Recombinant Human HA-SUMO1 Vinyl Sulfone Protein, CF Summary
Product Datasheets
Carrier Free
CF stands for Carrier Free (CF). We typically add Bovine Serum Albumin (BSA) as a carrier protein to our recombinant proteins.Adding a carrier protein enhances protein stability, increases shelf-life, and allows the recombinant protein to be stored at a more dilute concentration.The carrier free version does not contain BSA.
In general, we advise purchasing the recombinant protein with BSA for use in cell or tissue culture, or as an ELISA standard.In contrast, the carrier free protein is recommended for applications, in which the presence of BSA could interfere.
UL-703
| Formulation | Supplied as a solution in HEPES, NaCl, Glycerol. |
| Shipping | The product is shipped with dry ice or equivalent. Upon receipt, store it immediately at the temperature recommended below. |
| Stability & Storage: | Use a manual defrost freezer and avoid repeated freeze-thaw cycles.
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Reconstitution Calculator
Background: SUMO1
Human Small Ubiquitin-like Modifier 1 (SUMO1), also known as Sentrin, UBL1, and SMT3C, is synthesized as a 101 amino acid (aa) propeptide with a predicted molecular weight of 11.5 kDa. Human SUMO1 is the most unique of the four identified SUMO proteins and shares only 44%, 47%, and 41% aa sequence identity with SUMO2, SUMO3, and SUMO4, respectively. In contrast, human SUMO1 shares 100% aa sequence identity with the mouse ortholog. SUMOs are a family of small, related proteins that can be enzymatically attached to a target protein by a post-translational modification process termed SUMOylation (1-3). All SUMO proteins share a conserved Ubiquitin domain and a C-terminal diglycine cleavage/attachment site. Following cleavage of a four aa C-terminal prosegment, the C-terminal glycine residue of SUMO1 is enzymatically attached to a lysine residue on a target protein. In humans, SUMO1 is conjugated to a variety of molecules in the presence of the SAE1/UBA2 SUMO-activating (E1) enzyme and the UBE2I/Ubc9 SUMO-conjugating (E2) enzyme (4,5). In yeast, the SUMO-activating (E1) enzyme is Aos1/Uba2p (6). SUMOylation can occur without the requirement of a specific SUMO ligase (E3), where SUMO1 is transferred directly from UBE2I/Ubc9 to specific substrates. In Alzheimer"s disease models SUMO1 has been shown to influence the generation of Amyloid-beta peptide by promoting the accumulation of BACE-1 (7). Covalent modification of Phosphatase and Tensin Homolog Deleted on Chromosome (PTEN) by SUMO1 is thought to regulate tumorigenesis by retaining PTEN at the plasma membrane, an effect that suppresses PI 3-Kinase/Akt-dependent tumor growth (8).
This N-terminal HA-tagged SUMO is a potent, irreversible and specific inhibitor of SUMO-specific proteases (SENPs).This protein inhibits the hydrolysis of poly-SUMO chains on substrate proteins in vitro and thus enhances poly-SUMO chain accumulation.The HA peptide sequence (YPYDVPDYA) is derived from the influenza Hemagglutinin protein.This epitope allows for the sensitive identification or purification of SENP activities since it is specifically recognized by anti-HA antibodies and/or anti-HA-agarose.
- Desterro, J.M. et al. (1997) FEBS. Lett. 417:297.
- Bettermann, K. et al. (2012) Cancer Lett. 316:113.
- Praefcke, G.J. et al. (2012) Trends Biochem. Sci. 37:23.
- Okuma, T. et al. (1999) Biochem. Biophys. Res. Commun. 254:693.
- Tatham, M.H. et al. (2001) J. Biol. Chem. 276:35368.
- Johnson, E.S. et al. (1997) EMBO J. 16:5509.
- Yun, S.M. et al. (2012) Neurobiol Aging. [Epub ahead of print].
- Huang, J. et al. (2012) Nat. Commun. 3:911.
Citation for Recombinant Human HA-SUMO1 Vinyl Sulfone Protein, CF
R&D Systems personnel manually curate a database that contains references using R&D Systems products.The data collected includes not only links to publications in PubMed,but also provides information about sample types, species, and experimental conditions.
