
Insulin is a polypeptide hormone produced in the pancreaticislets of Langerhans that has a molecular weight of ~5800 Da.Insulin primarily regulates the uptake and storage of glucose incellular systems. It also plays a related role in the metabolismof certain amino acids and fatty acids. Bovine insulin isremarkably similar to human insulin, differing in molecularstructure by only three amino acid residues.
Cell culture tested
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1 mmol/LEDTA(pH 8.0)
因为含有以上两种物质,所以称为TE。
配制分三步:
1)1 M Tris-HCl (pH 8.0) 50 ml的配制:称取Tris碱6.06 g,加超纯水40 ml溶解,滴加浓HCl约2.1 ml调pH至8.0,定容至50 ml。
2)0.5 M EDTA(pH 8.0)50 ml的配制:称取EDTA-Na2·2H2O 9.306 g,加超纯水35 ml,剧烈搅拌,用约1 g NaOH颗粒调pH至8.0,定容至50 ml。(EDTA二钠盐需加入NaOH将pH调至接近8.0时,才会溶解。)
3)1×TE(10 mM Tris-HCl,pH 8.0;1 mM EDTA,pH 8.0)的配制:
作用:
TE缓冲液是弱碱性,对DNA的碱基有保护性,(DNA在它是的稳定性较好,不易破坏其完整性或产生开环及断裂),包括提取好的DNA也要放在TE缓冲液是保存. 10mMTris-Hcl,pH有7.47.68.0三种。
EDTA调到8.0是为了更好溶解,其他只要调到相应pH就可以。Tris在7-8附近缓冲能力很强,所以加8.0的EDTA下去后,不会改变pH。
TBST中含有Tris-Hcl,NaCl,Tween20这三种物质,是做WESTERNBLOT中常用的一种缓冲液。
TBST缓冲液的配制
1000ml×TBST的配置
先称量NaCl40g,倒入烧杯中,加DDW蒸馏水400ml,再称量NaCl47.6g,倒入刚才的那个烧杯中(PS:由于NaCl的量太多,一次称量不方便,所以分两次称量,且易于溶解)。往烧杯中加入Tris—HCl缓冲液100ml,最后加(吐温20)5ml,转入1000ml容量瓶中,在定容,转移即可。
TBST缓冲液的应用:
1.主要用于免疫组化和原位杂交,酶联免疫等实验中,清洗免疫印。
2.迹膜;
注意事项:
1.TBST缓冲液,PH7.2-7.5;
2.颜色为无色透明液体;
3.为了您的安全和健康,请穿实验服并戴防护手套操作;
1、组成成分:
A、1×TE缓冲液:10mmol/LTris.Cl;1mmol/LEDTA,pH8.0。
B、1×TAE缓冲液:40mmol/LTris-乙酸;2mmol/LEDTA,pH8.0。
C、1×TBE缓冲液:45mmol/LTris-硼酸;1mmol/LEDTA,pH8.0。
2、用途:
A、TE缓冲液:一般用作溶解剂或保持剂,常用于溶解DNA,能稳定储存DNA。
B、TAE缓冲液:生物学中使用最广泛的核酸电泳缓冲液,主要用于DNA的琼脂糖凝胶电泳。
C、TBE缓冲液:生物学中常用的核酸电泳缓冲液,主要用于DNA的琼脂糖凝胶电泳。
3、TAE和TBE缓冲液的选择:
TAE和TBE缓冲液都可以用于DNA的琼脂糖凝胶电泳,两者各有利弊,应根据实际情况选择不同的缓冲液。
4、注意:
TBE浓溶液长时间存放后会形成沉淀物,出现沉淀后应予以废弃。

