QIAGEN宣布CLC Genomics Workbench的重要更新
细胞凋亡发生时，内源性核酸内切酶将分解核小体区间的双链DNA，但核小体本身由于由组蛋白紧密结合而免受切割，单克隆抗体可以与核小体形成夹心结构，可通过检测核小体判断细胞是否经历凋亡事件。
(一)原理
细胞凋亡的发生，是由于钙-镁依赖性核酸酶进入核小体间切割DNA,产生180bp～200bp或其倍数的核小体片段。而核小体由于与组蛋白H2A、H2B、H3和H4形成紧密复合物而不被核酸内切酶切割。采用双抗体夹心酶免疫法，应用小鼠抗DNA和抗组蛋白的单克隆抗体，与核小体片段形成夹心结构，可特异性检测细胞溶解物中的核小体片段。
(二)材料与试剂
1.采用BoehringerMannheim公司试剂盒，生物标记的小鼠抗组蛋白单克隆抗
体。
2.过氧化物酶(-POD)标记的小鼠抗DNA单克隆抗体
3.链霉亲合素包被的微孔板
4.DNA-组蛋白复合物，作为阴性对照。
5.ABTS底物
6.溶解缓冲液
7.温育缓冲液
8.底物缓冲液
(三)样品
1.培养细胞或离体细胞的裂解物细胞裂解步骤：收集细胞，离心后，用200µl溶细胞缓冲液重新悬浮，室温下作用30min。
2.培养细胞的上清液
3.血浆(血清)
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发布于 ： 2019-03-15
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