Brdu免疫组织化学染色分析 BrdU incorporation assay 实验方法...
来自 : 蚂蚁淘
BrdUincorporationassay
- Cellsaregrownon22mmcoverslipssuchthattheyarerapidlydividing(usually50-70%confluent).
- Incubatecellsin100mMBrdU(Roche;stockof10mMinPBS)for30minutesto4hours.Forlongerincubations,use10mMBrdU.
- Aspiratemediumandimmediatelyfixfor30minutesat–20oCwithice-coldfix(whichwestoreat–20oC).Fixis70mlethanol+30mlglycinepH2.0.
- WashcellsinPBSandprocessforimmunofluorescence.
- anti-BrdU(Roche)isdiluted1:50foruse.CellsmaybecounterstainedwithDAPIandsomeantibodieswillworkfordoublelabelling.CoverslipsaremountedinMowiolasforthestandardimmunofluorescenceprotocol.
NBAtshorttimepoints,theBrdUincorporationisweakandhardtoseebutsuitableforimaging.
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