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biopioneerinc/Human Recombinant TGF-beta, 1ug/1/SC-038-1
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Description:Human TGFb1 (GenBank Accession #NM_000660), a.a. 279-390(end), disulfide-linked homodimer. MW= ~25 kDa.
Source: FreeStyle 293-F cells.
Endotoxin Level: <1 EU/μg.
Activity assay: measured by TGFβ1’s ability to inhibit mIL-4-dependent proliferation of HT-2 mouse helper T cells. The ED50 is <0.05ng/ml.
Application: Useful for cell culture and for the study of signaling and apoptotic pathways.
Description:Human TGFb1 (GenBank Accession #NM_000660), a.a. 279-390(end), disulfide-linked homodimer. MW= ~25 kDa.
Source: FreeStyle 293-F cells.
Formulation: Lyophilized from a 0.2 μM filtered, aqueous solution
Reconstitution: Supplied as a lyophilized solid. Reconstitute in 0.2 M acetic acid with 0.1% BSA.
Stability:>6 months at –80°C (as a solid). Store reconstituted protein in aliquots at –80°C for up to 3 months. Avoid freeze/thaw cycles.
References:
Biopioneer Brand:
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2021-09-08
武汉金开瑞生物工程有限公司在发布的稳转细胞株构建供应信息，浏览与稳转细胞株构建相关的产品或在搜索更多与稳转细胞株构建相关的内容。 查看更多
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实验原理 稳定转染就是将外源基因DNA整合到宿主细胞染色体上，使宿主细胞可长期表达目的基因及蛋白。需要在瞬时转染基础上对靶细胞进行筛选或者应用高转染效率的病毒，根据不同基因载体中所含有的抗性标志选用相应的药物进行细胞传代，从而得到可稳定表达目的基因的细胞系。 瞬时转染/感染的特点：外源DNA不整合到宿主的染色体中，一个宿主细胞中可以存在多个拷贝数，产生短时间内的高水平的表达(只能持续几天)；外源基因的表达水平不... 查看更多
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2021-08-11
上海锐赛生物技术有限公司在发布的细胞的稳转株构建供应信息，浏览与细胞的稳转株构建相关的产品或在搜索更多与细胞的稳转株构建相关的内容。 查看更多
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2021-09-14
稳定转染和瞬时转染，细胞转染的步骤基本相同，只是在转染后的细胞处理会不一样。由于瞬时转染只能维持几天，故在转染12～72后就可以在蛋白或基因水平进行相应的检测了。稳转细胞系通常需要通过一些选择性标记反复筛选，得到稳定转染的同源细胞系。通常构建的载体上有两个抗性基因，如，氨苄青霉素和新霉素。那么建立稳转细胞系时该用哪种抗生素来筛细胞呢？很多真核表达质粒上都有两个抗性基因，但一般其中只有一个抗性可以用来筛细胞。其中氨苄青霉素对细胞是没有筛选... 查看更多
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2021-09-02
Isolate cells and dissociate to single cell suspension (can use Gibco Cell Dissociation Buffer, Accutase or Trypsin)Wash with 10% FBS/DMEM:F12For surface marke 查看更多
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2021-09-09
上海钰博生物科技有限公司在发布的TLR4 Stable Cell Line、TLR4 稳转细胞株、TLR4 Stably Transfected HEK 293 Cells、TLR4 稳转HEK 293细胞株供应信息，浏览与TLR4 Stable Cell Line、TLR4 稳转细胞株、TLR4 Stably Transfected HEK 293 Cells、TLR4 稳转HEK 293细胞株相关的产品或在搜索更多与TLR4 Stable Cell Line、TLR4 稳转细胞株、TLR4 Stabl 查看更多
