewYork,AlanR.Liss,Inc.)].这类细胞直接从组织分离,生命周期有限,经数次传代后会逐渐停止生长。原代细胞在有限的生命周期内需掌握好细胞的最大生长空间,以保持细胞群中基因型和表型的一致性。
细胞系是不断生长、分化的细胞群,因其经过遗传改造,致使其具有无限增长的潜能。体外生长的细胞系用于医疗或科研。
但实际上,经过长时间、连续的传代培养后,细胞系随着代数的增加,细胞的基因型和表型都有可能发生改变。
需要指出的是,在不同的科研小组中这些术语的定义会有所不同。许多研究员不用细胞系这个词表示细胞群,除非细胞经过了遗传改造。
二、倍增和代数有什么区别?

倍增是培养物中细胞总数的翻倍,通常是指细胞指数或对数生长期。代数是指细胞群从培养瓶中移出,传代培养过程的次数,传代培养的目的,是使细胞处于低密度以刺激其进一步生长。
三、接收到的冻存细胞该如何处理?

收到包装箱后,立即将冻存细胞从干冰移入液氮中冻存。此过程尽量快,以避免升温。不要将细胞储存在-80℃,这样会对细胞造成不可挽回的伤害。

四、有多少经验才能开始正常人类细胞培养

推荐有经验者在无菌环境下用洁净操作台工作,如果有细胞系培养经验的话,对原代细胞的培养也是很有益处的。如果你是细胞培养的初学者或打算建立细胞培养实验室,我们会为你提供帮助。请联系我们的细胞培养专家(裕恒丰科技有限公司)。
五、冻存的细胞该如何开始培养?

(1)将一管细胞从液氮罐中取出,注意保护手和眼睛。

(2)将冻存管快速的放入37℃水浴中,轻轻握住并旋转,直到管内物体完全融化。

(3)将冻存管立即从水浴中拿出,擦干,转入无菌环境。

(4)用70%的酒精冲洗冻存管,然后擦去多余酒精。

(5)打开盖子,注意手指不要碰到里面的螺纹(注意,由于冻存管有负压,开盖时可能会有少量溢出,这是正常现象)。

(6)用多聚赖氨酸(或参照说明书)包被培养瓶。多数细胞推荐的接种密度为每平方厘米5000个细胞。

(7)盖好培养瓶的盖子,轻轻摇晃培养瓶以使细胞分布均匀。若需要气体交换可打开盖子。

(8)将培养瓶放入培养箱中(37℃,5%CO2,95%空气)

(9)放入培养箱后第6-16小时更换一次培养基,以去除残留的二甲基亚枫和未贴壁的细胞。

六、当我第一次复苏正常人类细胞时,是否需要先离心细胞以去除二甲基亚枫吗?

第一次复苏正常人类冻存细胞时,我们不推荐离心去除二甲基亚枫。与残留的二甲基亚枫相比,离心过程对细胞的伤害更大,尤其是不适当的高速离心时。我们的经验是:如果二甲基亚枫的浓度很低,细胞不会受毒害。如果你将1ml细胞放入含15ml培养基的T-75培养瓶中,二甲基亚枫的浓度将小于0.67%,没有发现负面影响。实际上,如果细胞的接种密度为每平方厘米5000-10000个,二甲基亚枫的浓度很低。

七、细胞培养过程中,多久更换一次培养基?

这取决于细胞生长的速度。一般而言2-3天更换一次培养基,许多细胞培养实验室通常在周一,周三,周五更换培养基。
注意:冻存细胞复苏后,在6-16小时内更换培养基,以去除残留的二甲基亚枫和死亡的细胞。
八、我能扩增培养和再次冻存Sciencell的正常人类细胞吗?

这取决于细胞的类型。一些细胞类型像神经细胞,神经胶质细胞和一些生长缓慢的上皮细胞,不推荐扩增培养和再次冻存。其它的细胞类型像成纤维细胞、星形细胞、肾系膜细胞、星形胶质细胞等等,可以扩增培养和再次冻存。然而,需要注意的是再次冻存的过程可能导致细胞生长性能的改变。如果你想要再次冻存细胞,请亲自咨询我们的技术支持并使用ScienCell无血清细胞冻存液(SF-CFM)和特定的无血清培养基,以获得最佳冻存效果。
九、我能长时间的冷冻保存ScienCell的原代细胞培养基吗?