1Citation: Showing 1 - 1
- ZUFSP Deubiquitylates K63-Linked Polyubiquitin Chains to Promote Genome StabilityAuthors: P Haahr, N Borgermann, X Guo, D Typas, D Achuthanku, S Hoffmann, R Shearer, TK Sixma, N MailandMol. Cell, 2018;0(0):.Species: HumanSample Types: Cell LysatesApplications: Immunoprecipitation
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安捷伦1260高效液相，先做五针对照品一的峰面积RSD为0.4%，然后进第二个对照品时第一针峰面积2238，第二针的为2330，此机器刚做完校验而且前一天的实验也一切正常，灯也是刚换不久。样品瓶中也不存在有气泡或样品溶液装得太满的问题。而且样品盘有温控，亦没有发现漏液。自己实在是想不到哪有问题，难不成真是机器偶尔秀逗了一下？有没有大神给点意见………………
这里我想像大家介绍一种新的高效细胞活性和细胞增殖测定剂——alamarBlue。介绍之前先说最重要的一点，使用alamarBlue价格比较昂贵，如果你的银子不多，呵呵，还是乖乖告诉老板你的MTT结果吧。
细胞增殖检测主要有三种方法：第一、增殖期抗体的测定（例如Ki-67和CydlinE）。第二、增殖期DNA合成标记（3H,BrdU等）。相信这两种方法少有人做，反正以前我都没听过（见笑了）。还有第三就是增殖细胞对外界环境物质的降解测定（包括大家常做的MTT和XTT、MTS，还有今天要介绍的AlamarBlue）。
AlamarBlue是一种新型的细胞活性和细胞增殖的指示剂，是一种可溶、稳定、无毒的靛蓝染料，同时适用于贴壁和悬浮细胞。它对细胞抗原的表达和杂交瘤细胞的抗体分泌功能无影响，而且非常有意义的一点就是，经过AlamarBlue测定的细胞可以继续培养或进行其他的功能测定。AlamarBlue可以用普通分光光度计、荧光光度计和酶标仪进行测定，非常方便，其测定结果同样有线性趋势，而且线性范围更广，更灵敏和稳定。
主要应用于：
a.优化细胞培养条件
b.对细胞生长因子或细胞因子进行活性定量
c.有助于开发抗生素或抗肿瘤的新药
d.了解毒性物质或污染物对细胞生长的影响
e.评估细胞介导的细胞毒作用
f.定量检测凋亡发生
g.适用于真核细胞、真菌和细菌的活性和增殖测定。
附件是AlamarBlue的产品详细说明，实验操作手册。感兴趣的战友可以看一看。还有一篇文章是比较MTT和AlamarBlue的，不过很遗憾，我没能查到全文，如果哪位高手能查出来，真心希望能够贴出来与大家分享。
Hamid,R.,Rotshteyn,Y.,RabADI,L.etal.ComparisonofalamarblueandMTTassaysforhighthrough-putscreening.ToxicologyinVitro.200418(5);703-710.
alamarbluebooklet.pdf(153.16k)
质量标准和资格认证已经成为现代实验室的重要问题。
PCR是分子生物学领域的关键技术。不管是在基础研究还是临床诊断领域，PCR的应用越来越广泛。然而，使用PCR仪器时，消耗品和试剂对最终结果的影响还不是很清楚。但是PCR仪器温度控制的影响是很明确的。市场上众多品牌和型号的PCR仪器，在技术上有很大的不同，我们认为必须建立一个好的质量控制程序。
很多年以前，CYCLERtest公司已经开始研究PCR相关温度测试和温度变化对于PCR最终实验结果的影响。1998年，MTAS服务作为评价和认证PCR仪器温度控制的方法已经进入了Benelux市场。2002年，这套系统在全世界面世。CYCLERtest公司以温度传导测试领域的世界领导者而自豪。
温度评价的目的不仅仅是要确认仪器的质量。大多数的实验室工程师关于PCR仪器都碰到过无法解释的问题的经历，那些问题与反应混合物的组成无关。就像对于一个特定的仪器经常有不确定的表现，研究者经常抱怨“我的反应一直正常，但这台仪器怎么就出问题了？”根据我们的经验，这完全是个案，而不是两台PCR仪器共有的问题。甚至同一个品牌，同一个型号，显示出不同的温度性能，而这对实验成功至关重要。
