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PromoCell Growth Supplements are produced from bovine brain tissue exclusively originating from New Zealand and thus classified as BSE-free. The Growth Supplements are aqueous protein extracts from mixed-sex bovine pituitary glands (BPE). They are especially useful for the cultivation of different types of primary human cells under serum-reduced or serum-free conditions.
Bovine Pituitary Extract-15 and -26 are standardized to a protein concentration of 7.5 mg/ml or 13 mg/ml, respectively. For Normal Human Epidermal Keratinocytes (NHEK) the optimal concentration of BPE-15 is 0.4% (v/v) in the medium supplemented with the appropriate growth factors and hormones. Other epithelial and non-epithelial cells need the higher concentrated BPE-26.
Bovine Pituitary Extract not available in the US and Canada!
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各位大神,本人实验室小白一枚,现在要保存乙肝病人的血清,以后用来做实验感染细胞。为了最大限度保持病毒的感染活力,应该怎么保存呢?直接-80度冷冻可以吗?需要加甘油吗?
本人做动物实验,每组设7只,需要测定小鼠的相关指标,初次接触有几点不明白
1、测定指标时,是否可以每组7只,每只测定一次,一共测定7次?
2、是否可以每组选择3只,每只测定一次,共3次?
3、是否可以每组选择3只,每只自身平行测定3次,共9次?
4、测定指标时,是否可以前3只鼠测定A指标,后4只鼠测定B指标吗?
请问1、2、3中的三个方法哪种方法是否具有可行性?4中的测定方法是否可以?
前段时间有个同学因为细胞状态不好,培养基里有小黑点,怀疑是支原体污染。于是检测了一下,果真是的,就买了支原体清除剂。别说效果还真好,3天后细胞状态就好了。
既然细胞状态好了,就停用了,没想到一停用,细胞状态就又差了。把培养箱、细胞房都清理一遍还是不行,就问到了我,既然这些因素都排除了,最后只有一个可能了,刚买的Gibco的胎牛血清,本来心里还想,同学实验室真是土豪啊,我就问了价格,南美胎牛1500……澳州胎牛血清3000……,简直惊讶到了,现在Gibco的血清简直是一货难求,澳州胎牛血清已经炒到了8000+了。
就断定这个血清肯定是假的,用检测试剂盒检测了一下,果然是这个问题,假血清真是害人啊,这些无良奸商……由于支原体比较小,滤器过滤不掉,所以大家买血清的时候一定要先试用,检测一下支原体(现在好多大牌子都会有支原体检测报告)
这里来分享一下支原体检测方法:
1,PCR检测法。
2支原体检测跑胶图-20084539882.jpg
这个Primers是依据支原体基因组中高度保守的16SrRNA编码域而设计的,只需简单的PCR反应就可检测M.Arginini,M.Fermentans,M.Hyorhinis,M.Orale,M.Salivarium,M.Hominis,M.Pneumonia等常见的支原体。
2,DNA萤光染色法
利用萤光染剂(bisbenzimide,Hoechst33258)侦测支原体污染。此染剂会结合到DNA之Adenosine-Thymidine(A-T)rich区域,因为支原体之DNA中A-T含量占多数(55~80%),所以可将其染色而侦测。被支原体污染之细胞经染色后,在细胞核外与细胞周围可看到许多大小均一之萤光小点,即为支原体之DNA,证明有支原体之污染。
Cell+细胞卫士__MycoTestKit(支原体检测试剂盒):
支原体:黑色的,好象多为多形,培养液一般会浑浊,原体感染,国内血清很多都没有做支原体阴性检测,而支原体是牛血清中最常见的微生物之一。而且它不能用过滤的办法除去。支原体感染细胞以后,细胞病变不很明显,只是慢慢死去。
MycoTestKit是利用降落聚合酶链式反应技术(TD-PCR)对支原体16SrRNA基因高度保守区域特异性片段进行扩增检测。该方法灵敏度高,特异性强,可用于各种生物材料(如细胞培养基、实验动物分泌物、动物血清等)支原体感染的检测。
Cell+细胞卫士__NocardTreatment(支原体清除剂):
(1)推荐NocardTreatment的稀释比例为1:1000,例如:1mL培养基加入1μL的NocardTreatment;
(2)弃去旧的培养基,用PBS将细胞清洗干净,再加入新鲜的含有NocardTreatment的培养基,1天1次,连续处理3-6天。
血清的基本成分是水,水中溶有蛋白质、脂肪、糖、无机盐、维生素等营养成分,也溶有人体代谢产物。血清中有抗体,这是被称作免疫球蛋白的蛋白质。
你说的应该称抗毒血清。
因制作时是将蛇毒、病原菌产的毒等小量多次地注射到免子、马血管内,每日慢慢加大注射量,一定时间后,因该动物体内产生抗体,经检测,达到一定效价后,就可以抽血。血液分离血清后再经提纯,就成了抗毒血清。
如蛇、白喉、破伤风、狂犬病抗毒血清等都是如此制备,用来治疗相应毒素反应。
该生物制剂是异种血清,对人会有过敏反应,注射前均要做皮试。阴性可注射,阳性必需作脱敏疗法才行。
1)提供基本营养物质:氨基酸、维生素、无机物、脂类物质、核酸衍生物等,是细胞生长必须的物质。
2)提供结合蛋白:结合蛋白作用是携带重要地低分子量物质,如白蛋白携带维生素、脂肪、以及激素等,转铁蛋白携带铁。结合蛋白在细胞代谢过程中起重要作用。
3)提供激素和各种生长因子:胰岛素、肾上腺皮质激素(氢化可的松、地塞米松)、类固醇激素(雌二醇、睾酮、孕酮)等。生长因子如成纤维细胞生长因子、表皮生长因子、血小板生长因子等。
4)对培养中的细胞起到某些保护作用:有一些细胞,如内皮细胞、骨髓样细胞可以释放蛋白酶,血清中含有抗蛋白酶成分,起到中和作用。这种作用是偶然发现的,现在则有目的的使用血清来终止胰蛋白酶的消化作用。因为胰蛋白酶已经被广泛用于贴壁细胞的消化传代。血清蛋白形成了血清的粘度,可以保护细胞免受机械损伤,特别是在悬浮培养搅拌时,粘度起到重要作用。血清还含有一些微量元素和离子,他们在代谢解毒中起重要作用,如SeO3,硒等
5)提供促接触和伸展因子使细胞贴壁免受机械损伤。
6)血清中有抗体,这是被称作免疫球蛋白的蛋白质,血清可以抗病毒,增强抵抗力血清属于生物制剂。

