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MoBiTec/Cryopreservation Medium/Cells & Media/CRYO-10001-50
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| Description: | OriCell™ Cell Culture Cryopreservation Medium is a serum-containing and ready-to-use freezing medium with optimized formulations for stem cells and primary cells. |
| Order #: | CRYO-10001-50 |
| Unit Size: | 50 ml |
| Supplier: | Cyagen |
| Restrictions: | Only available in Germany and selected European countries. |
| Shipping: | See manual & corresponding webpage |
| Storage: | See manual & corresponding webpage |
| Subcategory: | Cell Cryopreservation Media |
| More information: | Go to webpage |
MoBiTecGmbH是一家私人控股公司，由StephanDiekmann教授于1987年创立。与Max-Planck学会的密切关系以及德国领先的研究中心之一哥廷根的所在地促进了与某些研究中心的密切合作。德国最具创造力的科学家。此外，MoBiTec一直与欧洲和北美的科学家广泛合作，包括法国巴斯德研究所和荷兰Vrije大学的科学家。通过将许多研究人员的精彩创意商业化，MoBiTec能够提供一系列独特的高质量产品和简化的协议，使实验室生活更轻松，并为实际研究留出更多时间。MoBiTec的产品包括e。G。用于体内检测蛋白质-蛋白质或DNA-蛋白质相互作用的双杂交系统，用于筛选特定肽配体的噬菌粒展示系统和选择具有特异性结合特性的新蛋白质，方便的LamBDaPS基因组文库用于克隆的多功能DNA载体，表达和分析靶基因，有效表达和纯化重组蛋白的试剂盒，细胞转染试剂和细胞培养工具，固定化和可溶性酶，许多用于基因组学和蛋白质组学研究的产品（例如用于PCR，核酸和蛋白质纯化和分析），众多抗体，细胞因子，生长因子和重组蛋白，优质荧光试剂和试剂盒（如蛋白标记试剂盒，标记抗体，细胞染色试剂，柱和凝胶电泳附件）。与其自有产品线并行，MoBiTec分销德国多家国际公司的产品，包括荧光探针和研究化学品（AnaSpec，TEFLabs），量子点，各种DNA纯化试剂盒和DNA聚合酶（EdgeBio），诊断工具（ZJBioTech）），凝胶电泳配件（Amresco，ClareChemical），糖生物学产品（DextraLaboratories，Sumitomo），细胞转染试剂（Mirus）以及抗体，蛋白质，底物，精细化学品和分子和细胞生物学试剂盒 -特别是病毒学，免疫学，神经生物学，细胞凋亡，信号转导，细胞增殖，细胞毒性和癌症研究（MBLI，AGScientific，Amresco，AdarBiotech，AnaSpec，Echelon）。MoBiTec提供全面的服务，从清晰完整的产品文档开始，为客户提供个性化的建议和技术服务。MoBiTec产品通过MoBiTec的总部在德国分销，在其他国家由分销商分销。此外，MoBiTec不断寻求新产品和可销售的许可技术，因此对科学合作非常感兴趣，以开发创新的产品理念。
