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yesbiotech/mAb anti-Human TGF-β, 2C5/0.1 mg/MO-C40009B
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yesbiotech/mAb anti-Human TGF-β, 2C5/0.1 mg/MO-C40009B
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yesbiotech
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Details

Description:Mouse monoclonal antibody to human Transforming Growth Factor beta (TGF-β)

Purification: Protein G affinity purified

Product Type:Primary antibody

Target Protein:Human TGF-β

Immunogen:TGF-βfrom human platelets

Fusion Myeloma: Sp2/0-Ag14

Specificity:Western blotting demonstrated that this antibody reacts with the dimeric (25 kDa) and monomeric (12.5 kDa.) forms of TGF-β under both non-reducing and reducing conditions respectively. This antibody recognizes both human platelet-derived and recombinant TGF-β in ELISA.

Species Reactivity: Human, others not tested.

Host / Isotype: Mouse, IgG1 Kappa

Formulation: Lyophilized in 0.01M PBS, pH 7.0.

Reconstitution:Double distilled water is recommended and to adjust the final concentration to 1.00mg/mL.

Storage: Store at -20oC

Research Area:Growth Factors and Their Receptors, Angiogenesis

Background:

Transforming growth factor beta (TGF-β) has three isoforms (TGF-β1, TGF-β2, and TGF-β3) with similar functions.

The cytokine is a homodimer linked by disulfide bind. Inside cells, the cytokine forms a small latent complex with latent associated peptide (LAP). This small complex binds to latent TGF-β binding protein (LTBP) to be secreted to extra-cellular matrix. Disassociation of the latent proteins from TGF-β results in the release of the cytokine to its receptor. The process is called activation, which can be influenced by various factors, including proteases, metalloproteases, extreme pH, mild acidic condition, reactive oxygen species and integrins.

TGF-β is an anti-proliferation factor in normal cells. It increases the synthesis of p15 and p21, which can block the cyclin: CDK complex, and causes cells to stop at G1 phase. The cytokine can induce apoptosis through both SMAD and DAXX pathways. In cancer cells, TGF-β signaling is altered and TGF-β no longer stops cell proliferation.

Applications:

ELISA: The antibody reacts with TGF-β.

Western Blot: This antibody when used at concentration of 5-20ng/mL will allow visualization of 100ng/lane of TGF-β.

References:

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Product SpecificitymAb anti-Human TGF-β, 2C5
ApplicationEIA, WB
Size0.1 mg
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hES media has a two week shelf life.hES cells should be cultured in 4, 6, 24, 48, 96 well plates. Growing cells in flasks is not recommended because it is very 查看更多>
实验原理       稳定转染就是将外源基因DNA整合到宿主细胞染色体上,使宿主细胞可长期表达目的基因及蛋白。需要在瞬时转染基础上对靶细胞进行筛选或者应用高转染效率的病毒,根据不同基因载体中所含有的抗性标志选用相应的药物进行细胞传代,从而得到可稳定表达目的基因的细胞系。        瞬时转染/感染的特点:外源DNA不整合到宿主的染色体中,一个宿主细胞中可以存在多个拷贝数,产生短时间内的高水平的表达(只能持续几天);外源基因的表达水平不... 查看更多>
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based on splitting onto on plateWarm collagenase media to 37°C in a water bath.Aspirate media off of cell culture plate.Add the following amount of collagenase 查看更多>
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1、请教各位老师,转染质粒DNA的HepG2及HUH7细胞,如何筛选稳转细胞株
2、有限稀释法有没有protocol?
构建稳转细胞系123
gleb7532017-10-02
稳定转染或持久的转染是用于建立克隆的细胞系,这种细胞系中转染的目的基因整合到染色体DNA中并指导适量目的蛋白的合成。一般来说(由细胞类型决定),形成稳定转染细胞的效率比瞬时转染(transient transfection)的效率低1到2个数量级。利用可选择的遗传标记物有利于从非转染细胞的中分离出稀少的稳定转染物
两种质粒是可以同时进入同一个感受态细胞的,比如构建腺病毒载体时.但是要求两种质粒进入同一个感受态细胞,转化效率非常低,一般需要电转或者其他的特殊处理.
由于质粒的不兼容性,拥有同种复制子的质粒不能在同一细胞内稳定共存,经过几代的复制,会质粒丢失,所以并不是任何两个或两个以上质粒都可以在同一细胞内稳定存在,但是可以同时进入.
稳定转染的细胞株,就是转染后质粒可以稳定整合到基因组上不会因细胞分裂而丢失。区别于质粒瞬时转染不能长时间保留质粒在细胞里。
siRNA干扰常见问题123
有恃无恐03502021-07-31
这个要看细胞的状态和蛋白表达特点。
推荐了解“主细胞库”“工作细胞库”这两个名词。
有人有用过吉凯的GV248慢病毒吗,关于胃癌方面的,小弟在构建LncRNA干扰的稳转胃癌细胞SGC-7901株,转想请问这种细胞株嘌呤霉素的筛选浓度是多少,如何进行筛选?
稳转细胞系常用的方法有质粒转染和慢病毒转染进行稳定株筛选,前者操作简单,但是成功率很低,费时,假阳性高,最后可能导致几个月的工作白干了,慢病毒稳定株筛选方法比较简单,并且慢病毒本身具有稳定整合入基因组的特性,没有假阳性,慢病毒。

