抗原免疫动物制备血清，常用动物有哪些

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抗原免疫动物制备血清，常用动物有哪些

2018-01-10

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谆杜促掖

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以抗原免疫动物获得抗血清是制备抗体的经典方法。为了提高免疫效果，在免疫的时候，常辅以佐剂以改变抗原的物理状态而延长其在体内的滞留时间，使抗原缓慢释放，同时非特异性的促进局部吞噬细胞反应来增强动物的免疫效果。佐剂的类型较多，目前常用的还是福氏佐剂(Freund’sAdjuvant，FA)。它是一种对大多数抗原都有效的佐剂，但由于它的一些副作用限制了它在实验动物上的使用。因此，福氏佐剂只能在确实需要的情况下(如使用的抗原为小分子可溶性抗原或半抗原)和强佐剂活性时使用。FA是用矿物油(石蜡油)、乳化剂(羊毛脂)和灭活的分枝杆菌(结核分枝杆菌或卡介苗)组成的油包水乳化佐剂。这三种成分俱全的佐剂称为福氏完全佐剂(Freund’sComD】eleAdjuvant，FCA)，不含分枝杆菌的佐剂为福氏不完全佐剂(Freund’sInconrpleteAdjuvant，FIA)。石蜡油因不能代谢而存留在注射的部位，这就阻碍了抗原降解或快速反应，起到抗原储存作用，使抗原缓慢持续的释放，不断刺激机体的免疫系统而产生免疫反应。乳化剂对于水溶性抗原与油稳定地乳化是必要的。分枝杆菌具有很强的免疫刺激作用，可以非特异性的激活免疫系统。FCA用于基础注射，而FIA用于辅助注射以避免分枝杆菌蛋白引起的过敏反应。FA皮下注射或肌内注射可导致多种副作用，例如肉芽肿和无菌性脓肿的形成。腹腔注射引起腹膜炎。由于这些严重的副作用，FA不允许用于人或动物的疫苗接种免疫。传统的免疫方案，包括使用福氏佐剂和某些免疫程序，已不再被一些国家的权威机构所接受。据调查，在荷兰有64％的研究人员使用FCA，而且，用于多克隆抗体的生产方案差异很大。因此，在1993年，荷兰发布了利用动物免疫技术制备多克隆抗体的生产指南。主要规定了加强免疫注射的次数、免疫途径、注射量和佐剂的使用，并且支持使用替代佐剂来替换FCA。由于FCA给实验动物带来的严重的副反应，对它的使用提出了特别的限制，规定了(小鼠和大鼠sc：0．1nd；i．d：家兔0．o5rI1l；i．P：小鼠0．2nd)推荐使用量和注射途径。

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抗原免疫动物制备血清，常用动物有哪些抗原注射进入动物体内后，因为不是一个单独的分子，会随血液循环输送到各处，也就会接触不同的免疫细胞。有些还会被抗原提呈细胞再加工。所以最后的结果是很多个免疫细胞都会接触到。一个抗原分子也有很多抗原表位。每个表位理论上都有能力激活一个B细胞转化为浆细胞。所以体内最后针对该抗原的必定是多克隆（1）抗原：免疫动物是制备抗血清的第—步。免疫所用的抗原可用病毒、细菌或者其他蛋白质抗原，如果使用半抗原如小分子激素等，必须与大分子载体连接。抗原的用量视抗原种类及动物而异，—次注射小鼠可以少至几个微克，免、羊甚至更大的动物每次注射的量就相应增加，从几百μg/次至几mg/次。〔2）佐剂及乳化：佐剂可以帮助抗原在注射部位缓慢释放，以增加免疫刺激的效果。佐剂有完全和不完全佐剂之分。完全佐剂加有灭活的分枝杆菌（如卡介苗）或棒状杆菌。福氏佐剂可从试剂公司购买，也可用羊毛脂和石蜡油按1：2—4混合自行制备。佐剂与抗原按1：1的比例混合乳化为均匀的乳液，放置后不会发生油水分离。

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