Highlights
- Easy Handling: Bypass chloroform, phase separation and precipitation steps.
- NGS-Ready: Ultra-pure RNA without phenol carryover. No DNA contamination (DNase I included).
- Non-Biased: Complete RNA recovery without miRNA loss.
Description
| Compatibility | TRIzol®, RNAzol®, QIAzol®, TriPure™, TriSure™ and all other acid-guanidinium-phenol based solutions can be used in place of TRI Reagent®. |
|---|---|
| Equipment | Microcentrifuge, vortex |
| Sample Inactivation | TRI Reagent® (provided with R2071, R2073) inhibits RNase activity and inactivates viruses and other infectious agents. |
| Sample Source | Any sample stored and preserved in TRI Reagent®, TRIzol® or similar (animal cells, tissue, bacteria, yeast, fecal, biological fluids, and in vitro processed RNA (e.g., transcription products, DNase-treated or labeled RNA)). |
| Size Range | Total RNA ≥ 17 nt |
| Yield | 100 µg RNA (binding capacity), ≥ 50 µl (elution volume) |
Q1: Is Direct-zol suitable for very small numbers of cells?
Yes, the Direct-zol MicroPrep (#R2060) is designed and capable of purifying RNA down to single cell inputs (picogram amounts). A sensitive quantification method is needed (e.g. Qubit, qPCR, etc.)
Q2: Is DNase I available for individual purchase?
All kit components are available for purchase separately.
Q3: How to store DNase-I following resuspension?
Lyophilized DNase I is stable at room temperature. Once resuspended, store frozen aliquots. Minimize freeze thaw cycles as much as possible. Freeze thaw will lower DNase activity.
Q4: Is the DNase-I treatment necessary?
If the downstream application requires DNA-free RNA, we recommend performing the DNase I treatment.
Q5: Is the kit compatible with samples stored in DNA/RNA Shield?
Yes, bring samples homogenized and stored in DNA/RNA Shield to room temperature (20-30ºC). Add 3 volume of TRIzol/TRI Reagent and mix well. Proceed with RNA Purification.
Q6: Is it possible to extract proteins with the Direct-zol RNA kits?
Yes, proteins can be Acetone Precipitated post RNA binding step. Please request supplementary protocol from Zymo Research Technical Support.
Q7: Can samples be stored in TRIzol/TRI Reagent prior to processing?
Yes, samples in TRIzol/TRI Reagent or similar are stable overnight at room temperature and can be stored frozen (-80C). Be sure to lyse and homogenize the sample well prior to freezing. Bring the sample to room temperature prior to RNA Purification.
Q8: Is it possible to isolate DNA with the Direct-zol RNA kits?
Direct-zol DNA/RNA (D2080) kits can isolate DNA from TRIzol.
Q9: Is the RNA suitable for Next-Gen sequencing or other sensitive downstream applications?
Yes, the RNA is high quality (A260/A280 >1.8, A260/A230 >1.8) and suitable for any downstream application, including NGS, RT-PCR, hybridization, etc.
Q10: Which phenol-based reagents are compatible with Direct-zol?
The Direct-zol kits are compatible with TRI Reagent, TRIzol, Qiazol, RNAzol, TriPure, TriSure, etc., and any other acid-guanidinium phenol-based reagents.
Q11: What is the difference between the Direct-zol RNA and Quick-RNA kits?
Direct-zol is for samples stored/collected into TRIzol/similar reagents. Quick-RNA is for all other samples.
Q12: What is the difference between the Direct-zol RNA MiniPrep and the Direct-zol RNA MiniPrep Plus?
Both kits function the same, the only difference is the RNA binding capacity of the column provided with the kit.
Q13: I ran out of RNA Wash Buffer. Can I use something else?
Yes, use 80% ethanol as a substitute. RNA Wash Buffer is also sold separately.
“It took hardly any time, the protocol was so easy, and my RNA quality was SO much better. Honestly, this kit revolutionized my life at the bench.”
-A. Newhart (The Wistar Institute)
“Simple protocol and yielded good quality of RNA. Only one kit working for all type of tissue, cell and especially biological fluids.”
-Mohan K. (University of Illinois, Chicago)
“Previously I used a protocol that took 3 hours, now I can have my RNA in 20 minutes. What is not to like about that? Just one column and two buffers, I love it.”