MoBiTec拥有来自欧洲和北美的研究人员，包括法国的Pasteur研究中心和荷兰的Vrije大学的科学家。MoBiTec公司能提供独一无二的高质量产品,从而简化实验设计，而留出更多更宝贵的时间用于实际的研究。产品包括：双杂交和单杂交系统——体内蛋白-蛋白和DNA-蛋白关系，噬菌体展示系统——筛选特殊的多肽配体和选择具有特异性结合特性的新的蛋白质，LamdaPS基因文库，用于克隆的多功能DNA载体，靶基因的表达与分析，重组蛋白质高效表达和纯化试剂盒，细胞转染试剂和细胞培养工具，各种固体和溶解状态的酶，基因组学和蛋白组学研究产品（PCR，核酸，蛋白质纯化分析），各种抗体、细胞因子、生长因子、重组蛋白质，高级荧光试剂和试剂盒（蛋白质标记试剂盒，标记抗体，细胞染色试剂，钙指示器），亲和层析仪，凝胶分析工具——凝胶柱和凝胶电泳附件。
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蚂蚁淘（www.ebiomall.cn）是中国大陆目前唯一的生物医疗科研用品B2B跨境交易平台，
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2018-12-26
Use of a Hemacytometer A hemacytometer (also spelled hemocytometer) is an etched glass chamber with raised sides that will hold a quartz coverslip exactly 0.1 查看更多
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天津卫凯生物工程有限公司在发布的人骨髓间充质干细胞冻存液供应信息，浏览与人骨髓间充质干细胞冻存液相关的产品或在搜索更多与人骨髓间充质干细胞冻存液相关的内容。 查看更多
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2018-12-26
Thaw vial quickly in 37癈 water. Caution - vial can explode. Transfer cells to sterile, 15 mL centrifuge tube. Add 50 祃 warm FBS (fetal bovine serum, heat inact 查看更多
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2019-05-14
ProChimia ProFoldin PROGEN Proimmune Prokazyme Proliant promega Promocell ProSci ProSpec 丁香通为您找到 10 条 复苏冻存 产品的详细参数,实时报... 查看更多
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2021-08-06
货号：302-14681;306-14684;306-95921 查看更多
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2019-03-03
北京华迈科生物技术有限责任公司在发布的细菌冻存液供应信息，浏览与细菌冻存液相关的产品或在搜索更多与细菌冻存液相关的内容。 查看更多
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2019-07-02
CryoScarless DMSO-Free 无DMSO干细胞冻存液免费领取使用装啦 ... 查看更多
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2019-07-11
细胞冻存液 含血清不含DMSO 查看更多
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2019-02-09