影响PCR仪器温度控制性能主要有四种因素：
1.PCR仪器之间的差别对实验结果的影响。如前所述，没有任何两台PCR仪器的温度控制是一模一样的。相对于预设的温度模块温度总是偏高或偏低，就是同一模块不同的孔之间，温度有时也会不一样，相差可能达几摄氏度之多。一些PCR仪温度控制性能的不足造成的后果是：当PCR仪的模块温度在升温时，温度过冲或不足，不能准确的达到预设的平台温度。
2.温度控制技术的差别对实验结果的影响。导致PCR仪温度控制性能优劣的因素，首先是温度控制技术。调节PCR仪模块的温度，使其达到并保持在某一温度有很多方式。每一种方式都有优点和缺点。另外，这些技术被运用控制的水平对于温度控制的水准是很重要的，且有很大不同。大多数PCR仪器的温度控制性能是很差的。在单一或多传感器控制机制上的不同显而易见的引起了温度的不均一性。
3.仪器老化对实验结果的影响。虽然PCR仪没有任何的机械或可移动部件，但是那并不意味着它不会磨损。电子器件的性能会随着时间的延长而老化，并由于过度的使用而加速老化。Peltier器件的失效或磨损会引起模块的热斑或冷斑，通常PCR仪器不能识别这种由于机械磨损，模块延展和收缩效应引起的温控性能的不同。因此，为掌握这些情况，实时监测PCR仪的温度控制性能是重要的。出于同样的原因,PCR仪温控性能的失常通常是实验失败或毁坏循环反应的重要原因。
4.外部因素对实验结果的影响。不同PCR仪品牌与型号在温度控制性能上的不同直接影响了三种温度平台的温度的准确性和不均一性，因而影响了整个PCR反应的实验结果。另外，升温速度的不同，温度下降梯度的不均一性，温度过低，温度过冲，也是重要的因素。最差的情况，一个本该阳性的结果却可能得出阴性的结果。对于实时PCR，荧光信号输出和产量/溶解曲线，直接与温度控制有关系，而这些结果很可能是戏剧性的。
5.实验室认证。根据以上的论点，很多实验室已经不得不适应一些认证。和ISO、GMP、GLP标准一样，必须证明所有的实验室程序是按照标准程序所操作的。一些实验室只有当他们采用已经被他们的合作组织或专业委员会测试的或认可的程序时才可以称他们自己是合格的，。
DRIFTCON系统简介
硬件
该系统由探针装置组成，那是一个这样的结构：在测量之前电热调节器被放在一个固定器里，并且作为一个孔放在模块里。Driftcon箱是一个硬件模块，处理收集的信号，之后，软件系统显示结果。测量可以每天一次，每周一次或每月一次。
driftcon系统组成
driftcon硬件模块+连接电缆
目前可提供的探针装置如下表所示：（目前那还不能提供所有的探针装置）。
例：96V-16：表示16号温度传感器，适用于96*0.2ml模块
384-15：表示15号温度传感器，适用于384孔板
48V-12：表示12号温度传感器，适用于48*0.2ml模块
组成：driftcon硬件模块
探针固定箱
DRIFTCONSMART-card
DRIFTCON软件
软件
在启动Driftcon以后，一个弹出窗口显示机器在测量。
该仪器的软件可以储存每一次测量的结果，很容易重新阅读。结果显示所有的参数及参数的细节，包括精确性、升温时间、最大过冲，平均过冲和温度持续时间。持续时间指的是一个模块达到设定的温度平台的持续时间。两个最重要的参数：温度范围和精确性以六个不同的时间或时间段来表示。（10-20s,15s,25-35s,30s,85-95s,90s）。在每一个测量水平上，测量值和标准值比较，通过符号的方法，判断是对还是错。
不均一性和精确性能够在时间表中显示。在这个表格中，操作者能够通过设定的限制，及时跟踪仪器性能的进程。通过移动表中的曲线，精确值得以显示。
标准值：当设定标准值时，有两种方法。一种是选择该领域某种仪器或品牌特定的平均世界通用性能指标，或更好的指标。第二种方法是凭经验确定某种测试的边界值，并且以基值作为预先设定的标准值。这可以在菜单里操作，甚至在每一个温度平台上操作。
有三种使用操作权限：管理者、控制者和使用者。管理者可以进入所有的软件系统，可以创建其他的使用者并改变他们的设置，设定标准值，并改变其他的参数。控制者不能够做这些，但是能够添加和编辑仪器，使用者仅仅能够执行测量并观察结果。
应用