-Arjan V. (Indiana University)
Read More| Cat # | Name | Size | Price | |
|---|---|---|---|---|
| E1010 | DNase I Set | 250 U | $56.00 | |
| R1003-3-12 | RNA Wash Buffer | 12 ml | $30.00 | |
| R1003-3-48 | RNA Wash Buffer | 48 ml | $105.00 | |
| R2072 | Direct-zol RNA Miniprep Plus | 200 preps | $555.00 | |
| R2070 | Direct-zol RNA Miniprep Plus | 50 preps | $180.00 | |
| C1006-50-G | Zymo-Spin IIICG Columns | 50 Pack | $55.00 | |
| C1001-50 | Collection Tubes | 50 Pack | $15.00 | |
| R2050-2-40 | Direct-zol RNA PreWash (Concentrate) | 40 ml | $42.00 | |
| R2050-2-160 | Direct-zol RNA PreWash (Concentrate) | 160 ml | $166.00 | |
| W1001-10 | DNase/RNase-Free Water | 10 ml | $19.00 | |
| W1001-30 | DNase/RNase-Free Water | 30 ml | $22.00 | |
| W1001-1 | DNase/RNase-Free Water | 1 ml | $10.00 | |
| E1010-1-4 | DNA Digestion Buffer | 4 mL | $15.00 | |
| R2050-1-200 | TRI Reagent | 200 ml | $219.00 | |
| R2050-1-50 | TRI Reagent | 50 ml | $70.00 | |
| E1010-1-16 | DNA Digestion Buffer | 16 mL | $29.00 |
ebiomall.com
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2.磁珠法提取DNA试剂盒
3.DNA提取试剂盒（离心柱法）
4.磁珠法RNA提取试剂盒
5.RNA提取试剂盒（离心柱法）
6.磁珠法植物基因组DNA提取试剂盒
7.反转录试剂盒
8.胶回收试剂盒
9.PCR纯化试剂盒
10.病毒核酸提取试剂盒（磁珠法）
11.土壤基因组DNA提取试剂盒
12.法医样本DNA提取试剂盒（磁珠法）等 1.elisa
常见elisa试剂盒有：
特种蛋白检测elisa试剂盒
如免疫球蛋白,抗链O-aso,类风湿因子RF,C反应蛋白,微量白蛋白,β-2微球蛋白human,铁蛋白,转铁蛋白transferrin等等
肿瘤标志物检测elisa试剂盒：
如肿瘤标志物，组织多肽抗原，肿瘤相关因子，胰腺癌，直肠癌，细胞角蛋白片段，胃肠癌，铁蛋白，糖链抗原，神经特异性稀醇化酶，上皮膜抗原，乳腺癌，人抗小鼠抗体，前列腺，甲胎蛋白，肝癌，甲基苯丙胺，大肠癌，肺癌，大小便隐血检测，癌胚抗原，β-2微球蛋白等等。
食品安全检验elisa试剂盒：
食品中的激素、药物、霉菌毒素、过敏原残留、转基因产品的检测试剂盒，以及微生物、维生素等的检测产品。
植物病毒、细菌、真菌、植物激素和转基因作物的农业诊断试剂盒
动植物疾病诊断类如猪、牛、羊、马等家畜和禽类以及宠物类检测试剂盒
传染病检测elisa试剂盒