上海觅拓生物科技有限公司在发布的 ZENOAQCELLBANKER 2(无血清型细胞冻存液)供应信息，浏览与 ZENOAQCELLBANKER 2(无血清型细胞冻存液)相关的产品或在搜索更多与 ZENOAQCELLBANKER 2(无血清型细胞冻存液)相关的内容。 查看更多
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2021-08-07
必拓生物无血清快速细胞冻存液疯狂大放送买一送一，还可免费领取试用装活动细则如下：1. 2mL免费领取必拓生物无血清细胞冻存液试用装（包邮哦） （注：1个ID仅限领取1支试用装）2. 买150mL必拓生物无血清细胞冻存液，再赠送一瓶50mL必拓生物无血清细胞冻存液； （注：仅限前30名，再赠送2块96孔细胞培养板）3. 买500mL必拓生物无血清细胞冻存液，再赠送一瓶150mL必拓生物无血清细胞冻存液； （注：仅限前30名，再赠送5块96... 查看更多
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2021-07-21
人类胚胎干细胞冻存液（2×）是由上海斯丹赛生物技术有限公司代理或销售的斯丹赛品牌的试剂，产品来源于上海。上海斯丹赛生物技术有限公司是中国最权威的人类胚胎干细胞冻存液（2×）试剂销售服务商之一，在上海等地方销售人类胚胎干细胞冻存液（2×）试剂已经多年。生物在线为您提供众多企业人类胚胎干细胞冻存液（2×）仪器产品及图片，以便挑选到性价比高，合适的人类胚胎干细胞冻存液（2×）产品 查看更多
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2020-08-12
CELLBANKER 2 无血清完全细胞冻存液是由红荣微再（上海）生物工程技术有限公司代理或销售的CELLBANKER品牌的试剂，产品来源于日本ZENOAQ。红荣微再（上海）生物工程技术有限公司是中国最权威的CELLBANKER 2 无血清完全细胞冻存液试剂销售服务商之一，在上海等地方销售CELLBANKER 2 无血清完全细胞冻存液试剂已经多年。生物在线为您提供众多企业CELLBANKER 2 无血清完全细胞冻存液仪器产品及图片，以便挑选到性价比高，合适的CELLBANKER 2 无血清完全细胞冻存液产 查看更多
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配制细胞冻存液除了fbs,dmso,还需要什么试剂123
不羁放纵IE71GK2021-07-31
细胞冻存是细胞培养、引种、保种和保证实验顺利进行的重要技术手段。在细胞建株和建系中，及时冻存原始细胞是十分重要的。在杂交瘤单克隆抗体的制备过程中，杂交瘤细胞、每次克隆化得到的亚克隆细胞的冻存保种常常是必不可少的实验操作。因为在没有建立一个稳定的细胞系或稳定分泌抗体的细胞系的时候，细胞的培养过程中随时可能因细胞的污染、分泌抗体能力的丧失或遗传变异等等导致实验失败，如果没有原始细胞的冻存，则因为上述的意外而前功尽弃。索莱宝细胞冻存常用冻存液的成分如下：20％血清（FBS）、10％DMSO、70％1640培养液；或90％血清（FBS）、10％DMSO，更可防止细胞内冰晶形成。将DMSO和FBS加入DMEM中，各自含量占总体积的10%，然后滤膜过滤后分装保存备用。
【求助】急求组蛋白的提取方法 蛋白质和糖学 专业医生社区...123
waterf212021-07-21
请问有没有做过冻存（液氮或者-70度冰箱）组织的蛋白（WB)检测,之前看到提取蛋白说明书对冻存组织的提取不好，请问大家建议使用的什么试剂盒呢？谢谢！
哪些人需要做精液冷冻保存呢?精液保存生殖男科/四川省人类精子...123
2021-08-18
只有医院生殖中心和精子库才有资格做吧，自己好像不允许也没那个条件
冰箱冷冻室塑料坏了一个小口会影响使用吗？悟空问答123