求助各位大神

RT,找公司做的稳转Hela和HepG2细胞株拿回来以后培养总是出问题。细胞寄到后显微镜下观察,状态良好。长满传代后,一瓶出现大量漂浮不贴壁的情况,一瓶贴壁后生长出现成团,生长缓慢的情况(传代后有显微观察,分散良好没有成团),一瓶传至第三代后,14h后显微观察,大量漂浮贴壁情况差。

培养基为DMEM,10%FBS,5%CO2,是随细胞寄过来的培养基。

求各位大神帮忙分析下原因,是我毕业课题,突然出现这样的问题,不想研三再换课题了。

万分感谢!

制备成功稳定转染细胞株后,能否再用瞬时转染的方法转入其它质粒?
准备研究一抑癌基因在肿瘤细胞中的过表达的细胞学实验及动物实验,最近做稳转发现细胞不扩增,零星几个一直贴在皿里。对照的无抑癌基因的载体稳转效果就不错,药物筛选11天,发现有很多克隆出现了。试问:1)抑癌基因的研究一定要稳转的细胞吗?瞬转难道不也能说明一些问题吗?2)对于动物实验,稳转的细胞株是最好的,但是如果老是筛选不出稳转的细胞克隆有没有代替的方法?3)大家有什么好的经验来筛选抑癌基因的稳转细胞株克隆。
最近做这个实验感觉像是在和细胞较劲儿,呵呵。
行阶梯形矩阵_123
zf30272021-08-07
如题,我用PIRES2-EGFP(带/不带目的基因)转染HCT-116,G418筛选,筛选浓度为800µg/ml,两周后发现克隆要么不带荧光,要么荧光很淡,几乎看不出细胞的轮廓,估计挑出来也没用,请问这是什么原因,我下一步该怎么办?
瞬时转染是指外源基因进入受体细胞后,存在于游离的载体上,不整合到细胞的染色体上,结果是短暂的高水平表达,可在外源基因导入细胞24~96h内检测表达效果,表达水平与位置无关,不会受到周围染色体元件的影响。超螺旋质粒转染更倾向于瞬时表达。
对于瞬时转染的检测:如果有报告基因,就通过报告基因的表达看转染成功与否;没有报告基因的话,就在24~96h内收获细胞通过RT-PCR和WB来鉴定。
稳转细胞系常用的方法有质粒转染和慢病毒转染进行稳定株筛选,前者操作简单,但是成功率很低,费时,假阳性高,最后可能导致几个月的工作白干了,慢病毒稳定株筛选方法比较简单,并且慢病毒本身具有稳定整合入基因组的特性,没有假阳性,慢病毒包装可能相对比质粒构建难度大,如果经费充足可以直接找公司包毒的。