如果您正在使用实时PCR仪，并想用合适的证据，比如生物学参数、保证完全的可追溯能力以及所使用仪器的质量来证明您所得结果的正确性。因此我们强烈建议在实时PCR仪中使用DRIFTCON系统。依据内部评价表格、研究类型、所得结果的影响和重要性，您可以每日、每周或每月使用DRIFTCON，及时检测您所使用的PCR仪器的温控性能。您的试剂盒生产商也强烈推荐使用DRIFTCON系统，通过driftcon系统，您可以比较该系统是否适合您的应用。
模块的不均一性：每一个PCR仪器都有温度不均一的问题，您正在使用的PCR仪可能就有个别的热斑或冷斑。这些斑通常是通过生物学参数或通过使用内部样本参数来检测。在那种情况下，意识到荧光信号，产量和溶解曲线的结果与这些温度直接相关是重要的。例如：温度相差10C，对产生的结果和荧光信号的影响将是巨大的。
您的试剂盒生产商可能推荐DRIFTCON系统的普通使用，排除由于所使用的PCR仪器性能的不足造成的结果波动。一个试剂盒生产商，甚至可能需要在接受试剂盒投诉之前看所使用的PCR仪器的DRIFTCON简介。
不工作仪器：您的仪器可能不执行被PCR仪器测试提供的仪器参数，请通过同步我们普通的数据库要求最接近的参数。
试剂盒温度起始设置：商业试剂盒的使用者可能要求试剂盒生产商为了温度的准确性和模块的均一性，提供规定的起始温度设置。政府检察员可能要求试剂盒生产商对供应的试剂盒提供温度起始设置，还有这些资料的正确评价。
起始设置：起始设置被用来通过和规定的设置比较PCR仪器的温度性能。试剂盒生产商能够设计极其详细的温度起始设置。这些起始设置被用来检查被测试的仪器是否在应用的起始温度之内。试剂盒生产商应该提供一个清楚的定义，起始设置是基于仪器还是应用。
基于仪器的起始：仪器起始设置（一个特殊的仪器的模块型号）被用购买DRIFTCON系统而提供。其他个别的特殊的起始设置可能被购买作为可选的软件。这被提供的特殊的仪器起始是从CYCLERtest全球数据库中提取出来的。被提供的起始值是平均值加或减2倍的标准差。你可以调整通过产生不同起始设置温度的仪器来调整这些设置。
基于应用的起始设置：虽然基于应用的起始设置更困难，而且要花更多的时间设计，但它们是仪器起始温度的高级设计。换句话说，一个人要比较，被用来操作一个特定应用的PCR仪器的起始温度设计是否适合这个应用。
请教
活动目的：
1.帮助更多的站友解决现实工作中遇到的类似问题；
2.分享经验，互帮互助，实践“人人为我，我为人人”的精神，提高分析版的凝聚力和战斗力。
活动内容：
阐述分析工作中遇到的仪器或软件故障、成功解决的方法以及体会。
格式要求：
【设备/软件名称】：介绍下仪器设备名称或相关软件名称
【仪器型号】：简要说明
【设备厂家】：简要说明
【故障描述】：详细描述发生的故障情况
【发生原因】：描述或者分析造成该故障的操作和/或原因
【如何解决】：分享你成功解决的办法，描述要详细（重点），鼓励图文并茂式的解说；
【经验来源】：说明是自己实际经验还是选自于版内（版块内有这方面的资源也可以挖掘整理，需给出相关链接）或网络资源（细谈哪些东西帮助了你成功解决问题）
【心得体会】：简要描述。
活动要求：
1.在蚂蚁淘注册的所有支持分析版的站友均可参与；
2.活动结束时间暂定为1个月，即2012.4.22---2012.5.22pm5:00；
3.请参与的站友严格按上述格式要求进行整理归纳总结；
4.鼓励站友分享多个成功的实践经验，但每个ID最多参与3个；
5.认真参与、言之有物的站友将可获得积分鼓励，每个内容待定加1-2分；
6.其他未尽事宜，待后续补充。
原理：利用温度传感器测量，传入温控器进行PID测算，输出0-10V或0-20ma的模拟信号，再通过模拟信号控制阀门控制器控制阀门的打开与关闭，来达到调节流量或压力的目的。
如果是要控制恒流量或恒压力，那么温度控制器是不行的啦。
望版主加固本话题！
谢谢！
因为做免疫组化前固定的标本一般不超过48－72小时，所以较急！在线等！
我们现在要插到瓶子里，做个验证，初步计划：
1、空载验证探头和温控探头都放在腔室内，确定腔室的冷点。
2、半载、满载的时候温控探头插在灌水的瓶子里，放在冷点处，验证的探头均匀放在腔室内。
3、穿透的时候所有探头都插到瓶子里。控温探头放到冷点、验证探头均匀分布。
大家帮忙看下这样有没有什么风险，有没有更好的主意（本人总是觉得有些问题）
