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제품특징
□ 제품설명
RNAiso Plus는 동식물의 조직이나 배양 세포로부터 간편하고 신속히 RNA를분리할 수 있는 total RNA 추출 시약이다. RNAisoPlus 용액에서 조직이나 세포를 파쇄한 후, chloroform을 파쇄액 (homogenate)에 첨가해 잘 혼합한 뒤 원심분리하면 3층으로분리한다.상부의 투명한 수층에는 RNA가 있고, 반고체의중간층에는 DNA, 또 적색을 나타내는 하층의 유기용매 층에는 단백질,다당, 지방산, 세포 잔재 소량의 DNA가 포함되어 있다.상부의 수층을 채취하여 Isopropanol 침전에 의해total RNA를 회수한다. 본 제품을 이용하면 약 1시간만에 total RNA 추출이 완료된다. 분리된 total RNA는 손상되지 않은 상태이며 DNA나 단백질을 거의 포함하지않기 때문에, RT-PCR*, Northern blot 분석, mRNA 분리 및 in vitro translation 반응 등에 이용할 수 있다.* RT-PCR에 이용하는 경우에는 미량인 게놈 DNA 혼입에 의해서도결과에 영향을 미치기 때문에,
사용 전에 Recombinant DNaseI (RNase-free) (Code 2270A)으로 처리하시기 바랍니다.* 본 제품에서는 유기용매층이 적색을 나타내기 때문에, 경계면의 구분이쉬워 보다 사용이 편리하다.
□ 다양한 샘플에 적용하는 RNAiso Plus
적용샘플 | 논문제목 | 논문명 |
Drosophila | Curcumin-supplementeddiets increase superoxide dismutase activity and mean lifespan in Drosophila | Age (Dordr) 2013August; 35(4): 1133?1142. |
Fruit moth | Identification ofPutative Olfactory Genes from the Oriental Fruit Moth Grapholita molesta viaan Antennal Transcriptome Analysis | PLoS One. 2015;10(11): e0142193. |
Small intestines | HumanLipocalin-Type Prostaglandin D Synthase-Based Drug Delivery System for PoorlyWater-Soluble Anti-Cancer Drug SN-38 | PLoS One. 2015;10(11): e0142206. |
Bone tissue | CD44 deficiencyinhibits unloadinginduced cortical bone loss through downregulation ofosteoclast activity | Sci Rep. 2015; 5:16124. |
Penicillium | Whole transcriptomeanalysis of Penicillium digitatum strains treatmented with prochloraz revealstheir drug-resistant mechanisms | BMC Genomics. 2015;16: 855. |
Drosophilamelanogaster | MolecularMechanisms for High Hydrostatic Pressure-Induced Wing Mutagenesis inDrosophila melanogaster | Sci Rep. 2015; 5:14965. |
Bombyx larvae | High yieldexogenous protein HPL production in the Bombyx mori silk gland provides novelinsight into recombinant expression systems | Sci Rep. 2015; 5:13839. |
Fishing Spiders | A ComparativeAnalysis of the Venom Gland Transcriptomes of the Fishing Spiders Dolomedesmizhoanus and Dolomedes sulfurous | PLoS One. 2015;10(10): e0139908. |
Seedling | RNAi-basedfunctional elucidation of PtrPRP, a gene encoding a hybrid proline richprotein, in cold tolerance of Poncirus trifoliata | Front Plant Sci.2015; 6: 808. |
Cucumber fruit | QTL mapping ofcucumber fruit flesh thickness by SLAF-seq | Sci Rep. 2015; 5:15829. |
□ 내용
| RNAiso Plus (TaKaRa Code 9108)* | 100 ㎖ |
| RNAiso Plus (TaKaRa Code 9109)* | 200 ㎖ |
* 단백질 변성제가 포함되어 있으므로, 피부나 옷 등의 접촉을 피해 주세요. 만일, 눈이나 피부에 묻었을 경우는 즉시 다량의 흐르는 물로 씻은 후, 의사의 진단을 받아 주세요.