2017-09-29
corning的冻存管外包装袋子破了，冻存管还能用吗？
冻存组织的mirna会不会降解123
腐姐控控06102017-09-29
博陵科为 的 miRcute miRNA荧光定量检测试剂盒（SYBR Green）,可检测pg级总RNA中miRNA的单碱基差异 miRcute miRNA荧光定量检测试剂盒（ SYBR Green）中包含miRNA荧光定量检测的所有试剂，包括2×miRcute miRNA premix和Reverse primer。
2×miRcute。
2×miRcute。
原则上,细胞能在也液氮中冻存多久_问答详情_冻存试剂_细胞培养_...123
代号HQ22017-09-29
使用了可靠有效的保护剂恰当冻存的细胞可永远保存在液氮中而保持活力。至少已证明的历史有30-50年了。不管是在液态液氮中，还是在液氮的气相中，过了几十年细胞活力没有明显下降。
但在干冰或-70℃冰箱中保存的细胞，活力下降很快，当然细胞与细胞之间敏感性不同。有实验验证保存在-70℃冰箱中的细胞6个月后活力损失超过50%。ATCC证明在干冰中人类细胞4个月活力损失殆尽，小鼠的细胞可到6个月。
但在干冰或-70℃冰箱中保存的细胞，活力下降很快，当然细胞与细胞之间敏感性不同。有实验验证保存在-70℃冰箱中的细胞6个月后活力损失超过50%。ATCC证明在干冰中人类细胞4个月活力损失殆尽，小鼠的细胞可到6个月。
如何正确复苏冻存HUVEC细胞 企业动态 123
驚嘆1022017-09-29
（转载，仅供参考）
1． 37℃水浴预热培养液（HUVEC-004）。
2． 从液氮中取出HUVEC的细胞管，快速将其置入37℃水浴中解冻，直到管中只剩下最后一片结晶（注意：不要让水没过产品管）。 用75%的酒精擦拭产品管外壁。
3． 将HUVEC的细胞管中的细胞移至15ml无菌离心管中，慢慢逐滴加入预温的37℃ 基础培养液（HUVEC-004B）培养液4－5ml混匀，边加边摇匀。
4． 用1ml的培养液冲洗HUVEC的细胞管，向15ml离心管中加入冲洗的细胞悬液，边滴加边摇匀。
5． 取10μl细胞悬液和10μl台盼蓝混匀后，取10μl计数。
这一步骤非常重要，能确定您收到的产品是否合格（详见如何计数复苏的细胞）
6． HUVEC的细胞悬液在1500rpm，室温条件下，离心10分钟，去除上清。
7． 加HUVEC完全培养液4－5ml, 轻轻混匀细胞，备用。
8． 接种前将 T25培养瓶中的包被液吸去，按2500－5000个细胞/cm2接种细胞。（1支冷冻的细胞可以种一瓶T25培养瓶）
9. 每个HUVEC的细胞培养瓶中加完全培养液（HUVEC-004）3-5ml, 后置于37℃、5%CO2 培养箱内培养。
1． 37℃水浴预热培养液（HUVEC-004）。
2． 从液氮中取出HUVEC的细胞管，快速将其置入37℃水浴中解冻，直到管中只剩下最后一片结晶（注意：不要让水没过产品管）。 用75%的酒精擦拭产品管外壁。
3． 将HUVEC的细胞管中的细胞移至15ml无菌离心管中，慢慢逐滴加入预温的37℃ 基础培养液（HUVEC-004B）培养液4－5ml混匀，边加边摇匀。
4． 用1ml的培养液冲洗HUVEC的细胞管，向15ml离心管中加入冲洗的细胞悬液，边滴加边摇匀。
5． 取10μl细胞悬液和10μl台盼蓝混匀后，取10μl计数。
这一步骤非常重要，能确定您收到的产品是否合格（详见如何计数复苏的细胞）
6． HUVEC的细胞悬液在1500rpm，室温条件下，离心10分钟，去除上清。
7． 加HUVEC完全培养液4－5ml, 轻轻混匀细胞，备用。
8． 接种前将 T25培养瓶中的包被液吸去，按2500－5000个细胞/cm2接种细胞。（1支冷冻的细胞可以种一瓶T25培养瓶）
9. 每个HUVEC的细胞培养瓶中加完全培养液（HUVEC-004）3-5ml, 后置于37℃、5%CO2 培养箱内培养。
凝血酶时间测定试剂盒怎么用,注意事项123
