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Gentarget/SH-SY5Y / RFP (Puromycn) stable cell line/SC046/1 Ea
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Gentarget
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SC046
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TransformedfromSH-SY5Y cellline( orignatedfromahumanbonemarrowwithneuroblastoma) bylentivirusexpressingenhanceRFPfluorescent MarkerRFP wasexpressedundertheconstitutiveCMVpromoter. CelllinecontainsaPuromycin antibioticselectionmarker. ProductManual.

Thefollowexpressioncassettewasintegratedintocellline’sgenome.

sc046-vector-scheme

EachcellshowedstrongRFPfluorescentsignal.

sc046-img

Soldat: 1vialx(2 x106cells)/vial 

Cat#SC046

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稳定转染和瞬时转染,细胞转染的步骤基本相同,只是在转染后的细胞处理会不一样。由于瞬时转染只能维持几天,故在转染12~72后就可以在蛋白或基因水平进行相应的检测了。稳转细胞系通常需要通过一些选择性标记反复筛选,得到稳定转染的同源细胞系。通常构建的载体上有两个抗性基因,如,氨苄青霉素和新霉素。那么建立稳转细胞系时该用哪种抗生素来筛细胞呢?很多真核表达质粒上都有两个抗性基因,但一般其中只有一个抗性可以用来筛细胞。其中氨苄青霉素对细胞是没有筛选... 查看更多>
简介: 【Hela 229】,细胞库拥有专业细胞实验室及技术人员,可提供复苏细胞,冻存细胞。全国统一最低价格。专业的细胞售前,最好的细胞售后,为老师们提供放心科研细胞。具体详情请致电咨询:4000-520-616详细说明:  【Hela 229】产品特点:细胞库拥有专业细胞实验室及技术人员,可提供复苏细胞,冻存细胞。全国统一最低价格。专业的细胞售前,最好的细胞售后,为 查看更多>
2021-07-17
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各种已被命名和经过细胞生物学鉴定的细胞系或细胞株,都是一些形态比较均一、生长增殖比较稳定的和生物性状清楚的细胞群。因此凡符合上述情况的细胞群也可给以相应的名称,即文献中常称之为已鉴定的细胞(Certified Cells)。已鉴定的细胞可用于各种实验研究和生产生物制品。当前世界上已建的各 查看更多>
转染(transfection)专指感受态的大肠杆菌细胞捕获和表达噬菌体DNA分子的生命过程。从本质上讲,和转化没有根本的区别。无论是转染还是转化,其关键因素都是用氯化钙处理大肠杆菌细胞,以提高细胞膜的通透性,从而使外源DNA分子能够容易进入细胞内部。所以在习惯上,人们往往也通称转染为广义的... 查看更多>
based on splitting onto on plateWarm collagenase media to 37°C in a water bath.Aspirate media off of cell culture plate.Add the following amount of collagenase 查看更多>
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首先你得明确这个h9c2细胞的培养是否好做,操作是否稳定。
然后你得确定,这个细胞株对于你得研究来说不可或缺,具有明确的代表性。
上面两个都没有问题的话,祝你顺利。
siRNA干扰常见问题123
有恃无恐03502021-07-31
这个要看细胞的状态和蛋白表达特点。
推荐了解“主细胞库”“工作细胞库”这两个名词。
行阶梯形矩阵_123
zf30272021-08-07
如题,我用PIRES2-EGFP(带/不带目的基因)转染HCT-116,G418筛选,筛选浓度为800µg/ml,两周后发现克隆要么不带荧光,要么荧光很淡,几乎看不出细胞的轮廓,估计挑出来也没用,请问这是什么原因,我下一步该怎么办?

我用腺病毒感染稳转细胞株,用到50微升的量都感染不起来,荧光不表达,PCR验证不出来?求问如果用polybrene该怎么加,转染之前预处理还是加病毒的时候加进去?

转染或PEI转染293的细胞后,一种方式加筛选压力(puromycinorhygromycin),筛选后少量细胞存活,扩大培养后,发现没有阳性,另一种方式,转染后分单克隆,扩大培养后也检测不到阳性。原本转染24-72小时转染效率至少在50%,大部分可能是瞬转,但不会一个都没有整合到基因组吧,以前我用这种方法筛选成功过几株稳转株,但是最近一段时间都失败,有遇到类似情况的吗?想和大家交流交流
1、请教各位老师,转染质粒DNA的HepG2及HUH7细胞,如何筛选稳转细胞株
2、有限稀释法有没有protocol?
转入目的基因但为什么不表达mRNA
先提取RNA,反转录成cDNA,然后根据目的基因设计PCR引物,通过半定量RT-PCR确定目的基因表达.
正因为检测的是mRNA,所以要先反转录成cDNA才能PCR.
瞬时转染是指外源基因进入受体细胞后,存在于游离的载体上,不整合到细胞的染色体上,结果是短暂的高水平表达,可在外源基因导入细胞24~96h内检测表达效果,表达水平与位置无关,不会受到周围染色体元件的影响。超螺旋质粒转染更倾向于瞬时表达。
对于瞬时转染的检测:如果有报告基因,就通过报告基因的表达看转染成功与否;没有报告基因的话,就在24~96h内收获细胞通过RT-PCR和WB来鉴定。
构建稳转细胞系123
gleb7532017-10-02
稳定转染或持久的转染是用于建立克隆的细胞系,这种细胞系中转染的目的基因整合到染色体DNA中并指导适量目的蛋白的合成。一般来说(由细胞类型决定),形成稳定转染细胞的效率比瞬时转染(transient transfection)的效率低1到2个数量级。利用可选择的遗传标记物有利于从非转染细胞的中分离出稀少的稳定转染物
两种质粒是可以同时进入同一个感受态细胞的,比如构建腺病毒载体时.但是要求两种质粒进入同一个感受态细胞,转化效率非常低,一般需要电转或者其他的特殊处理.
由于质粒的不兼容性,拥有同种复制子的质粒不能在同一细胞内稳定共存,经过几代的复制,会质粒丢失,所以并不是任何两个或两个以上质粒都可以在同一细胞内稳定存在,但是可以同时进入.
稳定转染的细胞株,就是转染后质粒可以稳定整合到基因组上不会因细胞分裂而丢失。区别于质粒瞬时转染不能长时间保留质粒在细胞里。
应该是通过病毒载体质粒上的标记基因比如说荧光的eGFP或者带嘌呤霉素抗性基因的用嘌呤霉素筛选吧!