如幽门螺杆菌,乙脑,乙肝,丙肝,丁肝,戊肝,庚肝,衣原体,性病,腺病毒,微小病毒B19,天疱疮,水痘-带状疱疹病毒,生殖支原体,伤寒,沙眼,腮腺炎,人型支原体,麻疹,轮状病毒,流行性出血热,淋球菌,莱姆病,柯萨奇,抗解尿支原体,军团菌,结核,胶原,尖锐湿疣,甲肝,脊髓灰质炎,急性胰腺炎尿胰蛋白酶,霍乱,呼吸道合胞病毒,肝吸虫,副流感,肺炎,带状疱疹,传染性单核细胞增多症,层粘蛋白,布鲁氏杆菌,百日咳,白喉,艾柯病毒,EB病毒,A族链球菌等等。
2.免疫共沉淀试剂盒
3.化学发光试剂盒
4.免疫组化试剂盒
5.放射免疫试剂盒
6.免疫荧光试剂盒 1.细胞凋亡试剂盒
2.葡萄糖检测试剂盒
3.支原体检测试剂盒
四、试剂盒使用示例
试剂盒的产生正是为了使实验人员能够摆脱繁重的试剂配制及优化过程，所以试剂盒中一般配备有相应的使用说明书，用户按照说明书不需或只需少量的优化即可得到满意的结果。
⑴试剂盒使用说明书
说明书一般包括公司标志及名称、试剂盒名称、试剂盒组成、保质期、使用领域、使用方法等项目
说明书格式如右图所示：
①一般在页眉页脚处为公司的名称及标志；
②接下来为试剂盒的名称；
③试剂盒组成中应为试剂盒中的所有内容，为了简洁明了，一般以表格的形式表现；
④操作步骤是试剂盒说明书中最重要的部分，内容应准确、简洁、易懂，不能包含带有歧义的句子，更不能含糊其辞，排版上操作步骤应将复杂的步骤拆解，使人一目了然。可以说操作步骤为试剂盒的灵魂。 试剂盒内容（以离心柱型为例）：
一般包括：裂解液RL
去蛋白液RW1
漂洗液RW
RNase free ddH2O
吸附柱（RNase free）
过滤柱（RNase free）
缓冲液
离心管（RNase free）
收集管（RNase free）
此外，还配有一份试剂盒使用说明书，根据不同的生产商，可能还配有不同的试剂，如：DNA酶、溶菌酶等。
使用时一定要根据自己的实验需要购买专用提取试剂盒， 如果不是专用试剂盒，或许能提出RNA，但不能确保其质量以及完整性，会影响RT-PCR、Northern blot、Dot blot、Real time RT PCR、芯片分析、polyA 筛选、体外翻译、RNase 保护分析、分子克隆等后续实验的结果。
当前提取效果好的是QIANGEN公司生产的RNA提取试剂盒，但其售价较高，单次实验费用花费太大，对精度要求不高的实验没有必要购买，当然还有其它的进口试剂盒，但是均存在价格高、订货周期长的问题（如果碰上国内无货的时候，要从国外发货，会等很长一段时间）。普通的提取实验用国产的试剂盒就足以，价格不高，基本上各地均有现货，如天根（目前国内生产的试剂盒中销售面比较广的一种）等，其价格比进口试剂盒要便宜许多，且效果还不错，性价比还可以。
当然，就RNA的提取而言，不一定试剂盒的提取效果就非常好，其实采用一些经典的RNA提取方法，效果也很不错，如：TRIZOL、EDTA等，只是试剂盒使用方便，经典的方法操作复杂一些。向左转|向右转
见到论坛上很多做蛋白纯化的小伙伴，经常在使用超滤技术的时候遇到各种相同的问题，反复的在版块上出现，根据自己的经验，我把此方面的内容整理一下，便于初学者以及遇到问题的小伙伴了解掌握。
如果大家有问题可以留言，咱们切磋交流，我没有将我在使用中的经验、教训一一罗列，更多的是将该技术相关的基础知识和背景进行了总结，因为我认为我们对任何一种技术的研究运用，都应当立足于其基础知识和背景来进行，而非“明知不可而为之”。
超滤（此处仅指用于蛋白样品处理的超滤技术）
定义：是以压力为推动力进行大分子和小分子分离的膜分离技术之一。
关键概念：截留分子量（MWCO），所有的膜分离技术均涉及的问题。其定义为：用已知分子量的球状物质进行测定。膜对被截留物质的截留率大于90%时，就用被截留物质的分子量表示膜的截留性能。以前参加研讨会的时候有老师称，一般大分子量90%截留，小分子量50%截留。与超滤有关的另一个概念是浓差极化，在膜分离过程中，大分子物质被膜所截留不断累积在膜表面上，使其在膜表面的浓度远高于其在主体溶液中的浓度，从而形成浓度差，并促使其反向主体溶液中扩散。一方面造成局部浓度过高，对蛋白本身的稳定性造成挑战，极易沉淀，另一方面对分离产生阻力，影响分离的成败和成本。
常见用途：去除盐类，浓缩样品