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2021-08-28
ProceduresCover a 48-well plate with Matrigel (100μl/well) of and incubate for 30 min at 37°C, 5% CO2. Sacrifice the1-2 month old mice/rats (WT/mutant) 查看更多
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2021-08-25
Preparation of Copy Standards for PCR GenotypingPCR screens must be designed to detect transgene DNA at the single copy level. To demonstrate this level of sen 查看更多
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2021-09-23
北京英茂盛业生物科技有限公司在发布的MDCK-EGFP稳定细胞株（犬肾细胞EGFP稳转细胞系）供应信息，浏览与MDCK-EGFP稳定细胞株（犬肾细胞EGFP稳转细胞系）相关的产品或在搜索更多与MDCK-EGFP稳定细胞株（犬肾细胞EGFP稳转细胞系）相关的内容。 查看更多
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2021-08-05
hl-60细胞是一种用于实验室研究某些血细胞如何形成的细胞株。在培养基中补充牛胎儿血清.HEPES，抗生素类化学物质，L-谷氨酰胺，通过悬浮培养，hl-60细胞能持续增殖。... 查看更多
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2021-09-04
Let human ES cells grow until the colonies are large and the cells are pretty piled up - about the time when you would normally split or even a day past that.T 查看更多
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G418筛选稳定表达细胞系经验总结 实验方法123
天使之翼_即徘22017-10-02
瞬时转染是指外源基因进入受体细胞后，存在于游离的载体上，不整合到细胞的染色体上，结果是短暂的高水平表达，可在外源基因导入细胞24～96h内检测表达效果，表达水平与位置无关，不会受到周围染色体元件的影响。超螺旋质粒转染更倾向于瞬时表达。
对于瞬时转染的检测：如果有报告基因，就通过报告基因的表达看转染成功与否；没有报告基因的话，就在24～96h内收获细胞通过RT-PCR和WB来鉴定。
对于瞬时转染的检测：如果有报告基因，就通过报告基因的表达看转染成功与否；没有报告基因的话，就在24～96h内收获细胞通过RT-PCR和WB来鉴定。
稳转株的制备_药物123
kahn922021-07-23
稳定转染的细胞株，就是转染后质粒可以稳定整合到基因组上不会因细胞分裂而丢失。区别于质粒瞬时转染不能长时间保留质粒在细胞里。
利用慢病毒载体快速建立表达外源基因的哺乳动物细胞系【论文分享...123
zhiyun_10892017-10-02
真核表达载体包括腺病毒载体和慢病毒载体，在真核细胞内用于表达目的蛋白的载体都可以叫做真核载体。 腺病毒载体携带外源基因较大，可瞬时高表达。 慢病毒载体携带外源基因较小些，但可以重组入细胞基因组，稳定高表达。
1.将外源基因插入慢病毒载体
2.将构建完成的载体与慢病毒包装质粒混合，共转染靶细胞
3.收集病毒液
4.用病毒液感染靶细胞
5.用载体上带的抗生素进行筛选，如果没有，可以用无限稀释法
6.获得稳转株
1.将外源基因插入慢病毒载体
2.将构建完成的载体与慢病毒包装质粒混合，共转染靶细胞
3.收集病毒液
4.用病毒液感染靶细胞
5.用载体上带的抗生素进行筛选，如果没有，可以用无限稀释法
6.获得稳转株
利用改良的CRISPR_Cas9基因编辑系统构建HeLa细胞SND1基因敲除...123
小Z践踏6632017-10-06
基因敲出质粒转染可以构建稳定细胞株
一种是脂质体转染后,单克隆筛选稳定细胞株.另外一种是应用逆转录病毒,慢病毒转染,筛选稳定细胞株.
脂质体转染：在转染24小时后,消化细胞并计数.将细胞种到96孔板,保证每个孔2-3个细胞,这样才能得到单克隆.待细胞贴壁后,加入抗生素筛选.筛选时间和浓度视细胞而定.一般G418一个星期作用,嘌呤霉素2-3天.
脂质体法筛单克隆时间较长,且效率低,大概只有1%.
病毒转染：先要用包装细胞,一般为293细胞,包装出病毒,再用病毒转染目的细胞.包装病毒视不同类型的病毒而定,一般要3-5天的时间.包装好的病毒要测滴度,根据滴度决定转染目的细胞的病毒量.转染目的细胞1-2天后加抗生素筛选得到稳定细胞株.
病毒转染得到稳定细胞株的效率高,只是步骤繁琐.
