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Sciencell/Human Neuron-midbrain Genomic DNA/1559/1 Ea
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Sciencell/Human Neuron-midbrain Genomic DNA/1559/1 Ea
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Sciencell
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HumanNeuron-midbrainGenomicDNA(HN-mbgDNA)ispreparedfromearlypassageHumanNeurons-midbrainusingtheQiagenAllprepDNA/RNAMiniKit.

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HumanNeuron-midbrainGenomicDNA(HN-mbgDNA)ispreparedfromearlypassageHumanNeurons-midbrainusingtheQiagenAllprepDNA/RNAMiniKit.ThequalityandpurityofgenomicDNAaretestedbyspectrophotometerandgelelectrophoresis.ThegenomicDNAisprovidedreadytouseforavarietyofanalysesincluding:SNPanalysis,DNAmethylationanalysis,SouthernBlotting,andPCR.GenomicDNAfromSciencellResearchLaboratoriesisconvenientandcosteffectiveforresearchersasiteliminatestheneedtoacquireexpensivetissuesforisolationofDNA.

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CatalogNo.1559
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ProductCodeHN-mbgDNA
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核酸亲和柱的应用极大地促进了核酸结合调节蛋白特性的研究,这些蛋白质涉及基因表达、染色体修复和复制、基因重组等的调控。核酸结合蛋白可以结合单链 DNA、双链 DNA 或 RNA。DNA 结合蛋白结合 DNA 可以是序列特异的,也可以是非特异的。此外,含有特异寡核苷酸的亲和树脂能用于某些酶的分离,这些酶利用结构非常相似的辅酶,如 NAD 和 NADP。总之,核酸亲和柱在各种蛋白质的纯化和特性研究中是一个有用的工具。 查看更多>
浅谈RT-PCR实验方法中常见污染问题及对策河南出入境检验检疫局技术中心 李轲反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)是一种体外核酸扩增技术,它具有特异、敏感、快速、简便、重复性好、易自动化等突出优点,能在几个小时内完成从一根毛发、一滴血、甚至一个细胞中扩增出足量的目的产物供分析研究和 查看更多>
StewartLaboratoryStandardOperatingProcedureBrdUIncorporationProtocolDay1Labelcellswithmediacontaining100μMBrdU(6μL/mLof5mg/mLstock):DiploidFibroblasts,4-6hoursEScells,30minutes3T3cells,2.5hoursTrypsinizecells,washfromplatewithPBS,spindown(400xg,1700rpm,5m 查看更多>
(一) 实验流程(1和2为并列步骤) 1.慢病毒过表达质粒载体的构建 设计上下游特异性扩增引物,同时引入酶切位点,PCR(采用高保真KOD酶,3K内突变率为0%)从模板中(CDNA质粒或者文库)调取目的基因CDS区(coding sequence)连入T载体。将CDS区从T载体上切下,装入慢病毒过表达质粒载体。 2.慢病毒干扰质粒载体的构建 合成siRNA对应的DNA颈环结构,退火后连入慢病毒干扰质粒载体 3 查看更多>
Plasmid stability testImmediately before indcution, it is advisable to test the culture to determine the fraction of cells that still carry the target plasmid. 查看更多>
核酸杂交技术是根据两条互补的核苷酸单链可以杂交结合成双链的原理所建立,用一段已知序列的放射性或非放射性标记的核苷酸单链做探针,与待检标本中的DNA杂交来探查待检标本中有无与之相互补的核酸。该方法特异性高,但敏感性低于PCR方法。  本实验学习用非放射性标记物-地高辛(DIG)标记DNA片 查看更多>
1.1 核酸序列的检索 http://www.ncbi.nlm.nih.gov:80/entrez/query.fcgi?db=Nucleotide 1.2 核酸序列的同源性分析 1.2.1 基于NCBI/Blast软件的核酸序列同源性分析 http://www.ncbi.nlm.nih.gov/blast/blas 查看更多>
Staining Methods for cell death Z. Xia 10/2/95The simplest way: trypan blue. Dead cells stain blue Non-fixed cells: FDA(fluorescein diacetate)-green, alive cel 查看更多>
磁珠寡核苷酸纯化试剂盒Mag-BindOligonucleotidePurificationKit(50)263231北京智杰方远科技有限公司磁珠寡核苷酸纯化试剂盒 查看更多>
2021-08-05
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上海允麦生物科技有限公司在发布的大鼠烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)ELISA 试剂盒供应信息,浏览与大鼠烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)ELISA 试剂盒相关的产品或在搜索更多与大鼠烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)ELISA 试剂盒相关的内容。 查看更多>
Two key features of the immune system are the clonal expansion of B cells and T cells in response to antigens, and the potentiation of future immune responses 查看更多>
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probe英[prəʊb]美[proʊb]
n.[医] (对伤处等的) 针探,探查; [医] 探针,取样器; 探测仪;探头;
vt.探索,调查; 用探针(或探测器等)探查,探测;
vt.盘问; (用试探性袭击等)侦察(敌情) ; 用尖物刺穿(物件); 用力使向前推进;
The more they probed into his background, the more inflamed their suspicions would become
他们越调查他的背景,疑团就越多。

