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SDS-PAGE: Coomassie-stained SDS-PAGE showing purified JEV VLPs.

JAPANESE ENCEPHALITIS VIRUS VLP

Recombinant Japanese encephalitis VLP (virus-like particles) produced in HEK293 cells and purified from culture supernatant.

PRODUCT DETAILS – JAPANESE ENCEPHALITIS VIRUS VLP

  • VLPs composed of pre-Membrane and Envelope proteins (NCBI accession number P27395.1, AA105-819; sequence strain SA-14).
  • Expressed in HEK293 cells and purified from culture supernatant using density gradient centrifugation and ion exchange chromatography.
  • Presented in Dulbecco’s phosphate buffered saline pH7.4, sterile filtered.

BACKGROUND

The Japanese encephalitis virus (JEV) is a flavivirus and is related to the West Nile Virus. JEV is the main cause of viral encephalitis in many countries of Asia with an estimated 68 000 clinical cases every year (WHO). Although symptomatic Japanese encephalitis (JE) is rare, the case-fatality rate among those with encephalitis can be as high as 30%. Permanent neurologic or psychiatric sequelae can occur in 30%–50% of those with encephalitis. Flaviviruses are positive-stranded RNA viruses with a 9-12- kb genome that is translated as a single polyprotein and then cleaved by host and viral proteases into structural capsid (C), premembrane (prM), envelope (E) proteins and seven nonstructural proteins. Capsid binds to viral RNA to form a nucleocapsid that is enveloped by an endoplasmic reticulum-derived membrane containing E and prM. E proteins are responsible for cellular attachment and possess a hydrophobic loop that mediates fusion of viral and host membrane.The E protein is therefore the primary target of neutralizing antibodies.

VLPs are often spontaneously produced during Flavivirus infection and they can also be produced recombinantly using different expression systems (Kümmerer, 2006). VLPs are produced as a noninfectious recombinant antigens and expressed as extracellular particles. Studies have showm that gradient-purified JEV particles exhibit hemagglutination activity at the same pH optimum (6.6) as Japanese encephalitis virus. IgM and IgG ELISA have also shown that recombinantly produced JEV VLPs perform similarly to Japanese encephalitis virus-infected mouse brain antigen for the analysis of serum samples from patients with symptoms of acute encephalitis (Hunt et al. 2001).

Many diagnostic reagents and vaccines targetting viral diseases are produced using infectious agents, making them costly and hazardous to manufacture. However, recombinant DNA technology, makes it possible to bypass these problems by synthesizing viral immunogens and antigens in vitro. To be viable, the immunologically relevant viral components must be produced in an authentic form, which often require the recombinant expression system to duplicate the posttranslational processing pathways that contribute to viral antigen formation. These posttranslational events in antigen formation may be particularly important in the synthesis of envelope glycoprotein structures, especially those that are heterodimeric (Konishi et al., 2001). This Japanese Encephalitis Virus VLP has been manufactured using mammalian cells to meet the need for a highly purified, concentrated protein for use in vaccine research and serological based diagnostic products (Krol et al., 2019). As usual this product is produced to The Native Antigen Company’s very high quality standards for lot-to-lot variation minimisation and product traceability. Please see the downloadable Certificate of Analysis for further information.

REFERENCES

  • Hunt et al. (2001). A recombinant particulate antigen of Japanese encephalitis virus produced in stably-transformed cells is an effective noninfectious antigen and subunit immunogen. Journal of Virological Methods. Volume 97, Issues 1–2, Pages 133-149.
  • Japanese encephalitis. 2019. World Health Organisation (WHO).
  • Konishi et al. (2001). Generation and Characterization of a Mammalian Cell Line Continuously Expressing Japanese Encephalitis Virus Subviral Particles. J Virol. 75(5): 2204–2212.
  • Krol et al. (2019). Production and Biomedical Application of Flavivirus-like Particles. Trends in Biotechnology.
  • Kümmerer B. The molecular biology of yellow fever virus. in: Kalitzky M. Borowski P. Molecular Biology of the Flavivirus. Horizon Bioscience, 2006: 1-16.