主要误区：经常有人认为或建议别人使用超滤技术进行两个不同大小分子量的蛋白分离，但几乎很少有人尝试成功过，即使成功了，也很难重复出来。仔细理解定义，我们可以看出超滤技术的局限性在哪里，关键词就在于：已知分子量的球状物质、截留率。这也是导致误区的所在。我们所拿到的标示10KD截留分子量的超滤装置，仅代表10KD球状蛋白可以很大概率的被截留在膜上面。定义中是进行的一个标准实验，实际使用中情况千差万别（我们的蛋白形状未必都是球状的，其他杂质存在干扰，膜及装置的差别等），所以不必太纠结这个MWCO的存在，参考而已。在使用时，一般会选择1/3目标蛋白分子量的超滤装置规格进行使用。以保证目标蛋白的浓缩。
常见超滤装置：
超滤是以压力为推动力的，常用的压力来源有使用惰性气体、离心力以及电驱动泵动力几种情况。我使用比较多的是下面的前两张图，左图是使用氮气罐进行正压超滤，可以进行搅拌，避免浓差极化，一般使用的压力为0.15-0.2MPa。过高的压力一方面超出装置的耐受，另一方面高压也容易引起蛋白质的失活变性。右图是不同规格的超滤管，搭配离心机进行使用，离心力一般几千g，不同厂家的有垂直的膜，也有水平的膜，我认为水平的效果稍好，使用这个装置的话，不可避免的损失比前者大（但其实每一种膜分离技术，损失都是不可避免的），我做过有时的损失会达到50%-70%，浓度越低损失越大。第三种是中空纤维浓缩，自动化程度可实现较高，处理样品的体积可以很大，可实现高倍浓缩，是其主要优势。
使用中常见注意事项：
超滤膜保存非常重要，不管使用哪一种装置，在使用后进行高盐+水清洗，以及低浓度乙醇保存，中空纤维的可以使用NaOH保存，尤其是前两种，膜一旦干了，就会导致孔径变化，或膜裂，无法继续使用；
不同蛋白最好不要混用超滤膜，非常容易引起交叉污染；
以上装置仅适用于澄清样品处理，浑浊样品会加剧膜孔径的堵塞和损坏；
使用过程中压力或离心力不要超出要求，以免损坏装饰；
一些超滤膜是分正反面的，即孔径分布呈梯度，也有一些超滤膜是不分正反面的，孔径均匀分布；
以上3种装置，我在使用中均遇到过蛋白沉淀的情况，因此蛋白质的稳定性问题需多考虑解决；
。。。。。。待补充
1、氯化铯的配制方法，如配制1.1g/ml、1.3g/ml和1.4g/ml的氯化铯应该是怎样配制呢？比例如何，是用tris－Hcl直接稀释呢，还是先配成饱和状态呢？
2、氯化铯纯化腺病毒以后，是用什么样的透析袋呢？一般孔径的可不可以啊？腺病毒的直径大约90nm。
再次谢过！！
液体的一抗加50%甘油，-20度也不会冻结，可保存3-5年；
经常使用时取出一小份，4度可使用半年之久；
粉末状的二抗直接-20或-80度贮藏就行了。
级超滤机般5级第级PP棉第二级性炭第三级压缩炭第四级超滤膜第五级置性炭
C、如果检测的指标数目超过了流式细胞仪的通道，怎么办？如果需要做5个指标，而流式细胞仪只能做4个通道，首先将指标归成2类，再将样本分成2份，分别检测。比如需要同时检测CD3、CD4、CD8、IL-4和IFN-gamma，那么将样本分成两份，第1份加CD3、CD4、CD8和IL-4，而第2份加CD3、CD4、CD8和IFN-gamma。
二、同型对照（IsotypyControl）1、为什么要用同型对照？同型对照是使用与一抗相同种属来源、相同亚型、相同剂量和相同的免疫球蛋白及亚型的免疫球蛋白，用于消除由于抗体非特异性与细胞结合而产生的背景染色。同型对照是真正意思上的阴性对照，它不但可以用来设定流式细胞仪的电压，而且还可以帮忙省去昂贵与繁琐的重组细胞因子竞争封闭步骤。在流式细胞仪上样前，染色方式如下：样本管：一抗＋样本同型对照管：同型对照＋样本
2、如何选择同型对照？一般选择与一抗的成分完全相同种属来源、相同亚型和亚链、相同荧光标记的抗体，比如抗人的CD56APC标记的抗体，货号是555518,成份是MouseIgG1,κ。那么它的同型对照应该是APC标记的MouseIgG1,κ，货号是555751。注意同型对照的成份跟它的名称是相同的.如果是抗体的组合形式是纯化的一抗＋荧光标记的二抗，那么应该选择一抗的同型对照。比如CDw125的纯化抗体，货号是555901，成分是MouseIgG1,κ。它的同型对照是纯化的MouseIgG1,κ，货号是555746。它的二抗PE标记的抗小鼠IgG1,货号是550083。那么染色方式如下：样本管：纯化的CDw25＋PE标记的抗MouseIgG1＋样本同型对照管：纯化的同型对照＋PE标记的抗MouseIgG1＋样本