我们不推荐冷冻保存培养基,高营养的培养基经过冷冻和复温后,可能导致培养基成分的不可逆降解,从而影响细胞的生长。
十、培养瓶中应该加入多少体积的培养基?

我们推荐的用量为:T-25培养瓶5ml,T-75培养瓶15ml,T-150培养瓶30ml。文章来源北京裕恒丰科技有限公司官方微信

实验室培养的原代猪肺微血管内皮细胞出现了图中黑色线状类似虫子一样的东西的污染,培养基无明显浑浊变化,细胞形态也正常,更换培养基后这种情况仍然存在,求大神告知这些小东西到底是什么,是否会对细胞造成影响


原代心肌细胞培养 123
玖柒殷儿00282021-08-06
原代培养心肌细胞作为一种主要的研究模型,被广泛应用于心血管研究之中.我们实验室经过长期尝试,摸索出了一些行之有效的方法,并积累了一些经验,现总结如下:

1新生大鼠鼠龄的选择新生大鼠心肌细胞在出生后3 d内具有部分的增殖能力,成年大鼠心肌细胞则为终末分化细胞,不再具有分裂增殖能力.因此,大鼠出生时间越短,其心肌细胞分离后成活率越高,越容易贴壁生长.大量观测表明,选择1~3 d龄大鼠分离其心肌细胞进行原代培养较为理想.其中尤以半日龄大鼠心肌细胞培养效果最佳.

2消化酶的选择及使用
新生大鼠心肌细胞的分离可采用组织块法和消化法,前者因不易获得密度均一的细胞且难控制成纤维细胞的生长而较少采用.消化法中常使用的酶有3种:胰蛋白酶、胶原酶I或Ⅱ以及透明质酸酶.透明质酸酶多与胰蛋白酶或胶原酶联合应用.胰蛋白酶作用较强,容易造成心肌细胞损坏.胶原酶作用较缓和,能消化细胞间质中的胶原纤维以释放细胞,对细胞损伤小,且在新生大鼠心肌组织,以胶原I为主,故我们选用胶原酶I.文献报道胶原酶的工作浓度一般在0.6~1 g・L1,我们使用的为0.8 g・L1.胶原酶最好现用现配.

3消化程度的把握
新生大鼠心肌细胞对酶消化极为敏感.消化过度可使肌原纤维出现萎缩,细胞死亡率增加或丧失贴壁能力及搏动能力;消化不足,细胞聚集成团,无法分清细胞边界,难以形态学观测.消化过程中使用磁力搅拌器时应注意1)转速一般控制在60~80 r・min1左右.(2)每次消化的时间须结合消化酶浓度确定.(3)将粘附在搅拌子上的心肌组织吹散,使酶液充分接触组织.(4)适宜温度为35~37℃.(5)当组织由红转白呈半透明状态时,应停止消化.

