Cellsinculturerequireasourceofnutrition,typicallyprovidedbycellculturemedia.Themajorityofthesemediarequiretheadditionofanimalserumforcellstoobtainthepropernutrientsforadequategrowthanddifferentiation.Serumisanimportantsourceofproteins,lipids,vitamins,aminoacids,salts,minerals,attachmentfactors,growthfactors,hormones,andothercomponentsessentialforcellgrowth. FetalBovineSerumisthepreferredserumsupplementfor cellcultureapplicationsduetoits highlevelsofnutrientsandoptimalcombinationofgrowthfactors.
AlllotsofFetalBovineSerum–Premiumaresterility,virus,andperformancetested,andincludeabiochemicalprofile.LotsaremanufacturedfromUSAoriginorUSDA-approvedoriginmaterialfollowingstringentmanufacturingandqualitycontrolprocedures.
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本人做动物实验，每组设7只，需要测定小鼠的相关指标，初次接触有几点不明白
1、测定指标时，是否可以每组7只，每只测定一次，一共测定7次？
2、是否可以每组选择3只，每只测定一次，共3次？
3、是否可以每组选择3只，每只自身平行测定3次，共9次？
4、测定指标时，是否可以前3只鼠测定A指标，后4只鼠测定B指标吗？
请问1、2、3中的三个方法哪种方法是否具有可行性？4中的测定方法是否可以？
Nutrients.2017May10;9(5).
ClinicalSignificanceandPrognosticEffectofSerum25-hydroxyvitaminDConcentrationsinCriticalandSevereHand,FootandMouthDisease.
手足口病危重儿血清25-羟维生素D浓度的临床意义与预后影响
作者党红星，刘成军，李静，程时骄，许峰
摘要
Abstract
目的：探讨血清25羟维生素D[25（OH)D]浓度与手足口病危重症的关系及评估手足口病危重儿血清25-羟维生素D浓度的临床意义与预后影响。
OBJECTIVE:
Toexaminetheassociationofserum25-hydroxyvitaminD[25(OH)D]concentrationswithcriticalandseverehand,footandmouthdisease(HFMD)andassesstheclinicalsignificanceandprognosticeffectof25(OH)DconcentrationsinchildrenwithHFMD.
方法：本研究为前瞻性观察研究。
METHODS:
ThisisaProspectiveobservationalstudy.
将138例手足口病患儿分为普通组（49例）、重症组（52例）和危重组（37例）。另选取同期门诊体检的59例健康儿童作为对照组。
The138childrenwithHFMDweredividedintocommon(49cases),severe(52cases),andcritical(37cases)HFMDgroups.Another59healthychildrenundergoingoutpatientmedicalexaminationsduringthesameperiodwerechosenasthecontrolgroup.
测定所有对象的血清25（OH）D浓度，每组再分为血清25（OH）D正常组（≥30ng/mL）；不足组（20-29.9ng/mL）；缺乏组（低于20ng/mL）。
Serum25(OH)Dconcentrationsweremeasuredinallthesubjects,andeachgroupwassuBDividedbyserum25(OH)Dconcentrationinto25(OH)Dnormal(≥30ng/mL);insufficiency(20-29.9ng/mL),anddeficiency(<20ng/mL)groups.
手足口病危急重症组在入住儿科ICU（PICU）时记录小儿危重病例评分（PCIS）。
Thepediatriccriticalillnessscore(PCIS)wasrecordedforthecriticalandsevereHFMDgroupuponadmissiontothepediatricintensivecareunit(PICU).
监测小儿危重手足口病患者血乳酸（LAC）、血清钙离子（Ca2+）、D-二聚体（DD）、乳酸脱氢酶（LDH）、肌酸激酶同工酶（CK-MB）水平；脑干脑炎、神经源性肺水肿、循环衰竭的发生情况；14天病死率。
ChildrenwithcriticalandsevereHFMDwerealsomonitoredforbloodlactate(LAC),serumcalciumions(Ca++),D-dimer(DD),lactatedehydrogenase(LDH),andcreatinekinase-MB(CK-MB)levels;theincidencesofbrainstemencephalitis,neurogenicpulmonaryedema,andcirculatoryfailure;andthe14-daymortalityrate.
结果：
RESULTS：
各组血清25（OH）D浓度普遍较低。
Serum25(OH)Dconcentrationsweregenerallylowinallgroups.
与对照组（28.1±6.6ng/mL,8%）、普通组（29.5±8.1ng/mL,10%）和重症组（31.9±9.7ng/mL,8%）相比，危重组患者血清25（OH）D平均浓度（20.0±8.4ng/mL）明显较低，血清25（OH）D缺乏比例（18％）明显较高(P＜0.05）。
ThecriticalHFMDgroupshowedasignificantlylowerserum25(OH)Dmeanconcentration(20.0±8.4ng/mL)andahigherproportionofdeficiency(18%)comparedwiththecontrolgroup(28.1±6.6ng/mL,8%),common(29.5±8.1ng/mL,10%)andsevere(31.9±9.7ng/mL,8%)HFMDgroups(p<0.05).
