DMEM高糖培养基 (含L谷氨酰胺,不含丙酮酸钠,不含酚红,含HEPES)
实验材料 | 培养细胞 试剂、试剂盒 | DMEMHClTBSTris 仪器、耗材 | 微量离心管Plexiglas盒吸头细胞刮子冷冻离心机 实验步骤 | 1. 培养待标记的细胞至适当的生长期。 对于贴壁细胞: 3a. 加入预热的标记培养液,加入量为:0.5~1ml/35mm培养皿,1~2ml/50mm培养皿,或2~4ml/100mm培养皿。 对于非贴壁细胞: 2b. 1800g离心1min,吸去培养上清,细胞用含血清不加标记物的标记培养液重悬,再次离心吸去堉养液。 6. 标记结束时,将装有标记细胞的Plexiglas盒移至冷室,放在Plexiglas挡板后面。 对于贴壁细胞: 7a. 从Plexiglas盒子中取出培养皿,用一次性的移液管吸尽标记培养液,培养液和吸头或吸管均作为同位素废物弃置。 8a. 用2~10ml冷TBS洗涤细胞2次,同步骤7吸尽并弃去放射性废物。 对于非贴壁细胞: 7b. 从Plexiglas盒子中取出培养皿,将细胞移至带螺口盖的微量离心管中,1800g离心1min,回收细抱,吸尽培养液。 8b. 细胞用小体积的冷TBS重悬,移至带螺口盖微量离心管中,1800g离心1min,吸尽TBS。 9b. 毎107细胞用0.5~1ml适当的裂解缓冲液悬浮细胞,用一次性的巴斯德吸管轻轻混匀,4℃放置20min。 10. 盖上管盖,于4℃26000g离心30min澄清裂解液。 11. 离心后,将上清(裂解物)移至新的离心管中,离心管和沉淀作为同位素污物处理。 12. 用凝胶电泳,免疫沉淀或蛋白质纯化方法,分析标记的裂解液,所有过程均在4℃适当屏蔽下进行。 |
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发布于 : 2021-08-08
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