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제품특징
□ 제품 설명
Western BLoT HRP Substrate 시리즈는 western blot 검출시 단백질 옮긴 membrane에서 반응한 horseradish peroxidase(HRP)표지 항체를 검출하기 위한 화학 발광 기질이다.Western BLoT Chemiluminescence HRP Substrate는 X선 필름을 이용한 검출방법에 적절한 감도를 제공한다. Western BLoT HRP Substrate 시리즈 중에서 가장 베이직인 기질로, 강한 발광 시그널이 지속하기 때문에, 짧은 시간으로도 검출이 가능하여, 반복 검출도 가능하다.Western BLoT Quant HRP Substrate는 CCD 카메라를 이용하여 western blot 검출을 위해서 개발된 화학발광기질로, 폭넓은 단백질 농도영역에서 직선성을 나타내며, 높은 단백질 농도에서도 기질 고갈이 적기 때문에, 직선성과 폭넓은 dynamic range 를 갖는 CCD 카메라의 이점을 최대한으로 이용할 수 있다. 또 발광의 지속 시간이 길고, 시그널이 강하고, 백그라운드가 매우 낮기 때문에 노출 시간을 길게 해 소량의 단백질을 검출하는 것이 가능하다.Western BLoT Hyper HRP Substrate는 Western BLoT Quant HRP Substrate의 쓰기 쉽고 높은 정량성을 갖는다는 장점을 유지하면서, 보다 더 고감도로 검출할 수 있도록 설계된 제품이다. 그러나 소량의 단백질의 검출이나 극히 한정된 양의 일차 항체 밖에 사용하지 못한다. 소량의 단백질 검출이나, 극히 한정된 양의 일차 항체 밖에 사용하지 못하며 높은 희석율이 요구되는 경우, 일차 항체의 affinity가 비교적 낮은 경우 등, 높은 검출 감도가 요구되는 경우에 적절한 제품이다Western BLoT Ultra Sensitive HRP Substrate는,Western BLoT HRP Substrate시리즈중 가장 감도가 높은 검출 시약으로 강한 시그널로 펨트그람 수준의 단백질까지 검출할 수 있다. Western BLoT Quant HRP Substrate와 Western BLoT Hyper HRP Substrate는 X선 필름 검출에 사용할 수도 있다. 다만, X선 필름의 dynamic range는 CCD 카메라에 비하면 좁기 때문에 얻을 수 있는 데이터의 정량성은 낮아진다.Western BLoT Ultra Sensitive HRP Substrate 역시 X선필름에서 고감도 검출이 가능하지만, 발광 강도가 매우 높기 때문에, X선필름을 이용해 검출하는 경우 노광 시간의 단축이나 항체의 희석등이 필요하다.
□ 내용
| Western BLoT Chemiluminescence HRP Substrate (Code T7101A) | |
| (250 mL, for 2500 cm2 of membrane) | |
| Western BLoT Chemiluminescence Luminol/Enhancer Solution | 125 ml（light-proof bottle） |
| Western BLoT Chemiluminescence Peroxide Reagent | 125 ml（clear bottle） |
Western BLoT Quant HRP Substrate (Code T7102A) | |
| (100 ml, for 1,000 cm2 of membrane) | |
| Western BLoT Quant Luminol/Enhancer Solution | 50 ml（light-proof bottle） |
| Western BLoT Quant Peroxide Reagent | 50 ml（clear bottle） |
Western BLoT Hyper HRP Substrate (Code T7103A) | |
| (100 ml, for 1,000 cm2 of membrane) | |
| Western BLoT Hyper Luminol/Enhancer Solution | 50 ml（light-proof bottle） |
| Western BLoT Hyper Peroxide Reagent | 50 ml（clear bottle） |
Western BLoT Ultra Sensitive HRP Substrate (Code T7104A） | |
| (100 ml, For 1,000 cm2 of membrane) | |
| Western BLoT Ultra Sensitive Luminol/Enhancer Solution | 50 ml (light-proof bottle) |
| Western BLoT Ultra Sensitive Peroxide Reagent | 50 ml (light-proof bottle) |
□ 운송
Code: T7101A/B, T7102A/B, T7103A/B (실온)Code: T7104A/B (4℃)
□ 보존
4℃
□ Western Blot HRP Substrate 시리즈의 사용구분
제품명 | 특징 | 검출한계 | 검출 | Membrane |
Western BLoT Chemiluminescence HRP Substrate | 1. 발광이 강하다 2. 명료한 시그널 | picogram | X선 필름 | 1. Nitrocellulose membrane2.PVDF |
Western BLoT Quant HRP Substrate | 1 .안정된 발광 오랜 지속 2. 고감도 3번의 정량 | 낮은 영역 picogram | CCD카메라 X선 필름 | 1. Nitrocellulose membrane2.PVDF |
Western BLoT Hyper HRP Substrate | 소량의 항체도높은검출량 | femtogram | CCD카메라 X선 필름 | 1. Nitrocellulose membrane2.PVDF |
Western BLoT Ultra Sensitive HRP Substrate | HRP Substrate시리즈중 가장 높은 감도 | 낮은 수준 Femtogram | CCD카메라 X선 필름 | 1. Nitrocellulose membrane2.PVDF |
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RMgX + RX = R-R + MgX2.