dcfq0042017-09-29
凝血酶时间测定试剂盒(凝固法) 使用说明书 产品名称 1.通用名称：凝血酶时间测定试剂盒 2.英文名称：TT 包装规格 10×2ml，10×4ml，5×2ml，10×10ml 预期用途 本试剂盒用于检测人血浆的凝血酶时间。 该产品可辅助用于高分子量肝素的监控治疗以及纤维蛋白溶解治疗监控，初步筛选纤维蛋白原机能不良及一些严重的纤维蛋白原缺乏病症，可粗略用于检测干素抗凝的治疗。 （1）TT延长的临床意义：超过正常对照3s以上为TT延长：①纤维增多或肝素抗凝物质存在以及AT-III显著提高；②纤维蛋白原降解物的增加；③纤维蛋白原减少；④纤维蛋白原机能障碍；⑤纤维蛋白原分子异常。 （2）TT缩短的临床意义：①高FIB血症；②钙离子存在时或标本有微小凝结块及PH呈酸性。 检验原理 适量的凝血酶将血浆样品中的纤维蛋白原转变成纤维蛋白，从而使血浆凝固。凝固所需的时间即为凝血酶时间(TT)。 主要组成成份 凝血酶 28.5IU/ml Hepes缓冲液 60mM 储存条件及有效期 2-8℃可保存12个月，未开封试剂有效期内稳定。开封复溶后37℃下试剂可稳定7天。 适用仪器 适用于SYSMEX CA-50半自动血凝仪，SYSMEX CA-1500全自动血凝仪， STAGO COMPACT全自动血凝仪。 样本要求 新鲜静脉血与0.109M的柠檬酸钠按9:1混合均匀，以3000rpm离心15分钟(建议使用低温离心机)，收集上层液体(血浆)，在2小时内进行实验。如果样品2小时内不能检测，血浆应冻存。-20℃以下冷冻保存两周，-70℃以下冷冻可保存一个月。冻存的样品检测前必须37℃迅速解冻，不可反复冻融。 检验方法 1.半自动血凝仪将 TT试剂平衡至室温，轻轻倒置混匀。 2.全自动血凝仪 操作参照仪器操作手册。 血浆/试剂比例请按检验方法1操作要求。 3.质量控制 各实验室应建立自己的正常和异常质控范围，以核定仪器和试剂的操作。 4.结果显示 凝血酶时间测定结果以秒显示。 参考区间 9.0～16.0秒。 以上值仅供参考。由于仪器、实验室、当地人群之间都可能有差异，建议建立自己的参考范围。 检验结果的解释 可能影响检验结果的因素： 1.血凝仪未按要求定期维护保养出现异常。 2.质控品未按说明书正确使用操作。 3.加样器等移液器具未定期校验，出现异常。 检验方法的局限性 1.本试剂仅用于体外诊断。 2.本实验结果仅作为临床诊断辅助参考。 产品性能指标 1.批间差：用质控血浆重复测试不同批号试剂，所得结果变异系数（CV）应不超过10%。 2.重复性：用质控血浆重复测试所得结果的变异系数（CV）应不超过5%。 注意事项 1.样本避免出现泡沫。样本采集和凝血试验必须使用一次性塑料或硅化玻璃容器。 2.用浊度法测定终点的血凝仪，溶血和较明显的黄疸及脂血会影响测定结果，此时宜用 手工或电子机械血凝仪测定。 3.红细胞比容在20-55%范围之外时，应调整抗凝剂用量。 抗凝剂用量(ml)=0.00185×血液体积(ml)×(100-比容) 4.样本不宜采用草酸盐、EDTA和肝素做抗凝剂。 5.测定温度为37℃±0.5℃，需经常检查加热元件的温度。 6.实验器具必须清洁，不能有去垢剂存在。测定操作时佩戴一次性手套。
2014年临床医学检验主管技师考试模拟试卷及答案专业实践能力123
Trrrrrrouble2021-07-26
各位大神们，我的课题实验需要提取临床患者抗凝外周血的血浆进行冻存和后续研究，由于血样珍贵，老板让我把离心提取血浆之后所剩的沉淀也加以利用，从剩下的沉淀（血细胞）当中提取出白细胞并冻存，用于之后做western。我用自己的外周血标本试做了一下，5mlEDTA抗凝外周血，3000rpm4℃离心10min后，取上层血浆分装-80冻存用于相关ELAISA实验，然后在下层沉淀（血细胞）中加入3倍体积的溶血剂，静置10min使红细胞裂解之后离心，结果并没有明显的分层，我重复了加溶血剂裂解红细胞并离心的步骤，到最后的结果还是只能达到如图所示。