Evidence for two interaction regions for phosphatidylinositol...
- 产品简介：LentiFitTM脂质体转染试剂是一种高效的阳离子脂质体转染试剂。与其他脂质体转染试剂相比，汉恒生物独立研发的LentiFitTM脂质体转染试剂具有转染效率高，重复性好，操作简单，无明显细胞毒性，抗血清干扰等优点。对于大多数细胞，用LentiFitTM转染后72小时内不更换培养液无明显细胞毒性。同时，血清的存在不影响LentiFitTM的转染效率，这样可以减小无血清对细胞的损伤。基于以上优点，LentiFitTM常用做慢病毒包装的转染试剂。包装清单以及储存条件：
使用方法：1.细胞培养：以1个10cm培养皿转染293T细胞为例，转染前一天接种细胞(20-24小时)，接种细胞约3.5×106 ，接种体积10mL，确保第二天转染时细胞汇合度（confluent）能达到约50%~70%。2.在进行转染步骤前，把10cm培养皿中的培养液更换成新鲜细胞培养液，培养液的体积为5mL，放回培养箱中继续培养，并准备转染体系（步骤3-6）。3.把LentiFitTM脂质体转染试剂轻轻混匀。4.对于待转染的10cm培养皿中的细胞，取一只洁净无菌离心管，加入24µg质粒（目的质粒和辅助质粒的比例根据不同包装系统进行调整）到500µLDMEM溶液，用枪轻轻吹打混匀。5.取另一只洁净无菌离心管，加入500µLDMEM溶液，再加入40µLLentiFitTM，用枪轻轻吹打混匀,室温放置5分钟。6.将步骤4与5中的质粒溶液与LentiFitTM溶液混合，用枪轻轻吹打混匀。不可Vortex或离心。室温孵育20分钟。有可能出现絮状沉淀物，属正常现象，不会影响转染效率。7.将转染复合物逐滴加入到培养皿中，轻轻“8”字形摇晃混匀后，放回培养箱继续培养。8.培养6-12小时后，更换为完全培养基，继续培养。注意事项：1.使用高纯度的DNA（A260/A280比值越近1.8越好）有助于获得较高的转染效率。对于质粒，推荐使用Qiagen公司生产的质粒大量抽提试剂盒进行高质量无内毒素抽提。2.细胞状态会极大影响转染效率，所以转染前细胞必须处于良好的生长状态。3.需自备DMEM培养基，其他培养基如1640、MEM、alpha-MEM，F12，DMEM/F12、M199也均可以用于转染实验。4.LentiFitTM不能vortex或离心，宜缓慢晃动混匀。5.LentiFitTM使用后请立即盖好盖子，避免长时间暴露在空气中，影响转染效率。6.经测试，LentiFitTM细胞毒性不明显，非常适用于慢病毒包装；请在进行病毒包装时严格按照病毒安全操作进行。7.为了您的安全和健康，请在符合洁净度要求的细胞培养室中进行转染操作，操作时请穿实验服并戴一次性手套、口罩和无菌帽。正装规格及价格：试剂名 货号 储存条件 规格 有效期 LentiFitTM转染试剂 Let1000 4℃保存 1mL 12个月 规格 价格1ml 10802ml 16803ml 23805ml 348010ml 7880 温馨提示：不可用于临床治疗。
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发布于 ： 2018-09-26
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