这个反应需要的能量比生成格氏试剂的高，
因此降低反应温度是第一个选择。
其次， 增加镁得摩尔比， 让 RX与镁有更多机会反应， 而不是与RMgX。
第三， 降低RX的浓度, 即用更多的溶剂， 因为溶剂和格氏试剂有很显著的溶剂络合。
第四， 缓慢滴加RX.， 即降低RX.在反应体系的浓度。
第五， 增加搅拌速率， 即， 让RX.与镁有更好的接触。
、
Cell-Based ELISA
的优点：
Cell-Based ELISA
（基于细胞的
ELISA
）是一种全新的
ELISA
技术，有两个最突出的优点：
1.1
不需要抽提蛋白、包被微孔板：细胞直接在微孔板里培养，待检测的时候，将细胞固定在微孔板上并
进行通透处理即可。这样就避免了抽提蛋白时，由于客观和主观上引起样品的损失而导致实验结果在一定
程度上偏离了实际情况。
同时不用包被微孔板，
简化了实验流程，
有助于提高效率。
科研人员在一个
96
孔
酶联板上，便能检测目标细胞蛋白经刺激或抑制作用后的表现。由于省去抽提蛋白和裂解细胞的步骤，样
本的损失也能降到最低，比起其他普通的
ELISA
测定方法，这项全新的
ELISA
技术能更快速、更方便
地一次检测大量的细胞内蛋白。
1.2
可同时检测两种不同蛋白：
封闭后加入两种抗不同蛋白且来源于不同宿主的一抗，
然后再加入不同的
二抗，加入两种荧光底物，检测两个波长。同时检测两种蛋白的好处是显而易见的，可以减少工作量，此
外还可以满足一些特殊的实验需要，例如，需要测定某个蛋白的磷酸化比例，就需要测定磷酸化蛋白的数
量和总蛋白的数量，这两个测定在同一次实验进行，有助于消除实验误差，得到更为精确的实验结果。
2
、
Cell-Based ELISA
的两种技术：
某些公司发展了双通道
Cell-Based ELISA
技术；
双通道与单通道
Cell-based ELISA
比较：
双通道
cell-based ELISA
，顾名思义，即一次可以同时检测两种目的蛋白，
R&D Systems
提供的
Cell-based ELISA
就是双通道
cell-based ELISA
，原理略：（需要荧光检测方式和相应仪器）；
单通道
cell-based ELISA
，即一次只能检测一种目的蛋白，他和普通
ELISA
的主要区别在于样品处理过
程
3
、
cell-based ELISA
的应用：
该产品，最多发展起来的是用于检测磷酸化和非磷酸化蛋白的相对含量；
4
、有
cell-based ELISA
产品的公司：目前，多家
elisa
产品提供
商均
提供
cell
based
elisa
试剂盒，
如
Rnd
systems
，
raybiotech
，
ebioscience
，
millipore
等公司；
5
、如何自己进行
cell based elisa
实验？
事实上，根据单通道的
cell based elisa
原理，可以自己建立
cell based elisa
实验系统；
细胞加入培养板中；
加入刺激物或者抑制剂进行培养；
对细胞进行固定或者封闭；
加入第一抗体；
加入
HRP
结合的二抗（二抗的选择，同
western blot
）；
加入底物进行显色；
天然产物，大多都有颜色，
存在干扰，多数情况下需要做样品的阴性对照，
尽量能用荧光的方法，
之前我们做过，将两个试剂盒的方法合并后，做的，
效果还可以
1. 姜黄素是一个典型的HAT抑制剂。
2. 针对P300: 在大约10年前，Cole和他的同事设计出了一种p300/CBP抑制剂，发表在nature杂志上。
希望能帮到你，望采纳！