如果没有找到适合的同型对照，在保持来源相同、荧光标记相同、免疫球蛋白类别相同条件下，那么优先选择的顺序应该是亚链不同－－亚型不同－－相同类别。比如，某种的抗体的来源是MouseIgG2а,κ。如果在同型对照表里面找到不到完全相同的同型对照，那么优先选择相同荧光标记的MouseIgG2а为同型对照。如果也没有找到MouseIgG2а，那么优先选择相同荧光标记的MouseIgG2b作为同型对照。如果最后还是没有找到MouseIgG2b，那么选者相同荧光标记的MouseIgG2作为同型对照。
3、如何查找同型对照？同型对照在BD英文目录中或者BD网站上跟它对照的抗体的位置是一致的。BD目录中，抗人的抗体的同型对照都在HUMAN章节后面。抗小鼠的抗体的同型对照在MOUSE章节后面，非人类灵长类的抗体同型对照在NONHUMANPRIMATE章节后面。由于抗大鼠的抗体非常少，大部分抗体都是小鼠来源的，所以它的同型对照跟小鼠的一样，放在MOUSE章节后面。胞内细胞因子、趋化因子、补体、炎症介质及其受体的同型对照放在其章节的后面（注意：人的胞内细胞因子的同型对照跟人的表面标志的同型对照是不在一起的）。Phosflow的同型对照在Phosflow的介绍后面。比如，比如抗人的CD56APC标记的抗体，货号是555518，在06版BD目录的169页，成份是MouseIgG1,κ。那么它的同型对照应该是在HUMAN章节中MouseImmunoglobulinIsotype表格中，第191页，APC标记的MouseIgG1,κ，货号是555751。
4、哪些客户需要使用同型对照？A对流式不是非常熟悉的客户。B做胞内流式客户，比如胞内细胞因子、趋化因子和信号蛋白等。C使用不常见的标志或者特异性不高的标志的客户，因为客户不熟悉不常见标志的表达情况，根据同型对照可以判断阳性细胞的位置。一些特异性不高的抗体，如多抗，非特异性结合非常多，使用同型对照可排除假阳性。D对流式非常熟悉又使用常用的表面标志的客户一般可以不使用同型对照。
5、为什么有时候同型对照的表达会比抗体的表达高？首先需要检查同型对照的抗体是否加错类型、剂量等。其次，因为有些标志在细胞的表面或者胞内表达不高，而跟其类似的抗原非常多，那么加入同型对照时，同型对照非特异性的结合会超过抗体的特异性，所以会造成这种现象，在细胞表面时如图所示。这个时候推荐使用其他阴性对照，如空白对照等。
三、补偿微球流式细胞仪的荧光补偿隔一段时间之后需要调整到适合的位置。如果荧光补偿没有调节好，会导致细胞分群不明显或者流式检测得到的结果图非常不漂亮，而且会影响到检测结果的不真实。荧光补偿的调节对初学者来说非常不容易掌握，同时，补偿调节是流式细胞术中比较难掌握的操作。尤其是一些不常见的标志检测时，需要经验非常丰富的流式操作者根据多年的经验判断调节补偿，才可以得到比较好的数据和图片。那么，现在不需要这么麻烦。因为补偿微球让一切变得更简单。BDCompBeads是专用于流式细胞仪多色分析的荧光补偿调整微球。它的实用性是在于克服了以往普通的做三色以上的流式分析时补偿难调、耗费样本（往往用待测样本单标来进行补偿调节）的缺点。它本身不携带任何荧光，借助于与客户自己的特异性荧光抗体孵育结合来调节补偿。它不但能象待测的样本细胞一样在同样的实验条件下固定、破膜等，操作起来很简单，灵敏度高，一致性好，使补偿更轻松更准确，而且最难得的是它最适合于多色分析（如五色、六色、七色等）和复合荧光素（如PE-Cy7、APC-Cy7等），因为这时的补偿往往难度较大。各型号的流式仪器均能使用。Compbeads使用后可以将流式的条件保存，方便下次做同样的荧光染色搭配时参考用。
