
(请教)关于电泳后凝胶直接做抗原免疫动物的问题
2021-08-11
问题描述:
我查了一些资料,说可以蛋白电泳后直接切下蛋白条带,加佐剂乳化后免疫动物。可是文献没有详细说明,是否拿纯化后的蛋白电泳跑胶,还是可以表达的产物(我用的是大肠杆菌的表达系统,非融合蛋白)直接跑胶?
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timnan
用户大肠表达要看未诱导时是否在目的蛋白位置有条带,如果没有与目的蛋白大小相等的细菌内源蛋白出现,可以不必纯化蛋白,表达产物进行SDS-PAGE后,切下目的条带,冰上研磨后加佐剂混合均匀,也可不加佐剂,PAGE本身就是佐剂,但加佐剂效果好一些;切胶尽量切得准一些,宁缺勿滥,可以制备一块厚胶,配制5×loading buffer,可以增加上样量。
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