Metabolic disease is associated more closely with the accumulation of abdominal adipose in specific visceral depots. Recent studies have implicated omental and mesenteric adipose tissue in obesity-related insulin resistance, atherosclerosis, and type 2 diabetes. To provide the most relevant systems for investigating obesity-related morbidities, ZenBio is offering visceral derived human preadipocytes and cultured adipocytes to the research community.
Preadipocytes are isolated from omental, mesenteric, or perirenal adipose tissue and are tested for their ability to differentiate in culture to mature adipocytes. Preadipocytes are available cryopreserved or plated and mature adipocytes are available in a variety of plated formats.
Most cells are derived from obese non-diabetic patients (BMI>30), but there are limited quantities of preadipocytes and adipocytes from patients of BMI <27 as well as some lots of cells available from diabetic patients. Lots derived from multiple patients are also available as Pooled- or Super-lots.
There are limited quantities of donor matched omental and subcutaneous preadipocytes or cultured adipocytes for studies comparing the two depots.
OMENTAL ADIPOSE
The greater omentum is the largest peritoneal fold within the abdomen and has an immunologic function. The omentum aids in isolating peritoneal infection and absorbing contaminants through the mesothelial stomata. Adipokines and fatty acids from this depot have direct access to the liver through the portal circulation which may lead to hepatic dysfunction.
MESENTERIC ADIPOSE
Mesenteric adipose lies within the thin layers of the peritoneal mesothelium connecting the small and large intestine. Adipose accumulation within this depot correlates with an increased risk of metabolic disease.
PERIRENAL ADIPOSE
Perirenal adipose resides near the kidneys outside the peritoneal cavity. Fat from this depot has not been correlated with increased risk for metabolic disease.
Specially formulated media are available for use with our omental preadipocytes and adipocytes.
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细胞系是不断生长,分化的细胞群,因其经过遗传改造,致使其具有无限增长的潜能.体外生长的细胞系用于医疗或科研.实际上,连续细胞系可以用大量次培养基
1新生大鼠鼠龄的选择新生大鼠心肌细胞在出生后3 d内具有部分的增殖能力，成年大鼠心肌细胞则为终末分化细胞，不再具有分裂增殖能力.因此，大鼠出生时间越短，其心肌细胞分离后成活率越高，越容易贴壁生长.大量观测表明，选择1~3 d龄大鼠分离其心肌细胞进行原代培养较为理想.其中尤以半日龄大鼠心肌细胞培养效果最佳.
2消化酶的选择及使用
新生大鼠心肌细胞的分离可采用组织块法和消化法，前者因不易获得密度均一的细胞且难控制成纤维细胞的生长而较少采用.消化法中常使用的酶有3种：胰蛋白酶、胶原酶I或Ⅱ以及透明质酸酶.透明质酸酶多与胰蛋白酶或胶原酶联合应用.胰蛋白酶作用较强，容易造成心肌细胞损坏.胶原酶作用较缓和，能消化细胞间质中的胶原纤维以释放细胞，对细胞损伤小，且在新生大鼠心肌组织，以胶原I为主,故我们选用胶原酶I.文献报道胶原酶的工作浓度一般在0.6~1 g・L1,我们使用的为0.8 g・L1.胶原酶最好现用现配.
3消化程度的把握
新生大鼠心肌细胞对酶消化极为敏感.消化过度可使肌原纤维出现萎缩，细胞死亡率增加或丧失贴壁能力及搏动能力;消化不足，细胞聚集成团，无法分清细胞边界，难以形态学观测.消化过程中使用磁力搅拌器时应注意1)转速一般控制在60~80 r・min1左右.(2)每次消化的时间须结合消化酶浓度确定.(3)将粘附在搅拌子上的心肌组织吹散，使酶液充分接触组织.(4)适宜温度为35~37℃.(5)当组织由红转白呈半透明状态时，应停止消化.
4接种的细胞密度
心肌细胞接种密度不仅影响细胞间的相互接触，进而影响细胞对肥大刺激的反应，而且影响长期培养细胞的成活率.接种细胞的绝对数量应经精确计算.一般而言，应根据实验的观测目的决定单位面积上的细胞数量.例如，如作形态学观测,六孔板中每孔的接种细胞数量应控制在1×105~2×105个;若需收获心肌细胞作mRNA或蛋白表达水平的观测，则每孔的接种密度可增加到5×105~6×105个.
