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稳定转染VS瞬时转染
发布人 qydsmile   发布时间 2021-08-21
可以做了 又不用表达个几十天的
[求助]转染带有GFP的目的基因载体后,观察不到荧光 经验共享...
发布人 寞比sln   发布时间 2021-08-20
之前转染了带GFP的质粒，冻存估计有半年了拿来复苏，想做后续实验，结果稳转的细胞荧光少还很弱，请问怎么办？急急急！
【求助】稳转细胞株进行细胞增殖和周期时是否还需要加G418_问答...
发布人 lifengna   发布时间 2021-08-19
稳转细胞株进行细胞增殖和周期时是否还需要加G418
实验Q&A:如何用慢病毒转染构建稳转细胞系 实验方法
发布人 耳语仏   发布时间 2021-08-18
稳转细胞系常用的方法有质粒转染和慢病毒转染进行稳定株筛选，前者操作简单，但是成功率很低，费时，假阳性高，最后可能导致几个月的工作白干了，慢病毒稳定株筛选方法比较简单，并且慢病毒本身具有稳定整合入基因组的特性，没有假阳性，慢病毒。
【求助】请问质粒转染细胞后能够稳定表达多久？ 考研
发布人 无聊7Ns   发布时间 2021-08-17
这个要看细胞的状态和蛋白表达特点。推荐了解“主细胞库”“工作细胞库”这两个名词。
小白求助:shRNA质粒稳转细胞一般能转几个进去? 核酸基因技术讨论版...
发布人 血魇DUV   发布时间 2021-08-16
两种质粒是可以同时进入同一个感受态细胞的,比如构建腺病毒载体时.但是要求两种质粒进入同一个感受态细胞,转化效率非常低,一般需要电转或者其他的特殊处理.由于质粒的不兼容性,拥有同种复制子的质粒不能在同一细胞内稳定共存,经过几代的复制,会质粒丢失,所以并不是任何两个或两个以上质粒都可以在同一细胞内稳定存在,但是可以同时进入.稳定转染的细胞株，就是转染后质粒可以稳定整合到基因组上不会因细胞分裂而丢失。区别于质粒瞬时转染不能长时间保留质粒在细胞里。
磷酸钙细胞转染技术
发布人 肥沙褐匀001   发布时间 2021-08-15
转染的话一般是以克数来规范转染的质粒数量,所以会有很多质粒.一般转染的质粒除了带有需要过表达的基因以外,还需要带有标记基因.标记基因可以被特定的抗体检测,从而判断是否有效表达.如果你要过表达的是某种蛋白,也可以直接通过该蛋白的抗体检测,对照是没有转染的同种细胞,这样表达效果就可以通过WESTERN BLOT看见了.过表达倒没什么标准,每种蛋白表达量也不一致,选择适合自己的浓度就好. 顺转的话,我们实验室采用lipo2000,具体步骤百度文库有,英文的protocol在lipo2000的说明书上也...
指南|单克隆抗体生产的细胞工程学_基因
发布人 戴蒙久兆18   发布时间 2021-08-14
应该是通过病毒载体质粒上的标记基因比如说荧光的eGFP或者带嘌呤霉素抗性基因的用嘌呤霉素筛选吧!
细胞转染筛选问题 生物科学
发布人 面忻   发布时间 2021-08-13
请问细胞转染质粒后想获得稳定细胞系，是先用流式细胞仪筛选后再用抗性培养基筛选吗？一般是转染后多久开始进行筛选
【专题讨论】慢病毒转染后筛选稳定株 细胞技术讨论版
发布人 最爱hi11   发布时间 2021-08-12
帮同学问：最近要筛选一个人肺癌细胞稳定转染株，用什么方法比较好呢？目的细胞是人肺癌细胞，在其他地方看到有的用质粒，有的用慢病毒进行稳定株筛选，两种方法有什么区别呢，具体操作是什么呢？望有大神告知
如何实现质粒的稳定转染? 生物科学 学术 科研 互动...
发布人 星子1175   发布时间 2021-08-11
6kb并不大，作为质粒转染是没有问题的。至于到底好不好转就跟你的细胞有关了，和细胞是否是稳转株关系不大。
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发布人 一戦成神marsking   发布时间 2021-08-09
最近因工作需要，欲购进一些生产用的细胞株和瞬转、稳转质粒，大家有什么推荐的品系和公司或网站，谢谢！！！主要需求：1.生产或生物制药用的，稳定细胞株如CHO-K1、GS和HEK293/HEK293T，以及与之对应的瞬转、稳转（重组整合）质粒（需详细图谱）。2.原始或改造细胞株，以及对应质粒，改造细胞株请详述细节，原因，优缺点，安全性等。3.希望大家积极推荐，实验用、生产用均可，原核、真核都行，网站或品系名称也行，只要大家觉得常用、稳定、安全、高产就行。4.请有意向的同仁回帖或将详细资料发至我163...
逆转录聚合酶链反应(RTPCR,rtpcr)资讯
发布人 qishi5114   发布时间 2021-08-08
我用腺病毒感染稳转细胞株，用到50微升的量都感染不起来，荧光不表达，PCR验证不出来？求问如果用polybrene该怎么加，转染之前预处理还是加病毒的时候加进去？
行阶梯形矩阵_
发布人 zf3027   发布时间 2021-08-07
如题，我用PIRES2-EGFP（带/不带目的基因）转染HCT-116，G418筛选，筛选浓度为800µg/ml,两周后发现克隆要么不带荧光，要么荧光很淡，几乎看不出细胞的轮廓，估计挑出来也没用，请问这是什么原因，我下一步该怎么办？
G418筛选稳定表达细胞系PROTOCOL 实验方法
发布人 二洋旣獎b38JV   发布时间 2021-08-06
稳定细胞株筛选是一个长期的过程，稳定细胞株筛选优化，有许多条件需要摸索，而且是从源头开始① 在构建载体时，目的基因直接整合到细胞染色体组上，最好不要通过先瞬转在筛选稳定细胞株的这种方法，因为转染效率没有保证② 高表达载体的构建，哺乳动物表达量一直是它自身的缺点，最好根据高表达载体定向的驯化细胞，提高蛋白表达量③ 细胞的选择，筛选稳定细胞株我们常用的细胞是CHO，中国仓鼠卵巢细胞，由于CHO具有诸多的优点因此适合用于筛选稳定细胞株，而HEK293细胞则常用于瞬时转染④ 后期的筛选，双抗预防污染，筛...
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