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2021-08-14
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国内那儿有啊,尤其溶血素我一点信息都没打听到,多谢
能够散播病原体的人或动物叫做()A.抗原B.传染源C.传播途径D.易感人群
大家好!我要用10个氨基酸多肽偶联到血蓝蛋白作为抗原,对BABL/c小鼠进行免疫制备单抗。请有经验的老师介绍下,每次每只小鼠应选择多大量的多肽,或者偶联后的量对小鼠进行免疫比较好。因为没有经验,所以请大家热心指教!多谢多谢
我查了一些资料,说可以蛋白电泳后直接切下蛋白条带,加佐剂乳化后免疫动物。可是文献没有详细说明,是否拿纯化后的蛋白电泳跑胶,还是可以表达的产物(我用的是大肠杆菌的表达系统,非融合蛋白)直接跑胶?
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针对同一抗原决定簇在不同动物体内产生的IgG和IgM可变区是否相同。如同一种抗原免疫鱼和兔,鱼产生的是IgM,兔产生的是IgG,两者针对同一抗原决定簇时可变区一样嘛?谢谢!
我用多肽自动合成仪(日本Shimadzu公司,型号Pssm-8)合成了由8个氨基酸组成的短肽,用戊二醛法将短肽和BSA耦联后免疫大鼠,分别于免疫后1个月,2个月测血清中针对该短肽的抗体滴度,结果不理想,抗体基本没产生,请问是否因为肽段太短,还是有其他原因,烦请指教,谢谢!
用抗原免疫动物制备抗血清时,为什么要对动物多次免疫接种
  抗原注射进入动物体内后,因为不是一个单独的分子,会随血液循环输送到各处,也就会接触不同的免疫细胞。有些还会被抗原提呈细胞再加工。所以最后的结果是很多个免疫细胞都会接触到。一个抗原分子也有很多抗原表位。每个表位理论上都有能力激活一个B细胞转化为浆细胞。所以体内最后针对该抗原的必定是多克隆
  由于动物个体差异的存在,同一抗原免疫同一种系不同个体的动物,产生的抗体的效价有很大的差异.与动物的年龄和营养状况密切相关.免疫用的动物最好选择适龄的健康雄性动物,雌性动物特别是妊娠动物用于制备免疫抗体则非常不合适,有时甚至不产生抗体.
  先饲养观察7天其实就是等于隔离检疫,观察一下兔子的身体状况和是否带有其他传染病,淘汰体质多病的个体,防止在免疫过程中死亡或免疫应答不灵敏而不产生抗体.
生化培养箱 123
jrq5012018-01-10
IgM-先锋抗体
IgM占血清免疫球蛋白总量的6%,主要存在血管内,是机体受抗原刺激后最先产生的抗体,起“先锋免疫”作用,具有很强的细胞毒活性和细胞溶解活性,由于IgM主要存在在血管内,是抗血管内感染的第一线抗体,对防止败血症的发生有重要作用。

IgG-主力抗体
IgG是初级免疫应答中最持久、最重要的抗体,它仅以单体形式存在。大多是抗菌性、抗毒性和抗病毒抗体属于IgG,它在抗感染中起到主力军作用,它能够促进单核巨噬细胞的吞噬作用(调理作用),中和细菌毒素的毒性(中和毒素)和病毒抗原结合使病毒失去感染宿主细胞的能力(中和病毒)。