操作步骤
（一）胰酶消化法
1、器材：将孕鼠或新生小鼠拉颈椎致死，置75%酒精泡2—3秒钟（时间不能过长、以免酒精从口和肛门浸入体内）再用碘酒消毒腹部，取胎鼠带 入超净台内（或将新生小鼠在超净台内）解剖取肝脏，置平皿中。
2、用Hank’s液洗涤三次，并剔除脂肪，结缔组织，血液等杂物。
3、用手术剪将肝脏剪成小块（1mm2），再用Hank’s液洗三次，转移至小青霉素瓶中。
4、视组织块量加入5—6倍的0.25%胰酶液，37℃中消化20—40分钟，每隔5分钟振荡一次，或用吸管吹打一次，使细胞分离。
5、加入3—5ml培养液以终止胰酶消化作用（或加入胰酶抑制剂）。
6、静置5—10分钟，使未分散的组织块下沉，取悬液加入到离心管中。
7、1000rpm，离心10分钟，弃上清液。
8、加入Hank’s液5ml，冲散细胞，再离心一次，弃上清液。
9、加入培养液l—2 ml（视细胞量），血球计数板计数。
10、将细胞调整到5×105/ml左右，转移至25ml细胞培养瓶中，37℃下培养。 上述消化分离的方法是最基本的方法，在该方法的基础上，可进一步分离不同细胞。细胞分离的方法各实验室不同，所采用的消化酶也不相同（如 胶原酶，透明质酶等）。
（二）组织块直接培养法 自上方法第3步后，将组织块转移到培养瓶，贴附与瓶底面。翻转瓶底朝上，将培养液加至瓶中，培养液勿接触组织块。入37℃静置3—5小时，轻 轻翻转培养瓶，使组织浸入培养液中（勿使组织漂起），37℃继续培养。
根据传统定义，自组织第一次收获和接种的细胞被称为原代细胞[Freshney,R.I.(1987).CultureofAnimalCells.AManualofBasicTechnique.(NewYork,AlanR.Liss,Inc.)].这类细胞直接从组织分离，生命周期有限，经数次传代后会逐渐停止生长。原代细胞在有限的生命周期内需掌握好细胞的最大生长空间，以保持细胞群中基因型和表型的一致性。
细胞系是不断生长、分化的细胞群，因其经过遗传改造，致使其具有无限增长的潜能。体外生长的细胞系用于医疗或科研。
但实际上，经过长时间、连续的传代培养后，细胞系随着代数的增加，细胞的基因型和表型都有可能发生改变。
需要指出的是，在不同的科研小组中这些术语的定义会有所不同。许多研究员不用细胞系这个词表示细胞群，除非细胞经过了遗传改造。
二、倍增和代数有什么区别？
倍增是培养物中细胞总数的翻倍，通常是指细胞指数或对数生长期。代数是指细胞群从培养瓶中移出，传代培养过程的次数，传代培养的目的，是使细胞处于低密度以刺激其进一步生长。
三、接收到的冻存细胞该如何处理？
收到包装箱后，立即将冻存细胞从干冰移入液氮中冻存。此过程尽量快，以避免升温。不要将细胞储存在-80℃，这样会对细胞造成不可挽回的伤害。
四、有多少经验才能开始正常人类细胞培养？
推荐有经验者在无菌环境下用洁净操作台工作，如果有细胞系培养经验的话，对原代细胞的培养也是很有益处的。如果你是细胞培养的初学者或打算建立细胞培养实验室，我们会为你提供帮助。请联系我们的细胞培养专家（裕恒丰科技有限公司）。
五、冻存的细胞该如何开始培养？
(1)将一管细胞从液氮罐中取出，注意保护手和眼睛。
(2)将冻存管快速的放入37℃水浴中，轻轻握住并旋转，直到管内物体完全融化。
(3)将冻存管立即从水浴中拿出，擦干，转入无菌环境。
(4)用70％的酒精冲洗冻存管，然后擦去多余酒精。
(5)打开盖子，注意手指不要碰到里面的螺纹（注意，由于冻存管有负压，开盖时可能会有少量溢出，这是正常现象）。
(6)用多聚赖氨酸（或参照说明书）包被培养瓶。多数细胞推荐的接种密度为每平方厘米5000个细胞。
(7)盖好培养瓶的盖子，轻轻摇晃培养瓶以使细胞分布均匀。若需要气体交换可打开盖子。
(8)将培养瓶放入培养箱中（37℃，5%CO2，95%空气）