可以看到一层灰白色物质，但无法完全分离提取白细胞，所以想请教各位大神：①我的操作中有哪些错误烦请大家指出；②我用的溶血剂是OptilyseC的溶血剂，是否是试剂的问题？是否需要购买专门的红细胞裂解液，或者自行配制？③为什么裂解红细胞之后分层并不明显，多次离心之后还是分不清楚？④如果可以提取出白细胞，是否可以直接加入冻存液将白细胞-80℃冻存用于之后的研究（主要是Western，不影响细胞内蛋白即可）？因为是第一次做实验，血样珍贵，这种处理方法做过的人也很少，烦请有经验的各位批评指正，向大家虚心请教学习，不胜感激！
酵母转化试剂盒中peg中文名是什么意思123
亚由美JOA2017-09-29
酵母转化试剂盒中peg中文名是什么意思
1、毕氏酵母氯化锂转化法
(1)试剂1M LiCl(用去离子蒸馏水配制，滤膜过滤除菌;必要时用消毒去离子水稀释)50% PEG3350(Sigma P3640 用去离子蒸馏水配制，滤膜过滤除菌，用较紧的盖子的瓶子分装)2mg/ml salmon sperm DNA / TE(10mM Tris-Cl, pH8.0, 1.0mM EDTA)-20℃保存注：醋酸锂对毕氏酵母无效，仅氯化锂有效;PEG3350可屏蔽高浓度LiCl的毒害作用;
(2)感受态毕氏酵母的制备接种Pachia pastoris到50ml YPD培养基中，30℃摇菌过夜(约24～28h)培养到OD值为0.8～1.0(约108 Cells/ml);收获细胞，用25ml无菌水洗涤一次，室温下1500g离心10min;重悬细胞于1ml 100mM LiCl溶液中，将悬液转入1.5ml离心管;离心机最大速度离心15秒沉淀菌体，重悬菌体于400ul 100mM LiCl溶液中;按50ul/管分装，立即进行转化;注：不要将感受态酵母菌冰浴;
(3)毕氏酵母的转化煮沸1ml鲑鱼精DNA 5min，迅速冰浴以制备单链担体DNA;将感受态酵母菌离心，以Tips去除残余的LiCl溶液;对于每一个转化，按以下顺序加入：50% PEG3350 240ul1M LiCl 36ul2mg/ml 单链Salmon sperm DNA 25ul5～10ug/50ul H2O 质粒DNA 50ul剧烈旋涡混匀直至沉淀菌体完全分布均匀(约1min);30℃水浴孵育30min;42℃水浴热休克20～25min;6000～8000rpm离心收集酵母菌体;重悬酵母于1ml YPD培养基，30℃摇床孵育;1～4h后，取25～100ul菌液铺选择性培养基平板，于30℃培养2～3天鉴定;
2、毕氏酵母PEG1000转化法
(1)试剂缓冲液A：1.0M Sorbitol，10mM Bicine，pH8.35(sigma),3%(v/v)ethylene glycol缓冲液B：40%(w/v)PEG1000(sigma)，0.2M Bicine，pH8.35缓冲液C：0.15M NaCl，10mM Bicine，pH8.35未污染的新鲜、试剂级DMSO，-70℃保存注：缓冲液A、B、C均用滤膜过滤，-20℃保存;将DNA直接加在冻结的酵母细胞上是本实验的关键之处(即使在冰上解冻的待转化细胞，其摄取外源DNA的能力也在解冻过程中迅速下降;如进行多样品的转化，建议按6样品/组进行);
(2)待转化毕氏酵母的制备接种环接种Pachia pastoris于YPD平板，30℃培养2d;挑取单克隆酵母菌株于10mlYPD培养基中，30℃振荡培养过夜;取步骤2中小量菌液接种到100mlYPD培养基中振荡培养，待其OD值从0.1升到0.5～0.8;室温下3000g离心收集酵母菌体，50ml缓冲液A洗涤一次;重悬菌体于4ml缓冲液A中，按0.2ml/管分装于1.5ml的离心管中，每管加入11ulDMSO，混合后迅速于液氮中冷冻，-70℃保存