一种是脂质体转染后,单克隆筛选稳定细胞株.另外一种是应用逆转录病毒,慢病毒转染,筛选稳定细胞株.
脂质体转染：在转染24小时后,消化细胞并计数.将细胞种到96孔板,保证每个孔2-3个细胞,这样才能得到单克隆.待细胞贴壁后,加入抗生素筛选.筛选时间和浓度视细胞而定.一般G418一个星期作用,嘌呤霉素2-3天.
脂质体法筛单克隆时间较长,且效率低,大概只有1%.
病毒转染：先要用包装细胞,一般为293细胞,包装出病毒,再用病毒转染目的细胞.包装病毒视不同类型的病毒而定,一般要3-5天的时间.包装好的病毒要测滴度,根据滴度决定转染目的细胞的病毒量.转染目的细胞1-2天后加抗生素筛选得到稳定细胞株.
病毒转染得到稳定细胞株的效率高,只是步骤繁琐.
pcDNA3.1能做G418筛选,获得稳定转染株吗– 960问答123
閁錒0952么2017-10-02
不能，它有Neomycin基因，可以用新霉素进行稳定株筛选，获得稳定株。
siRNA干扰常见问题123
有恃无恐03502021-07-31
这个要看细胞的状态和蛋白表达特点。
推荐了解“主细胞库”“工作细胞库”这两个名词。
推荐了解“主细胞库”“工作细胞库”这两个名词。
【求助】逆转录病毒载体不带GFP,如何进行构建稳转细胞株?谢谢 ...123
drjasionzl2012-12-11
【交流】两种腺病毒载体可以同时转染一种细胞吗? 核酸基因技术...123
daskjfha1502017-10-02
不能
【实验求助】抑癌基因功能研究一定要稳转的细胞株吗? 细胞生物...123
zph20042021-08-03
知识分享:【维真生物】稳转株构建流程_细胞系123
2021-08-05
稳转细胞系常用的方法有质粒转染和慢病毒转染进行稳定株筛选，前者操作简单，但是成功率很低，费时，假阳性高，最后可能导致几个月的工作白干了，慢病毒稳定株筛选方法比较简单，并且慢病毒本身具有稳定整合入基因组的特性，没有假阳性，慢病毒包装可能相对比质粒构建难度大，如果经费充足可以直接找公司包毒的。
关于稳转细胞株培养出现的问题 细胞技术讨论版论坛123
大悦nju2017-06-09
G418筛选稳定表达细胞系PROTOCOL 实验方法123
二洋旣獎b38JV2021-08-06
稳定细胞株筛选是一个长期的过程，稳定细胞株筛选优化，有许多条件需要摸索，而且是从源头开始
① 在构建载体时，目的基因直接整合到细胞染色体组上，最好不要通过先瞬转在筛选稳定细胞株的这种方法，因为转染效率没有保证
② 高表达载体的构建，哺乳动物表达量一直是它自身的缺点，最好根据高表达载体定向的驯化细胞，提高蛋白表达量
③ 细胞的选择，筛选稳定细胞株我们常用的细胞是CHO，中国仓鼠卵巢细胞，由于CHO具有诸多的优点因此适合用于筛选稳定细胞株，而HEK293细胞则常用于瞬时转染
④ 后期的筛选，双抗预防污染，筛选细胞的时候抗生素浓度一定要做预实验，而且转染的时候不能有抗生素，关于细胞转染 稳定细胞系构建的相关理论
① 在构建载体时，目的基因直接整合到细胞染色体组上，最好不要通过先瞬转在筛选稳定细胞株的这种方法，因为转染效率没有保证
② 高表达载体的构建，哺乳动物表达量一直是它自身的缺点，最好根据高表达载体定向的驯化细胞，提高蛋白表达量
③ 细胞的选择，筛选稳定细胞株我们常用的细胞是CHO，中国仓鼠卵巢细胞，由于CHO具有诸多的优点因此适合用于筛选稳定细胞株，而HEK293细胞则常用于瞬时转染
④ 后期的筛选，双抗预防污染，筛选细胞的时候抗生素浓度一定要做预实验，而且转染的时候不能有抗生素，关于细胞转染 稳定细胞系构建的相关理论
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