
Simple StopTM 3 is a phosphatase inhibitor cocktail consisting of three phosphatase inhibitors that target alkaline and serine/threonine phosphatases. It is a stabilized solution of cantharidin, bromotetramisole and microcystin LR. It is compatible with IEF/2D studies.The Simple StopTM phosphatase inhibitor cocktails are 100X concentrated, ready-to-use solutions that are simply added to your extraction buffers or samples. They are ideal for inhibition in tissue extractions and cell lysis experiments and are compatible with most common protein assays.
GoldBio活体成像技术:早在1999年由美国哈佛大学Weissleder博士率先提出了分子影像学(molecularimaging,MI)的概念,即应用影像学的方法对活体状态下的生物过程进行细胞和分子水平的定性和定量研究。活体成像便是基于分子影像学孕育而生的,通过这个成像系统,可以观测活体动物体内肿瘤的生长及转移,感染性疾病的发展进程,特定基因的表达等生物学过程。活体成像技术主要采用生物发光(bioluminescence)与荧光(fluorescence)两种技术。★生物发光是用荧光素酶基因标记细胞或DNA。★荧光技术则采用荧光报告基团(GFP、RFP,Cyt及dyes等)进行标记。★这一技术对肿瘤微小转移灶的检测灵敏度极高,不涉及放射性物质和方法,非常安全。操作极其简单、所得结果直观、灵敏度高。
活体成像两种检测技术介绍活体成像特点优点缺点生物发光检测bioluminescence★荧光素酶(Luciferase)对基因、细胞和活体动物进行标记;★荧光素酶催化底物(例如荧光素钾盐)反应后,会产生化学发光。这种光是由化学反应而来,不需要激发光;★标记方法是通过克隆技术,将荧光素酶的基因插入到预期观察的细胞染色体内,通过对克隆细胞进行筛选,培养出能稳定表达荧光素酶的细胞株。再将细胞株转移至特定的小鼠体内形成模型。★特异性强,无自发荧光;★高灵敏度,在体内可检测到几百个细胞,检测的深度在3-100px;★定量精确 ★信号较弱,检测时间较长;★仪器精密度要求较高;★细胞或基因需要转基因标记;★不可用于人体,不适用于抗体、多肽等标记荧光检测fluorescence★采用荧光报告基因(GFP、RFP等)或荧光染料进行标记;★需要外接激发光源,利用报告基因、荧光蛋白质或染料产生的荧光,就可以形成体内的生物光源。★荧光染料、蛋白标记能力强;★信号强,成像速度快,操作简便,实验成本较低;★未来可用于人;★适用范围广,可以是动物、细胞、微生物,也可以是抗体、药物、纳米材料等。★存在自发荧光,影响灵敏度;★光容易被动物组织吸收;★检测深度受限;★背景光干扰,定量准确度低
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RMgX + RX = R-R + MgX2.
这个反应需要的能量比生成格氏试剂的高,
因此降低反应温度是第一个选择。
其次, 增加镁得摩尔比, 让 RX与镁有更多机会反应, 而不是与RMgX。
第三, 降低RX的浓度, 即用更多的溶剂, 因为溶剂和格氏试剂有很显著的溶剂络合。
第四, 缓慢滴加RX., 即降低RX.在反应体系的浓度。
第五, 增加搅拌速率, 即, 让RX.与镁有更好的接触。
、
Cell-Based ELISA
的优点:
Cell-Based ELISA
(基于细胞的
ELISA
)是一种全新的
ELISA
技术,有两个最突出的优点:
1.1
不需要抽提蛋白、包被微孔板:细胞直接在微孔板里培养,待检测的时候,将细胞固定在微孔板上并
进行通透处理即可。这样就避免了抽提蛋白时,由于客观和主观上引起样品的损失而导致实验结果在一定
程度上偏离了实际情况。
同时不用包被微孔板,
简化了实验流程,
有助于提高效率。
科研人员在一个
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孔
酶联板上,便能检测目标细胞蛋白经刺激或抑制作用后的表现。由于省去抽提蛋白和裂解细胞的步骤,样
本的损失也能降到最低,比起其他普通的
ELISA
测定方法,这项全新的
ELISA
技术能更快速、更方便
地一次检测大量的细胞内蛋白。
1.2
可同时检测两种不同蛋白:
封闭后加入两种抗不同蛋白且来源于不同宿主的一抗,
然后再加入不同的
二抗,加入两种荧光底物,检测两个波长。同时检测两种蛋白的好处是显而易见的,可以减少工作量,此
外还可以满足一些特殊的实验需要,例如,需要测定某个蛋白的磷酸化比例,就需要测定磷酸化蛋白的数
量和总蛋白的数量,这两个测定在同一次实验进行,有助于消除实验误差,得到更为精确的实验结果。
2
、
Cell-Based ELISA
的两种技术:
某些公司发展了双通道
Cell-Based ELISA
技术;
双通道与单通道
Cell-based ELISA
比较:
双通道
cell-based ELISA
,顾名思义,即一次可以同时检测两种目的蛋白,
R&D Systems
提供的
Cell-based ELISA
就是双通道
cell-based ELISA
,原理略:(需要荧光检测方式和相应仪器);
单通道
cell-based ELISA
,即一次只能检测一种目的蛋白,他和普通
ELISA
的主要区别在于样品处理过
程
3
、
cell-based ELISA
的应用:
该产品,最多发展起来的是用于检测磷酸化和非磷酸化蛋白的相对含量;
4
、有
cell-based ELISA
产品的公司:目前,多家
elisa
产品提供
商均
提供
cell
based
elisa
试剂盒,
如
Rnd
systems
,
raybiotech
,
ebioscience
,
millipore
等公司;
5
、如何自己进行
cell based elisa
实验?
事实上,根据单通道的
cell based elisa
原理,可以自己建立
cell based elisa
实验系统;
细胞加入培养板中;
加入刺激物或者抑制剂进行培养;
对细胞进行固定或者封闭;
加入第一抗体;
加入
HRP
结合的二抗(二抗的选择,同
western blot
);
加入底物进行显色;
天然产物,大多都有颜色,
存在干扰,多数情况下需要做样品的阴性对照,
尽量能用荧光的方法,
之前我们做过,将两个试剂盒的方法合并后,做的,
效果还可以
1. 姜黄素是一个典型的HAT抑制剂。
2. 针对P300: 在大约10年前,Cole和他的同事设计出了一种p300/CBP抑制剂,发表在nature杂志上。
希望能帮到你,望采纳!