在危重组中，25（OH）D缺乏组比25（OH）D正常组及不足组具有更低的PCIS值（P＜0.05）；而比后两组具有更高LAC、LDH、CK-MB和DD；具有（更高的）脑干脑炎、神经源性肺水肿、循环衰竭发生率及病死率（P＜0.05）。
InthecriticalandsevereHFMDgroups,the25(OH)DdeficiencygrouphadlowerPCISsthanthe25(OH)Dnormalandinsufficiencygroups(p<0.05);andhadhighervaluesthanthelattertwogroupsforLAC,LDH,CK-MBandDD;andtheincidencesofbrainstemencephalitis,neurogenicpulmonaryedema,circulatoryfailure,andmortality(p<0.05).
死亡组较存活组具有显著降低的血清25（OH）D浓度和PCIS（P＜0.05），具有较高的LAC、LDH、CK-MB和DD水平；较高的脑干脑炎、神经源性肺水肿、循环衰竭发病率（P＜0.05）。
Thedeathgroupshowedsignificantlylowerserum25(OH)DconcentrationsandPCISsthanthesurvivalgroup(p<0.05)andhadhigherLAC,LDH,CK-MBandDDlevelsandhigherincidencesofbrainstemencephalitis,neurogenicpulmonaryedema,andcirculatoryfailure(p<0.05).
Logistic回归分析显示，血清25（OH）D浓度是影响重症手足口病患儿病死率的独立因素。
Logisticregressionanalysisrevealedthattheserum25(OH)DconcentrationwasanindependentfactorthatinfluencedmortalityinchildrenwithcriticalandsevereHFMD.
CONCLUSIONS:
结论：
在这项研究中，我们发现，血清25（OH）D浓度在手足口病危重患儿中大幅降低，并与手足口病的严重程度相关。
Inthisstudy,wefindtheserum25(OH)DconcentrationsaresubstantiallyreducedinchildrenwithcriticalandsevereHFMDandareassociatedwiththeseverityofHFMD.
血清25（OH）D浓度对判断重症手足口病进展和预测死亡风险具有临床价值。
Theserum25(OH)DconcentrationsmayhaveclinicalvaluefordeterminingtheprogressionofcriticalHFMDandpredictingtheriskofdeath.
在确定25（OH）D浓度在手足口病诊断的临床价值之前，仍需进一步的证据。
Furtherevidenceisneededbeforeitcanbestatedthat25(OH)DconcentrationshaveclinicalvalueinHMFDdiagnosis.
关键词：
KEYWORDS:
25-hydroxyvitaminD;criticalillness;footandmouthdisease;hand
25羟维生素D；危重病；手足口病
前段时间有个同学因为细胞状态不好，培养基里有小黑点，怀疑是支原体污染。于是检测了一下，果真是的，就买了支原体清除剂。别说效果还真好，3天后细胞状态就好了。
既然细胞状态好了，就停用了，没想到一停用，细胞状态就又差了。把培养箱、细胞房都清理一遍还是不行，就问到了我，既然这些因素都排除了，最后只有一个可能了，刚买的Gibco的胎牛血清，本来心里还想，同学实验室真是土豪啊，我就问了价格，南美胎牛1500……澳州胎牛血清3000……，简直惊讶到了，现在Gibco的血清简直是一货难求，澳州胎牛血清已经炒到了8000+了。
就断定这个血清肯定是假的，用检测试剂盒检测了一下，果然是这个问题，假血清真是害人啊，这些无良奸商……由于支原体比较小，滤器过滤不掉，所以大家买血清的时候一定要先试用，检测一下支原体（现在好多大牌子都会有支原体检测报告）
这里来分享一下支原体检测方法：
1，PCR检测法。
2支原体检测跑胶图-20084539882.jpg
这个Primers是依据支原体基因组中高度保守的16SrRNA编码域而设计的，只需简单的PCR反应就可检测M.Arginini,M.Fermentans,M.Hyorhinis,M.Orale,M.Salivarium,M.Hominis,M.Pneumonia等常见的支原体。
2，DNA萤光染色法
利用萤光染剂（bisbenzimide,Hoechst33258）侦测支原体污染。此染剂会结合到DNA之Adenosine-Thymidine(A-T)rich区域，因为支原体之DNA中A-T含量占多数（55～80%），所以可将其染色而侦测。被支原体污染之细胞经染色后，在细胞核外与细胞周围可看到许多大小均一之萤光小点，即为支原体之DNA，证明有支原体之污染。
Cell+细胞卫士__MycoTestKit(支原体检测试剂盒)：
支原体：黑色的，好象多为多形，培养液一般会浑浊，原体感染，国内血清很多都没有做支原体阴性检测，而支原体是牛血清中最常见的微生物之一。而且它不能用过滤的办法除去。支原体感染细胞以后，细胞病变不很明显，只是慢慢死去。
MycoTestKit是利用降落聚合酶链式反应技术（TD-PCR）对支原体16SrRNA基因高度保守区域特异性片段进行扩增检测。该方法灵敏度高，特异性强，可用于各种生物材料（如细胞培养基、实验动物分泌物、动物血清等）支原体感染的检测。
Cell+细胞卫士__NocardTreatment(支原体清除剂)：
（1）推荐NocardTreatment的稀释比例为1:1000，例如：1mL培养基加入1μL的NocardTreatment；
（2）弃去旧的培养基，用PBS将细胞清洗干净，再加入新鲜的含有NocardTreatment的培养基，1天1次，连续处理3-6天。
想做临床的血标本的一些代谢组学研究，不知道应该用血浆还是血清，大家的说法好像也不太一致，请大神指导啊，最好有些参考文献，谢谢！
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