(3)毕氏酵母的转化将约50ug线性化质粒DNA溶于20ul TE或水中，直接加于冻结的酵母细胞中;加入担体DNA(40ug变性超声线性化鲑鱼精DNA)以获得最大转化率;37℃水浴孵育5min，中间混合样品1～2次;取出离心管，加入1.5ml缓冲液B，彻底混匀;30℃水浴孵育1h;室温下2000g离心10min，去除上清液，菌体沉淀重悬于1.5ml缓冲液C中;离心样品，去除上清液，轻微操作将样品重悬于0.2ml缓冲液C中;将所有转化液铺于选择性平板，于30℃孵育3～4天后，鉴定;
3、毕氏酵母电转化法
(1)E.coli TOP10F’感受态细胞的制备取10ul TOP10F’菌液，接种于200ml LB液体培养基中活化培养，37℃，200 rpm，16～18小时。取100ul菌液接种于200ml液体LB培养基中。37℃，200 rpm，培养16～18小时。灭菌500 ml离心管，4℃，4000 rpm，20 min。得菌体沉淀。弃上清，菌体用10%甘油重悬并洗涤。重复洗涤3次。第三次离心后，弃绝大部分上清，留下约1ml 液体用于重悬菌体。从制得得感受态细胞中，取200ul于灭菌EP管中，加入连接反应产物5ul，混匀，不要产生气泡，在冰上放置5min。将混匀后得200ul菌液移入电击杯中。使用电击穿孔仪进行转化，设置为电压 2500 V，时间 5 ms。电击后，往电击杯中加入 800ul SOC培养基，冲洗出菌体，转移至灭菌1.5 ml EP管中。37℃，150 rpm ，轻摇45～60 min。取全部均匀涂布于含 Zeocin 25 ug/ml 的LLB-Zeocin平板上，正放，待涂布液不在流动，37℃ 培养12～16小时。
(2)线性化质粒DNA对Pichia pastorisGS115的转化取新鲜制备的(或-70℃冻存的)感受态细胞置于冰浴中，使其完全解冻;
1)将100μl菌体移出至一新的无菌Eppendorf管中，加入5-20μg线性化质粒(5～10μl)，轻弹混匀，尽数吸出转移到0.2cm型的电穿孔转化杯中;
2) 转化杯置于冰浴中5～10分钟，保持低温。
3) 电穿孔转化电击条件：电压：1500V;电阻：400Ω;电容：25μF;脉冲时间：10mS;一次电击。
4) 电击后，马上在电击转化杯中加入1ml 4℃预冷的1M的山梨醇溶液，用微量移液枪吹打均匀，置于冰浴中;5) 取30℃烘至表面半干的MD培养基平板，在超净工作台上无菌操作涂布平板，400μl/板
1、毕氏酵母氯化锂转化法
(1)试剂1M LiCl(用去离子蒸馏水配制，滤膜过滤除菌;必要时用消毒去离子水稀释)50% PEG3350(Sigma P3640 用去离子蒸馏水配制，滤膜过滤除菌，用较紧的盖子的瓶子分装)2mg/ml salmon sperm DNA / TE(10mM Tris-Cl, pH8.0, 1.0mM EDTA)-20℃保存注：醋酸锂对毕氏酵母无效，仅氯化锂有效;PEG3350可屏蔽高浓度LiCl的毒害作用;
(2)感受态毕氏酵母的制备接种Pachia pastoris到50ml YPD培养基中，30℃摇菌过夜(约24～28h)培养到OD值为0.8～1.0(约108 Cells/ml);收获细胞，用25ml无菌水洗涤一次，室温下1500g离心10min;重悬细胞于1ml 100mM LiCl溶液中，将悬液转入1.5ml离心管;离心机最大速度离心15秒沉淀菌体，重悬菌体于400ul 100mM LiCl溶液中;按50ul/管分装，立即进行转化;注：不要将感受态酵母菌冰浴;
(3)毕氏酵母的转化煮沸1ml鲑鱼精DNA 5min，迅速冰浴以制备单链担体DNA;将感受态酵母菌离心，以Tips去除残余的LiCl溶液;对于每一个转化，按以下顺序加入：50% PEG3350 240ul1M LiCl 36ul2mg/ml 单链Salmon sperm DNA 25ul5～10ug/50ul H2O 质粒DNA 50ul剧烈旋涡混匀直至沉淀菌体完全分布均匀(约1min);30℃水浴孵育30min;42℃水浴热休克20～25min;6000～8000rpm离心收集酵母菌体;重悬酵母于1ml YPD培养基，30℃摇床孵育;1～4h后，取25～100ul菌液铺选择性培养基平板，于30℃培养2～3天鉴定;