4接种的细胞密度
心肌细胞接种密度不仅影响细胞间的相互接触,进而影响细胞对肥大刺激的反应,而且影响长期培养细胞的成活率.接种细胞的绝对数量应经精确计算.一般而言,应根据实验的观测目的决定单位面积上的细胞数量.例如,如作形态学观测,六孔板中每孔的接种细胞数量应控制在1×105~2×105个;若需收获心肌细胞作mRNA或蛋白表达水平的观测,则每孔的接种密度可增加到5×105~6×105个.
准备养细胞,原代培养,刚刚取下来的组织块怎么保存吗
几小时内用的可以放在冰盒里,一个月左右的可以放在-20度冰箱,更长时间的就要放-80度冰箱了。
从接种的第一天细胞就是脏脏的~培养液里也是老有黑点~用了双抗,还有两性和泰乐~~~细胞一直在长…但是今天突然发现这种黑色东西,跟细胞不在一个层面~肉眼看皿也没有黑色脏东西~液体也澄清
动物细胞培养有什么特点?_123
钩距黄堇662017-10-01
原代培养离体时间短,遗传性状和体内细胞相似,适于做细胞形态、功能和分化等研究。一般动物和人的所有组织都可以用于培养,但幼体组织和细胞(如胚胎组织、幼仔的脏器等)更容易进行原代培养。
怎样才能在实验中提高原代细胞培养的成功率啊???
1.培养基最好是培养原代细胞专门的培养基或说是配套的培养基; 2.关键还是生长因子等的浓度; 3.如果需要的话,需要明胶包被.
原代细胞(primary cell) 是指从机体的组织(如人组织、小鼠组织、大鼠组织和兔组织等)经蛋白酶或其它的方法获得单个细胞并在体外进行模拟机体培养的细胞,称为原代细胞。一般认为,培养的原代的第1代细胞和传代到第10代以内的细胞统称为原代细胞培养。在人工条件下使其原代细胞生存、生长、繁殖和传代,进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。
细胞株(cell strain) 是通过选择法或克隆形成法从原代培养细胞中获得具有特殊性质或标志物的细胞称为细胞株。一般认为,细胞株是用单细胞分离培养或通过筛选的方法,由单细胞增殖形成的细胞群。细胞株的特殊性质或标志必须在整个培养期间始终存在。
细胞系(cell line) 是原代细胞经首次传代成功后即为细胞系。泛指一般可能传代的细胞。其中能够连续传代的细胞叫做连续细胞系或无限细胞系,不能连续培养的称为有限细胞系。大多数二倍体细胞为有限细胞系。由原先存在于原代培养物中的细胞世系所组成。如果不能继续传代,或传代次数有限, 可称为有限细胞系(finite cell line), 如可以连续培养, 则称为连续细胞系(continuous cell line), 培养50代以上并无限培养下去。人类肿瘤细胞,在体外培养半年以上,生长稳定,并连续传代的即可称为连续性株或系。
是胰蛋白酶或胶原蛋白酶吧,使组织分散成单个细胞
原理 将动物机体的各种组织从机体中取出,经各种酶(常用胰蛋白酶)、螯合剂(常用EDTA)或机械方法处理,分散成单细胞,置合适的培养基中培 养,使细胞得以生存、生长和繁殖,这一过程称原代培养。

操作步骤
(一)胰酶消化法
1、器材:将孕鼠或新生小鼠拉颈椎致死,置75%酒精泡2—3秒钟(时间不能过长、以免酒精从口和肛门浸入体内)再用碘酒消毒腹部,取胎鼠带 入超净台内(或将新生小鼠在超净台内)解剖取肝脏,置平皿中。
2、用Hank’s液洗涤三次,并剔除脂肪,结缔组织,血液等杂物。
3、用手术剪将肝脏剪成小块(1mm2),再用Hank’s液洗三次,转移至小青霉素瓶中。
4、视组织块量加入5—6倍的0.25%胰酶液,37℃中消化20—40分钟,每隔5分钟振荡一次,或用吸管吹打一次,使细胞分离。
5、加入3—5ml培养液以终止胰酶消化作用(或加入胰酶抑制剂)。
6、静置5—10分钟,使未分散的组织块下沉,取悬液加入到离心管中。
7、1000rpm,离心10分钟,弃上清液。
8、加入Hank’s液5ml,冲散细胞,再离心一次,弃上清液。
9、加入培养液l—2 ml(视细胞量),血球计数板计数。
10、将细胞调整到5×105/ml左右,转移至25ml细胞培养瓶中,37℃下培养。 上述消化分离的方法是最基本的方法,在该方法的基础上,可进一步分离不同细胞。细胞分离的方法各实验室不同,所采用的消化酶也不相同(如 胶原酶,透明质酶等)。
(二)组织块直接培养法 自上方法第3步后,将组织块转移到培养瓶,贴附与瓶底面。翻转瓶底朝上,将培养液加至瓶中,培养液勿接触组织块。入37℃静置3—5小时,轻 轻翻转培养瓶,使组织浸入培养液中(勿使组织漂起),37℃继续培养。
一个瓶子中的细胞,如果可以培养到50代,怎么分原代培养的和传代培养的