| 提供商： | 上海麒盟生物科技有限公司 |
| 服务名称： | 基因过表达慢病毒稳转细胞株(LentiOE-Stable) |
10月份6折钜惠，原件38000元，现价22000元
慢病毒是将含基因的载体转入大部分哺乳动物细胞最有效的工具，转导的慢病毒载体携带基因可以和细胞基因组DNA整合，从而稳定，长期对基因水平进行调控。通过一套高效的高滴度慢病毒生产系统，能应用于大规模慢病毒生产。病毒滴度可高达10E8-E9TU/ML。利用不同的腺病毒载体系统可分别适用于在各类细胞中稳定过量表达、敲减和敲除不同大小的外源基因。
同时，由于大多数公司只销售体外构建的慢病毒，然而由于细胞异质性，往往在用户进行后续细胞实验过程中不能达到感染效率和预期基因表达水平改变。为简便用户在使用慢病毒筛选细胞稳转株时的繁琐过程，以及保障在不同细胞株中具有确定感染和基因改变效率，推出一站式慢病毒稳转细胞株筛选构建服务，针对用户需要进行功能实验的细胞，通过慢病毒载体上的G418或puromycin抗性进行慢病毒稳转细胞株筛选。用户在60-90天内可直接拿到经过表达鉴定的相应慢病毒稳转细胞株。可以广泛用于癌症、肿瘤、代谢性疾病等相关机制研究。
基因过表达慢病毒稳转细胞株(LentiOE-Stable)
用于上调基因的高纯度慢病毒进行特定稳转细胞株筛选，适用于在各类细胞中稳定过量表达不同大小的外源基因。
慢病毒稳转细胞株的筛选构建
LentiOE-Stable过表达稳转株
1. 目的基因合成和表达载体构建
1）目的基因合成
2）选择合适的表达载体，目的基因合成后直接连接构建
3）测序验证
2. 表达质粒载体
1）质粒转化细菌扩增
2）质粒抽提纯化
3）酶切电泳以及测序再验证
3. 慢病毒包装
1）试剂：表达载体、慢病毒载体系统、293T细胞和转染试剂
2）共孵育及收集含病毒上清液
3）病毒纯化和浓缩
4）病毒保存（-80℃）
4. 慢病毒感染目的细胞预实验
1）优化条件：细胞种板密度、病毒最适MOI、是否需要polybrene辅助感染试剂等
2）荧光观察或者FACS检测感染效率
5. 药物筛选浓度优化
1）药物浓度梯度
2）处理48小时后细胞全部死亡的最低药物浓度为后续实验拟用浓度
6. 正式实验
1）慢病毒感染
2）荧光观察
3）药物筛选多克隆细胞稳转株（或者FACS分选表达GFP的细胞）
4）有限稀释单克隆细胞株筛选及扩大培养
7. 鉴定
1）荧光拍照
2）目的基因qPCR检测
3）Flag或目的基因表达蛋白的Westernblot检测
服务优势
拥有成熟稳定的稳转细胞系筛选平台，技术多样化，并且可以结合客户特殊需求，灵活地定制服务。稳转细胞株无细菌、真菌及支原体污染，其生长状态、活率及目的蛋白表达水平至少20代保持稳定。
