关于血清冻存与复苏的问题，请各位哥哥姐姐指教！

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2021-07-21

问题描述：

本人科研小白，研究新生！

课题准备检测血清中骨桥蛋白（OPN）含量

现在计划是先将所有血标本离心取血清先冻存，待所有标本收集齐后再统一做

大概要收集2个月，约70个病例。

现在我的问题就是：1、离心后的血清，如何分装、冻存？（具体条件、流程、用什么管子冻存，是否需要买冻存液等）

2、冻存后如何复苏？（最好有具体流程，具体复苏条件，是否需要买什么复苏液、培养基什么的）

刚来读书，一下子拿到这个题目有点懵，网上搜了一些，比较杂，比较乱，没有底，想请教各位哥哥姐姐给我提供点帮助，先谢谢了！

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萌城小小小少年

用户

需要买冻存液，没有也可以自己配。冻存要用冻存管，不能一下子放入液氮。复苏放到水浴锅。

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萌城小小小少年

用户

培养基看你什么细胞，高糖还是低糖，培养液+双抗+胎牛血清

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萌城少年的迷妹

用户

萌城小小小少年需要买冻存液，没有也可以自己配。冻存要用冻存管，不能一下子放入液氮。复苏放到水浴锅。对对对大神说的都对

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zhwang6570

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和楼主面临同样的问题。希望知道怎么处理的师兄师姐们帮忙告知一下具体步骤。多谢！期待……

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zhwang6570

用户

楼主所说的这70个病例指的是病人还是动物呢，如果是临床用患者的血液的话，楼主是否准备好和患者签署知情同意书呢？

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萌城小小小少年

用户

萌城少年的迷妹对对对大神说的都对大神你赶紧学习去，北（大）清（华）交（大）复（旦）欢迎您！忘记一个重要的学校，安徽合肥的，中国科技大学的少年班欢迎您，因为您比较年轻，这年代年轻就是本钱，人家去上海九院，去韩国换脸都得要年轻！！！Harvard university(MA，哈佛），Priceton University （普林斯顿，NJ），Yale university（CT，耶鲁），University of Pennsylvania(UP，宾夕法尼亚），Duke univer（NC，杜克），Stanford university（CA，斯坦福），California institute of technology（CIT，加州理工），Massachusetts Inst.of Technology（MIT ，麻省理工），Columbia University（NY,哥伦比亚）,Dartmouth college（NH,达特茅斯）都欢迎您！大神您赶紧在美帝混混好，回头我去找您。。。。

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萌城少年的迷妹

用户

展开引用萌城小小小少年大神你赶紧学习去，北（大）清（华）交（大）复（旦）欢迎您！忘记一个重要的学校，安徽合肥的，中国科技大学的少年班欢迎您，因为您比较年轻，这年代年轻就是本钱，人家去上海九院，去韩国换脸都得要年轻！！！Harvard university(MA，哈佛），Priceton University （普林斯顿，NJ），Yale university（CT，耶鲁），University of Pennsylvania(UP，宾夕法尼亚），Duke univer（NC，杜克），Stanford university（CA，斯坦福），California institute of technology（CIT，加州理工），Massachusetts Inst.of Technology（MIT ，麻省理工），Columbia University（NY,哥伦比亚）,Dartmouth college（NH,达特茅斯）都欢迎您！大神您赶紧在美帝混混好，回头我去找您。。。。......小菜鸟正在学习大神肯定又跟XX聊天去了哈哈哈

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萌城小小小少年

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萌城少年的迷妹小菜鸟正在学习大神肯定又跟XX聊天去了哈哈哈没有，我是菜鸟，我去洗澡了，不和您玩了，我去体育馆吃饭刚回来，今天没做实验，夜里要睡不着觉了。。。。

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萌城少年的迷妹

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萌城小小小少年没有，我是菜鸟，我去洗澡了，不和您玩了，我去体育馆吃饭刚回来，今天没做实验，夜里要睡不着觉了。。。。哎大神不让我去接机说天气太热了但是我觉得肯定是跟同学一起回来怕产生误会正好我明天也有事我们仨后天约个饭