□ 보존 4℃ (차광보존)
□ 본 제품 이외에 필요한 시약
- Chloroform- Isopropanol- 75% 에탄올［DEPC H2O 이용 조제］- RNase-free water
□ RNAiso Plus 사용량의 기준
샘플의 종류와 양 | RNAiso Plus 사용량(㎖) |
10 cm2의 접착 세포5×106~1×107개의 부유 세포100㎕ 의 백혈구 세포 | 1~212 |
50~100 mg의 조직 샘플- 비교적 RNA 추출이 용이한 조직- 고순도의 RNA 추출이 어려운 조직(간, 비장, 뼈 및 연골 등) | 12 |
15~30 mg의 식물 재료(소량의 다당류와 페놀을 포함) | 1 |
□ 내용
조직 재료 | 샘플량 | Total RNA 추출량 |
간 | 1 g | 약 5000 ㎍ |
신장 | 1 g | 약 3000 ㎍ |
골격근 | 1 g | 약 1500 ㎍ |
뇌 | 1 g | 약 1500 ㎍ |
HL60 배양 세포 | 1×107개 | 약 100 ㎍ |
담배잎 | 1 g | 약 1000 ㎍ |
백혈구 세포 | 1×107개 | 약 100 ㎍ |
전혈* | 1 ㎖ | 15~20 ㎍ |
* 전혈 100 ㎕에 대해 1 ㎖의 RNAiso Plus를 사용했다.
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1、 缓冲溶液对反应物的测定没有干扰
2、缓冲组分的浓度为1:1
3、有足够的缓冲容量
4、缓冲溶液的PH应在所需范围内
5、组成缓冲溶液的弱碱PKB和弱酸PKA应接近或等于所需的POH值或PH值（PH+POH=14）
配制
只要知道缓冲对的PH值，和要配制的缓冲液的pH值（及要求的缓冲液总浓度），就能按公式计算[盐]和[酸]的量。这个算法涉及对数换算，较麻烦，前人为减少后人的计算麻烦，已为我们总结出pH值与缓冲液对离子用量的关系并列出了表格。只要我们知道要配制的缓冲液的pH，经查表便可计算出所用缓冲剂的比例和用量。例如配制500nmpH5.8浓度为0.1M磷酸缓冲液。
经查表知pH5.8浓度为0.2M Na2HPO48.0毫升，而0.2M Na2HPO492.0毫升。依此可推论出配制100ml0.1M的磷酸缓冲液需要0.1M Na2HPO48.0毫升，而0.1M Na2HPO4需要92.0毫升。
计算好后，按计算结果准确称好固态化学成分，放于烧杯中，加少量蒸馏水溶解，转移入50ml容量瓶，加蒸馏水至刻度，摇匀，就能得到所需的缓冲液。
各种缓冲溶液的配制，均按表格按比例混合，某些试剂，必须标定配成准确浓度才能进行，如醋酸、氢氧化钠等。另外，所有缓冲溶剂的配制计量都能从以上的算式准确获得。
TBST中含有Tris-Hcl，NaCl，Tween20这三种物质，是做WESTERNBLOT中常用的一种缓冲液。
TBST缓冲液的配制
1000ml×TBST的配置
先称量NaCl40g，倒入烧杯中，加DDW蒸馏水400ml,再称量NaCl47.6g，倒入刚才的那个烧杯中（PS：由于NaCl的量太多，一次称量不方便，所以分两次称量，且易于溶解）。往烧杯中加入Tris—HCl缓冲液100ml，最后加（吐温20）5ml,转入1000ml容量瓶中，在定容，转移即可。
TBST缓冲液的应用：
1.主要用于免疫组化和原位杂交，酶联免疫等实验中，清洗免疫印。
2.迹膜；
注意事项：
1.TBST缓冲液，PH7.2-7.5；
2.颜色为无色透明液体；
3.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴防护手套操作；