(9)放入培养箱后第6-16小时更换一次培养基，以去除残留的二甲基亚枫和未贴壁的细胞。
六、当我第一次复苏正常人类细胞时，是否需要先离心细胞以去除二甲基亚枫吗？
第一次复苏正常人类冻存细胞时，我们不推荐离心去除二甲基亚枫。与残留的二甲基亚枫相比，离心过程对细胞的伤害更大，尤其是不适当的高速离心时。我们的经验是：如果二甲基亚枫的浓度很低，细胞不会受毒害。如果你将1ml细胞放入含15ml培养基的T-75培养瓶中，二甲基亚枫的浓度将小于0.67％，没有发现负面影响。实际上，如果细胞的接种密度为每平方厘米5000-10000个，二甲基亚枫的浓度很低。
七、细胞培养过程中，多久更换一次培养基？
这取决于细胞生长的速度。一般而言2-3天更换一次培养基，许多细胞培养实验室通常在周一，周三，周五更换培养基。
注意：冻存细胞复苏后，在6-16小时内更换培养基，以去除残留的二甲基亚枫和死亡的细胞。
八、我能扩增培养和再次冻存Sciencell的正常人类细胞吗？
这取决于细胞的类型。一些细胞类型像神经细胞，神经胶质细胞和一些生长缓慢的上皮细胞，不推荐扩增培养和再次冻存。其它的细胞类型像成纤维细胞、星形细胞、肾系膜细胞、星形胶质细胞等等，可以扩增培养和再次冻存。然而，需要注意的是再次冻存的过程可能导致细胞生长性能的改变。如果你想要再次冻存细胞，请亲自咨询我们的技术支持并使用ScienCell无血清细胞冻存液（SF-CFM）和特定的无血清培养基，以获得最佳冻存效果。
九、我能长时间的冷冻保存ScienCell的原代细胞培养基吗？
我们不推荐冷冻保存培养基，高营养的培养基经过冷冻和复温后，可能导致培养基成分的不可逆降解，从而影响细胞的生长。
十、培养瓶中应该加入多少体积的培养基？
我们推荐的用量为：T-25培养瓶5ml，T-75培养瓶15ml，T-150培养瓶30ml。文章来源北京裕恒丰科技有限公司官方微信
1.培养基最好是培养原代细胞专门的培养基或说是配套的培养基; 2.关键还是生长因子等的浓度; 3.如果需要的话,需要明胶包被.
关于第一问能回答的详细点么？谢谢各位大虾~~
几小时内用的可以放在冰盒里，一个月左右的可以放在-20度冰箱，更长时间的就要放-80度冰箱了。
作者：PriCells原生原代
1.原代细胞培养最大优点是：细胞直接来源于机体组织，生物性状尚未发生大的变化，在一定程度上能够反映体内的状态。
2.细胞株和原代细胞不是完全一样。
3.并非每一种组织源性细胞都有相应的细胞株，有些细胞必须养原代，
4.细胞株是来源于原代细胞，原代细胞导入了病毒增殖基因并转变为细胞株，细胞株带有癌变细胞的特点。
5.细胞株的遗传物质已经发生改变，并不再具有接触生长抑制现象。
6.细胞株形态及状态不如原代细胞，相对长时间传代；而原代细胞生长是有限性。
7.细胞株在传代过程中可能发生形态的改变及变异，细胞株没有用原代细胞稳定性。
8.原代细胞的受体能够正确反映体内的生理和病理状态。
9.原代细胞的信号传导信号系统能够正确反映体内的生理和病理状态。
10.原代细胞的蛋白质生物学特征能够正确反映体内的生理和病理状态。
11.原代细胞的RNA生物学特征能够正确反映体内的生理和病理状态。
12.原代细胞的DNA生物学和遗传学特征能够正确反映体内的生理和病理状态。
13.原代细胞对外界反应能够正确反映体内的生理和病理状态。
14.原代细胞对体外检测能够正确反映体内的生理和病理状态。
15.原代细胞对毒理和致畸反应能够正确反映体内的生理和病理状态。
16.原代细胞对药物筛选能够正确反映体内的生理和病理状态。
17.原代细胞对个体化药物治疗能够正确反映体内的生理和病理状态。
18.原代细胞培养与体内原组织在形态结构和功能活动上一样，绝对是检测判断、药物治疗最好的实验对象。
19.如在中国进行体外检测和药物研发进行细胞培养，请要用中国人组织源性原代细胞。