IgA-局部抗体
按其免疫功能又分为血清型及分泌型两种。血清型IgA存在于血清中,其含量占总IgA的85%左右。血清型IgA虽有IgG和IgM的某些功能,但在血清中并不显示重要的免疫功能。分泌型IgA存在于分泌液中,如唾液、泪液、初乳、鼻和支气管分泌液、胃肠液、尿液、汗液等。分泌型IgA是机体粘膜局部抗感染免疫的主要抗体。故又称粘膜局部抗体。
免疫学实验问题答案 123
监控_洫潕2018-01-10
以抗原免疫动物获得抗血清是制备抗体的经典方法。为了提高免疫效果,在免疫的时候,常辅以佐剂以改变抗原的物理状态而延长其在体内的滞留时间,使抗原缓慢释放,同时非特异性的促进局部吞噬细胞反应来增强动物的免疫效果。佐剂的类型较多,目前常用的还是福氏佐剂(Freund’sAdjuvant,FA)。它是一种对大多数抗原都有效的佐剂,但由于它的一些副作用限制了它在实验动物上的使用。因此,福氏佐剂只能在确实需要的情况下(如使用的抗原为小分子可溶性抗原或半抗原)和强佐剂活性时使用。FA是用矿物油(石蜡油)、乳化剂(羊毛脂)和灭活的分枝杆菌(结核分枝杆菌或卡介苗)组成的油包水乳化佐剂。这三种成分俱全的佐剂称为福氏完全佐剂(Freund’sComD】eleAdjuvant,FCA),不含分枝杆菌的佐剂为福氏不完全佐剂(Freund’sInconrpleteAdjuvant,FIA)。石蜡油因不能代谢而存留在注射的部位,这就阻碍了抗原降解或快速反应,起到抗原储存作用,使抗原缓慢持续的释放,不断刺激机体的免疫系统而产生免疫反应。乳化剂对于水溶性抗原与油稳定地乳化是必要的。分枝杆菌具有很强的免疫刺激作用,可以非特异性的激活免疫系统。FCA用于基础注射,而FIA用于辅助注射以避免分枝杆菌蛋白引起的过敏反应。FA皮下注射或肌内注射可导致多种副作用,例如肉芽肿和无菌性脓肿的形成。腹腔注射引起腹膜炎。由于这些严重的副作用,FA不允许用于人或动物的疫苗接种免疫。传统的免疫方案,包括使用福氏佐剂和某些免疫程序,已不再被一些国家的权威机构所接受。据调查,在荷兰有64%的研究人员使用FCA,而且,用于多克隆抗体的生产方案差异很大。因此,在1993年,荷兰发布了利用动物免疫技术制备多克隆抗体的生产指南。主要规定了加强免疫注射的次数、免疫途径、注射量和佐剂的使用,并且支持使用替代佐剂来替换FCA。由于FCA给实验动物带来的严重的副反应,对它的使用提出了特别的限制,规定了(小鼠和大鼠sc:0.1nd;i.d:家兔0.o5rI1l;i.P:小鼠0.2nd)推荐使用量和注射途径。
抗体和抗原有什么区别123
诺念禁卫军2732018-01-10
【提问】?二者之间能否互相代替?【回答】答复:区别详见下。这两个概念之间不是一个排它性的关系。某种物质在某种条件下被称为抗原,在另一条件下则可被称为抗体。抗原:指能刺激机体免疫系统产生免疫应答而生成抗体和致敏淋巴细胞等免疫应答产物并与之发生特异性结合的物质。抗原在化学结构上与机体自身不同,具有异物性:①异种物质。从生物进化过程来看,异种动物间的血缘关系越远,则免疫原性越强。如马的血清和各种微生物与人的血缘关系远,所以免疫原性强。而马的血清与驴、骡的血缘关系近,所以免疫原性相对就弱。②同种异体物质。如人的红细胞抗原物质和人的白细胞抗原等。③自身物质。自身物质一般不具免疫原性。有些物质如隐蔽的自身成分(眼晶体蛋白、精子等),在正常情况下与免疫系统是隔绝的。但是一旦屏障遭到破坏,这些物质进入血流,即可与免疫活性细胞接触而成为自身抗原异物。另外,自身物质在外伤、感染、药物和射线的影响下,其理化性质发生质的改变时,也可成为具有免疫原性的抗原物质。抗原具有特异性,反映在两个方面:①能刺激机体产生具有高度针对性的免疫应答(免疫原性的特异性)。②只能与其相对应的抗体或致敏淋巴细胞结合而不能与无关的抗体或致敏淋巴细胞结合(反应原性的特异性)。与人类有关的抗原有:①病原微生物。在医疗中将病原微生物制成疫苗进行预防接种,可以提高人的免疫力。也可以根据微生物抗原的特异性进行各种免疫学试验,帮助诊断疾病。②同种异体抗原。有两大类,一类是红细胞血型抗原,包括A、B、O血型抗原,Rh血型抗原等。不同血型间相互输血,可引起严重的输血反应;另一类是存在于人类白细胞细胞膜上的人类白细胞抗原(HLA),又称主要组织相容性抗原。它们与血型抗原一样,也是由遗传决定的,受染色体上的基因控制。不同的个体(同卵双生者除外)其组织细胞的组织相容性抗原绝大多数不完全相同,因此,在同种异体进行皮肤或脏器移植时,常因供者移植物中存在受者所没有的抗原成分,刺激受者产生对移植物的免疫反应,导致移植物受到排斥而坏死脱落。③动物免疫血清。临床上常用的各种抗毒素血清,一般都是用免疫马来制备的。一方面,抗毒素能中和与其相应的外毒素,起到防治疾病的作用;另一方面,它能刺激人体产生抗马血清蛋白的抗体,当再次接受马的免疫血清时,有可能发生超敏反应。④嗜异性抗原。一类与种属特异性无关的、存在于人以及某些动物、植物、微生物的性质相同的抗原。⑤肿瘤抗原。由物理的、化学的因素或某些病毒诱发的实验动物肿瘤,其细胞中或细胞表面均出现特异性抗原,称为肿瘤特异性抗原。已证实在某些人类肿瘤中心存在着与病毒密切相关的抗原。 抗体(antibody):能与抗原特异性结合并具有免疫活性的球蛋白。它一般是由抗原刺激B细胞分化成浆细胞后产生的。抗体分子具有结合部位(结合簇),能与对应的抗原决定簇结合。抗体与不同的抗原结合往往出现不同的反应,因而常给抗体以不同的名称,如凝集素、沉淀素、抗毒素、溶血素、溶菌素等。1964年,世界卫生组织专门会议将具有抗体活性的球蛋白统一命名为兔疫球蛋白(Ig)。抗体是Ig,但Ig不一定是抗体。按来源抗体可分为天然抗体和免疫抗体。免疫抗体是由抗原刺激机体产生的,如受微生物感染或接种疫苗后产生的抗体;按其作用可分为抗毒素(能中和细菌外毒素毒性的抗体)、抗菌抗体(能与细菌结合的抗体)和抗病毒抗体(能与相应病毒结合的抗体);按其与抗原结合后是否出现可见反应,则可分为完全抗体和不完全抗体。前者指在试管中与相应抗原结合后,在电解质的参与下,出现可见反应的抗体;后者指在结合后不出现可见反应的抗体。
一直到烧伤患者面部的自己的腿的皮肤算不算抗原??(有的答案上说是,有的说不是可不可以给一点点解析??O(∩_∩)O谢谢)
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