2、毕氏酵母PEG1000转化法
(1)试剂缓冲液A：1.0M Sorbitol，10mM Bicine，pH8.35(sigma),3%(v/v)ethylene glycol缓冲液B：40%(w/v)PEG1000(sigma)，0.2M Bicine，pH8.35缓冲液C：0.15M NaCl，10mM Bicine，pH8.35未污染的新鲜、试剂级DMSO，-70℃保存注：缓冲液A、B、C均用滤膜过滤，-20℃保存;将DNA直接加在冻结的酵母细胞上是本实验的关键之处(即使在冰上解冻的待转化细胞，其摄取外源DNA的能力也在解冻过程中迅速下降;如进行多样品的转化，建议按6样品/组进行);
(2)待转化毕氏酵母的制备接种环接种Pachia pastoris于YPD平板，30℃培养2d;挑取单克隆酵母菌株于10mlYPD培养基中，30℃振荡培养过夜;取步骤2中小量菌液接种到100mlYPD培养基中振荡培养，待其OD值从0.1升到0.5～0.8;室温下3000g离心收集酵母菌体，50ml缓冲液A洗涤一次;重悬菌体于4ml缓冲液A中，按0.2ml/管分装于1.5ml的离心管中，每管加入11ulDMSO，混合后迅速于液氮中冷冻，-70℃保存
(3)毕氏酵母的转化将约50ug线性化质粒DNA溶于20ul TE或水中，直接加于冻结的酵母细胞中;加入担体DNA(40ug变性超声线性化鲑鱼精DNA)以获得最大转化率;37℃水浴孵育5min，中间混合样品1～2次;取出离心管，加入1.5ml缓冲液B，彻底混匀;30℃水浴孵育1h;室温下2000g离心10min，去除上清液，菌体沉淀重悬于1.5ml缓冲液C中;离心样品，去除上清液，轻微操作将样品重悬于0.2ml缓冲液C中;将所有转化液铺于选择性平板，于30℃孵育3～4天后，鉴定;
3、毕氏酵母电转化法
(1)E.coli TOP10F’感受态细胞的制备取10ul TOP10F’菌液，接种于200ml LB液体培养基中活化培养，37℃，200 rpm，16～18小时。取100ul菌液接种于200ml液体LB培养基中。37℃，200 rpm，培养16～18小时。灭菌500 ml离心管，4℃，4000 rpm，20 min。得菌体沉淀。弃上清，菌体用10%甘油重悬并洗涤。重复洗涤3次。第三次离心后，弃绝大部分上清，留下约1ml 液体用于重悬菌体。从制得得感受态细胞中，取200ul于灭菌EP管中，加入连接反应产物5ul，混匀，不要产生气泡，在冰上放置5min。将混匀后得200ul菌液移入电击杯中。使用电击穿孔仪进行转化，设置为电压 2500 V，时间 5 ms。电击后，往电击杯中加入 800ul SOC培养基，冲洗出菌体，转移至灭菌1.5 ml EP管中。37℃，150 rpm ，轻摇45～60 min。取全部均匀涂布于含 Zeocin 25 ug/ml 的LLB-Zeocin平板上，正放，待涂布液不在流动，37℃ 培养12～16小时。
(2)线性化质粒DNA对Pichia pastorisGS115的转化取新鲜制备的(或-70℃冻存的)感受态细胞置于冰浴中，使其完全解冻;
1)将100μl菌体移出至一新的无菌Eppendorf管中，加入5-20μg线性化质粒(5～10μl)，轻弹混匀，尽数吸出转移到0.2cm型的电穿孔转化杯中;
2) 转化杯置于冰浴中5～10分钟，保持低温。
3) 电穿孔转化电击条件：电压：1500V;电阻：400Ω;电容：25μF;脉冲时间：10mS;一次电击。
4) 电击后，马上在电击转化杯中加入1ml 4℃预冷的1M的山梨醇溶液，用微量移液枪吹打均匀，置于冰浴中;5) 取30℃烘至表面半干的MD培养基平板，在超净工作台上无菌操作涂布平板，400μl/板
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