
Description
Lipofectamine®3000TransfectionReagentleveragesourmostadvancedlipidnanoparticletechnologytoprovidesuperiortransfectionperformancewithimprovedapplicationoutcomesandreproducIBLeresults.ThisreagentdeliverssuperiortransfectionefficiencyandimprovedcellviABIlityforthewidestrangeofhard-to-transfectandcommoncells(e.g.,HEK293,HeLa).SuccessfullytransfectthewidestvarietyofBIOLOGicallyrelevantcelltypeswithareagentthatoffers:
•Superiorperformance—ourhighestefficiencyreagentfordifficult-to-transfectcells
•Improvedcellviability—gentleonyourcells,withlowtoxicity
•Versatile—onereagentforDNA,RNA,andco-transfection
EfficientlyTransfectDifficult-to-TransfectCells
Lipofectamine®3000reagentisdesignedtoefficientlytransfectdifficult-to-transfectcells,yieldingsuperiortransfectionperformanceacrossthebroadestarrayofcelltypes.Successfullytransfectedcelltypesinclude:
Fibroblast(3T3,COS-7) | Myoblast(C2C12,L6CRL-1458) |
Hepatocyte(HepG2,HuH7) | Erythroleukemiccell(K562) |
Breastcarcinoma(MCF7,Hs578T) | Prostatecarcinoma(LNCap) |
Lungcarcinoma(A549,NCI-H460) | Osteosarcoma(U-2OS,Saos-2) |
Coloncarcinoma(Caco2,SW480) | Pancreaticcarcinoma(PANC-1) |
Skinmelanoma(SK-MEL-28) |
Viewperformancedatafor60+celllinespluscomparisontoLipofectamine2000>
TransfectCommonCellsEfficientlyandCost-Effectively
Forcommoncelltypes,Lipofectamine®3000reagentismorecost-effectivethanotherreagentsduetoitshighconcentrationandlowusageamount.The1.5mLsizeprovidesupto1500transfectionreactions(in24-wellplates).
AchieveSuperiorTransfectionEfficiencyWhileMaintainingLowToxicity
Lipofectamine®3000reagentmaintainsahightransfectionefficiencywithinarobustdynamicrangeoflipiddosesforquickandeasyoptimization.Alowtoxicitylipiddose(0.75µLfor24-wellplates)issuggestedforapplicationsrequiringminimaldisruptionofthecells.
EnableHighTransfectionEfficiencyinNovelGenomeEditingApplications
Lipofectamine®3000reagentissuitablefornovelgenomeeditingapplications.ItincreasesthelikelihoodofsuccessfulcleavageandrecombinationwithTALENsorCRISPRsthroughhighlyefficienttransfection,ultimatelymaximizingtheefficiencyofgeneticmodificationsandsimplifyingthedownstreamprocesses.
Figures