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萌城小小小少年

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展开引用萌城少年的迷妹哎大神不让我去接机说天气太热了但是我觉得肯定是跟同学一起回来怕产生误会正好我明天也有事我们仨后天约个饭......你有情，他无意啊，美帝回来这么快就变心了？要不要这样啊？这男人不行，缺少教育。。。。好，ok，周日见你们，不行明晚我得熬夜做实验，3天不做实验，我估计真要留校了。。。

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萌城少年的迷妹

用户

展开引用萌城小小小少年你有情，他无意啊，美帝回来这么快就变心了？要不要这样啊？这男人不行，缺少教育。。。。好，ok，周日见你们，不行明晚我得熬夜做实验，3天不做实验，我估计真要留校了。。。......大神是要脱单的男人我们不能这样毁坏他名声我周末去学校找你明天就不见了啦啦啦啦～

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萌城小小小少年

用户

萌城少年的迷妹大神是要脱单的男人我们不能这样毁坏他名声我周末去学校找你明天就不见了啦啦啦啦～明天我得出门，一天会议，还要早起。。。。周末终于来陪我灌胃了。。。。啦啦啦啦，我是卖报的小行家，不等天明等卖报。。。再见，我去洗澡了。。。学校真好，我不要离开学校。。。但是毕业还是要的。。。以后有机会去美帝读读书。。。哎，还是年轻点有资本，不然老了一把鼻涕，一把眼泪的。。。我要去换脸，我要去整容。。。

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萌城小小小少年

用户

萌城少年的迷妹大神是要脱单的男人我们不能这样毁坏他名声我周末去学校找你明天就不见了啦啦啦啦～大神回来后，我得在大神的指导下，好好做实验，晚上没地方住就去投奔你，你要收留我。。。哈哈哈哈。。。。。

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萌城小小小少年

用户

萌城少年的迷妹大神是要脱单的男人我们不能这样毁坏他名声我周末去学校找你明天就不见了啦啦啦啦～洗澡去了，不和你玩了，再见。。。再不去，没热水了。。。我爱学校，可是学校不爱我，哎。。。

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叽叽歪歪20

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zhwang6570 楼主所说的这70个病例指的是病人还是动物呢，如果是临床用患者的血液的话，楼主是否准备好和患者签署知情同意书呢？是临床患者，同意书是肯定要签的

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叽叽歪歪20

用户

萌城小小小少年需要买冻存液，没有也可以自己配。冻存要用冻存管，不能一下子放入液氮。复苏放到水浴锅。有推荐的冻存液吗？还有复苏流程

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叽叽歪歪20

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萌城小小小少年培养基看你什么细胞，高糖还是低糖，培养液+双抗+胎牛血清不懂什么细胞，我就是抽患者外周血，分离血清后冻存，大概2个月后一起测骨桥蛋白

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fascia

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血清需要冻存液？冻存细胞的时候才需要冻存液吧。一般都是直接将血清样本分装好，冻到-80就可以。蛋白避免反复冻融。

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小可爱222

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叽叽歪歪20 不懂什么细胞，我就是抽患者外周血，分离血清后冻存，大概2个月后一起测骨桥蛋白看您样本保存那里了2-8度保存是一周 -20度保存是一个月 -80度保存是一个月以上最多一年不要反复冻融不然影响样本

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leijh123

用户

第一，不需要添加任何东西，否则你的opn不就变了吗？第二，不需要冻存管，普通的1.5mlEP管就行。第三，要分装，具体分装多少根据你的实验需要，原则是尽量一次或者两次用完，避免反复冻融化。第四，分装的量一定要稍微多于你要用的量，否则到时候就吸不出来了。第五，最好负八十冻存。负二十短期内是可以的。祝顺利！

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leijh123

用户

所谓复苏，直接拿出来化了用就行了。最好在冰上操作。用前一定要混匀一下。

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叽叽歪歪20

用户

展开引用leijh123 第一，不需要添加任何东西，否则你的opn不就变了吗？第二，不需要冻存管，普通的1.5mlEP管就行。第三，要分装，具体分装多少根据你的实验需要，原则是尽量一次或者两次用完，避免反复冻融化。第四，分装的量一定要稍微多于你要用的量，否则到时候就吸不出来了。第五，最好负八十冻存。负二十短期内是可以的。祝顺利！......谢谢了老师，太厉害了！崇拜！

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