关于细菌固定后的抗原活性问题

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关于细菌固定后的抗原活性问题

2016-08-04

问题描述：

最近在做细菌的免疫荧光，因为细菌是浮游的，不能固定，就想了一些办法，比如用多聚赖氨酸把细菌粘附到载玻片上，但这会因为多聚赖氨酸的缘故，造成背景很杂，因此现在想用类似革兰染色一样，通过细菌涂片、干燥、固定这个程序将细菌固定在载玻片上,。问题就来了，通过热固定，细菌烧死了，抗原也变性了，那么还能和抗体结合产生免疫荧光吗？这种热固定和多聚甲醛的固定有什么区别吗？

谢谢。

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东月来星

用户

没人回答，我说下我的看法，不知道对不对希望大神指点。我是做细胞的，没搞过细菌的但是原理都是一样的。楼主说的细菌经过热固定后其蛋白可能发生了变性担心抗体识别不了。我想这个得看抗体了，有的抗体是能够识别变性的抗原的比如跑western的时候，蛋白抗原都是经过沸水煮沸10分钟的。（不知道细菌跑不跑蛋白，原谅我吧）。这样的话完全可以找一个能做western的又能做免疫荧光的抗体来进行你的实验。我最近也在做免疫荧光加流式。在做的时候我的细胞在经过固定之后我进行了一个抗原修复的过程就是将细胞进行了97度15分钟的处理。然后在进行抗体孵育的处理完全能做出来。做实验吗，关键还是在于去尝试。我的抗体说明书只说能做免疫荧光能做western，没说能不能做流式。就直接尝试了一下流式也能成功。楼主可以去尝试看看哈。说不定就柳暗花明了。

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blowapc

用户

这个固定不是什么困难的事情，有很多人都是把细菌固定在玻片的，我一个朋友就做过，给你一篇文献你参考一下ransloconco1mponentEseBformsfilamentsandmediatesautoaggregationandbiofilmformationinEdwardsiellatarda.pdf(1908.15k)

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