Part1:BetterperformanceinanarrayofcelllinescomparedtoLipofectamine®2000reagent

Lipofectamine®3000transfectionproceduredetails

Lipofectamine®3000transfectionworkflow

EnhancedtransfectionefficiencyusingLipofectamine®3000

Part2:BetterperformanceinanarrayofcelllinescomparedtoLipofectamine®2000reagent

CleavageefficiencyforGeneArt®TALENsandCRISPRs

Specifications
CellType: | EstablishedCellLines, Hard-to-TransfectCells, PrimaryCells, StemCells |
---|---|
SampleType(Specific): | PlasmidDNA, RNAiPlasmids(shRNA,miR), SyntheticsiRNA |
Classification: | AnimalOrigin-Free |
TransfectionTechnique: | Lipid-BasedTransfection |
SerumCompatible: | Yes |
ProductLine: | Lipofectamine® |
ProductSize: | 0.1mL |
Contents&storage
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我刚开始做转染,悬浮细胞,分别做过表达和敲减,看了很多文献,大都没有提及转染后是用转染的这同一批细胞同时做pcr,wb,cck8,凋亡,细胞周期;还是说这次转染只做pcr或wb,再转染一次做cck8或细胞周期。剩下的功能试验均同前,转染一次做一次?我养的是悬浮细胞,转染后做cck8这些功能试验前需要离心换液吗?跪谢解答!
大家都是用什么方法挑选细胞单克隆的
单克隆:单克隆是指‘子代来源于一个母体.
细胞培养:细胞的大规模克隆.细胞培养,既包括微生物细胞的培养,细胞培养技术可以由一个细胞经过大量培养成为简单的单细胞或极少分化的多细胞.
单克隆一般常指动植物细胞的克隆,细胞培养一般是指动物、微生物等细胞的细胞克隆.
二者没有什么明显区别.单克隆在单克隆抗体制备中比较常见.其实是对骨髓瘤细胞的细胞培养.
DXY721认为:
悬浮细胞和贴壁细胞在转染过程中差别不大,主要差别在于转染后的筛选,当然如果你做的是瞬时转染就不存在筛选的问题了。
其实转染的过程很简单,问题是能不能转的进去的,转染率能有多少,转进去是否可以稳定表达目的蛋白等等。
我们也是用脂质体做悬浮细胞的转染,说明书上都有具体的操作过程,将脂质体和目的基因按比例混合,然后加到细胞悬液里就OK了,说的简单,实际上还是有一些细节要注意的,比如脂质体和目的基因混合的比例,转染的细胞数,细胞的代数,细胞的状态,有的还要求在转染的前一天传代一次,不过不要怕,这些在脂质体说明书上都有明确的说明,按照说明书做就可以了。
jinghuanlv认为:
悬浮细胞和贴壁细胞转染还是有很大不同的。
脂质体转染的原理基于电荷吸引原理,先形成脂质体-DNA复合物,散布在细胞周围,然后通过细胞的内吞作用,将目的基因导入细胞内,而脂质体复合物与贴壁细胞的接触机会比悬浮细胞高出很多倍,所以,脂质体转染时悬浮细胞的转染效率要明显低于贴壁细胞。
我们实验室转染悬浮细胞是用的电穿孔法,目前为止,悬浮细胞转染的最好方法还是电转,我们实验室用的电转仪是Bio-Rad的,使用条件是电压250V,电容975uF,效果不错,不妨一用。
本人研究生
各位版友求助,
我使用Hek293构建转染模型,瞬转5质粒,用lipo2000做转染体系。
转染48h,发现荧光较强的细胞都在爬片的边缘,比例十分少。是因为我添加试剂的手法不对吗。
同时也发现加入转染体系后细胞状态特别差。想问一下用lipo2000时可以用无双抗的10%FBSDMEM吗。我转染前6h现在用的是纯DMEM,不含FBS。
请各位大神帮忙
DXY721认为:
悬浮细胞和贴壁细胞在转染过程中差别不大,主要差别在于转染后的筛选,当然如果你做的是瞬时转染就不存在筛选的问题了。
其实转染的过程很简单,问题是能不能转的进去的,转染率能有多少,转进去是否可以稳定表达目的蛋白等等。
我们也是用脂质体做悬浮细胞的转染,说明书上都有具体的操作过程,将脂质体和目的基因按比例混合,然后加到细胞悬液里就OK了,说的简单,实际上还是有一些细节要注意的,比如脂质体和目的基因混合的比例,转染的细胞数,细胞的代数,细胞的状态,有的还要求在转染的前一天传代一次,不过不要怕,这些在脂质体说明书上都有明确的说明,按照说明书做就可以了。
jinghuanlv认为:
悬浮细胞和贴壁细胞转染还是有很大不同的。
脂质体转染的原理基于电荷吸引原理,先形成脂质体-DNA复合物,散布在细胞周围,然后通过细胞的内吞作用,将目的基因导入细胞内,而脂质体复合物与贴壁细胞的接触机会比悬浮细胞高出很多倍,所以,脂质体转染时悬浮细胞的转染效率要明显低于贴壁细胞。
我们实验室转染悬浮细胞是用的电穿孔法,目前为止,悬浮细胞转染的最好方法还是电转,我们实验室用的电转仪是Bio-Rad的,使用条件是电压250V,电容975uF,效果不错,不妨一用。
实验室一直都是用日常型质粒抽提试剂盒,转染细胞没问题。
我觉得只要是注意以下2点就可以了:
1,注意大肠杆菌(Escherichia coli)本身的污染,收集菌体沉淀时防止菌液散落,经常用75%的乙醇擦拭手套。
2,最后洗脱时最好使用无内毒素的水,我们是用注射用水的。
无论是小提还是大提我们都是用的日常型的,并没有刻意用转染级的,因为转染量大,去内毒素的操作太麻烦,损失太大。
其次要看下你选择单位的规模如何,做的比较好的,还是上海这边的,你可以看下基尔顿生物,原代细胞培养,动物造模,整体课题外包。
不建议你用MDCK细胞,非常难转染。


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