
Volume:20μl(approximately20reactions)
HumanMeningealCellPCR-readyfirststrandcDNA(HMCcDNA)ispreparedfromRNAextractedfromHumanMeningealCellsbyaQiagenRNeasykit.2μgtotalRNAisthenreverse-transcribedusinganAppliedBiosystems’High-CapacitycDNAReverseTranscriptionkit.1μlcDNAissufficientforonePCRreaction.cDNAfromSciencellResearchLaboratoriesisconvenientandcosteffectiveforresearchersasiteliminatestheneedtoacquireexpensivetissues.
Specifications:
CatalogNo. | 1404 |
CountryofManufacture | |
ProductCode | HMCcDNA |
Size/Quantity | 20reactions |
ProductUse | ThisProductisforresearchuseonly.Itisnotapprovedforhumanoranimaluse,orforapplicationininvitrodiagnosticprocedures. |
Storage | Quantity:Approximately20reactionsVolume:20�lStoragecondition:Storeat-20�C |
ShippingInfo | Dryice. |
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线粒体tRNA赖氨酸基因上发生1个A8344G突变,该基因与MERRF(伴破碎红纤维的肌阵挛性癫痫)相关。
谢谢,有人知道的吗?
二:主要功能:①运输功能②在逆转录作用中作为合成互补链DNA链的引物。③在细菌细胞壁、叶绿素、脂多糖和氨酰磷脂酰甘油的合成中都与某些tRNA的参与有关。
tRNA的二级结构:单链内某些区域靠氢键配对形成局部双链,并折叠形成其二级结构-三叶草型结构
三级结构是在二级结构基础上进一步折叠形成,呈“倒L”型。
我是这样进行预测的:在“SearchMode:”中选择“rRNAscanonly:”,在“sorce”中选择“mito/chloroplast”,粘贴序列,运行程序。得到了21个tRNA,而鱼中应该是22个tRNA,我觉得很奇怪,在“SearchMode:”和“rRNAscanonly:”中进行其它的设置,都不能得到22个tRNA.
我看的一篇文献“CompletemitochondrialDNAsequenceoftheJapanese
flyingfishCypselurushiraii”中也是说22个tRNA,但是我把文章提交的序列(Genbank号为AB182653.)拿到网上提交,只有21个tRNA,我觉得很奇怪。
不知道是怎么回事?请高手指点,那个软件好像是比较权威的。
tRNA不是一条直的单链,而是弯曲的,呈现一个三叶草的形状。在弯曲的部位,tRNA自己的碱基跟自己的碱基互补配对连起来,碱基对中存在氢键。
其他的RNA一般为单链不存在氢链,但双链的由于碱基互补配对存在氢键。
与小分子siRNAs相比,尽管两者在分子特性、生物起源等方面是相似的,但也存在不少的差异.siRNAs是由dsDNA在Dicer酶切割下产生,而成熟miRNAs的产生要复杂一些,首先pri-miRNA在核内由一种称为Drosha酶处理后成为大约70nt的带有茎环结构的Precursor miRNAs (pre-miRNAs)(Denli et al.,2004; Gregory et al.,2004; Han et al.,2004);这些pre-miRNAs在Exportin-5帮助下转运到细胞核外之后再由胞质Dicer酶进行处理,酶切后成为成熟的miRNAs(Lund et al.,2004; Yi et al.,2003).两者的作用机制上也存在差别,成熟的miRNAs则是通过与miRNP核蛋白体复合物结合,识别靶mRNA,并与之发生部分互补,从而阻遏靶mRNA的翻译.在动物中,成熟的单链miRNAs与蛋白质复合物miRNP结合,引导这种复合物通过部分互补结合到mRNA的3′UTR(非编码区域),从而阻遏翻译.而在siRNA通路中,单链的siRNA结合到RISC复合物中,引导复合物与mRNA完全互补,通过其自身的解旋酶活性,解开siRNAs,通过反义siRNA链识别目的mRNA片段,通过内切酶活性切割目的片段,接着再通过细胞外切酶进一步降解目的片段.除此之外,miRNA也可以切割完全互补的mRNA,而siRNA也可以阻遏3′UTR具有短片断互补的mRNA的翻译.
补充,还有说常见的有丝氨酸水解酶家族,有文献提及赖氨酸。请问这些是如何选择的
大家好,近期在用lipo2000做悬浮细胞HL-60的siRNA转染,siRNA是由公司合成的三个siRNA,但是敲除效率很低,并且每次qPCR后做出来的结果都不一样:有时是第一个siRNA敲除作用好点,但有时是第二个或第三个siRNA效果好。由于结果不稳,并且细胞不好转我就将细胞换成了A549,但是换成了贴壁细胞后发现每次转染后进行qPCR检测时结果还是不稳,另外,我还设置了不同siRNA的组合,有时结果显示siRNA1+siRNA3效果好,但有时显示siRNA1+2+3效果好。光做这个siRNA转染已经几个月了,到现在都没有确定具体哪个片段起作用或效果最好,也没有一个稳定的趋势。请问造成这种敲除效率不稳定的原因到底是为什么?急切等待回复,谢谢!
最近测序做了TRNAfragment,但是在验证测序结果上遇到了问题,TRF大小在30左右,按照mirna设计颈环引物跑PCR,结果测序为0的数据也能跑出来,后来师兄分析可能把成熟的TRNA也检测出来了,不知道有哪位大神可以指导下TRF的引物应该如何设计啊?


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