大家好,近期在用lipo2000做悬浮细胞HL-60的siRNA转染,siRNA是由公司合成的三个siRNA,但是敲除效率很低,并且每次qPCR后做出来的结果都不一样:有时是第一个siRNA敲除作用好点,但有时是第二个或第三个siRNA效果好。由于结果不稳,并且细胞不好转我就将细胞换成了A549,但是换成了贴壁细胞后发现每次转染后进行qPCR检测时结果还是不稳,另外,我还设置了不同siRNA的组合,有时结果显示siRNA1+siRNA3效果好,但有时显示siRNA1+2+3效果好。光做这个siRNA转染已经几个月了,到现在都没有确定具体哪个片段起作用或效果最好,也没有一个稳定的趋势。请问造成这种敲除效率不稳定的原因到底是为什么?急切等待回复,谢谢!

tRNA中是有氢键的。
tRNA不是一条直的单链,而是弯曲的,呈现一个三叶草的形状。在弯曲的部位,tRNA自己的碱基跟自己的碱基互补配对连起来,碱基对中存在氢键。
其他的RNA一般为单链不存在氢链,但双链的由于碱基互补配对存在氢键。
【共享】siRNA对照解析123
白堤8544539862021-08-18
不会,siRNA识别靶序列是有高度特异性的,因为降解首先在相对于siRNA来说的中央位置发生,所以这些中央的碱基位点就显得极为重要,一旦发生错配就会严重抑制RNAi的效应。
小弟最近买了sigma的tRNA干粉,技术说可以用水直接溶解,不知道需不需要DEPC处理,多少度保存?
那里能够检查

线粒体tRNA赖氨酸基因上发生1个A8344G突变,该基因与MERRF(伴破碎红纤维的肌阵挛性癫痫)相关。

谢谢,有人知道的吗?

成功转染siRNA的细胞会产生目标基因表达下调,但未成功转染的细胞却不受影响,这时转染效率和总的细胞数量就很重要,一般细胞数量较少时转染效率高,一些试剂由于本身毒性的影响,太低的细胞数量时毒性明显,所以会要求较高的细胞密度(汇合度),顺便说一句,看一个转染试剂的毒性,看它要求转染时的细胞密度就知道了。siRNA的转染和DNA的转染不一样,DNA的转染是过量表达,死亡一些细胞对过量表达的蛋白本身来说影响不大,但siRNA的转染,死亡的细胞所有的基因表达(包括特定目标基因)都下降,将与siRNA造成的特定目标基因的表达下降现象是一致的,将大大影响实验结果。选用低细胞毒性的转染试剂其实很重要,比如engreen的Entranster-R4000.

由于siRNA沉默时效性的影响,转染后48小时才能进行进行qRT-PCR检测,转染后48-72小时才能进行蛋白检测。如果转染时铺板密度较高,细胞一方面转染效果不理想,直接影响沉默效果和数据可靠性,另一方面,48小时甚至更长时间后,沉默检测最佳点时,过于密集的细胞将影响细胞状态,从而影响实验结果。


有问题要请教实验前辈!

用SiRNA抑制蛋白A的表达,SiRNA转染48小时后可观察到蛋白A表达明显下降.

现在想检测SiRNA抑制A蛋白表达后对凋亡蛋白、迁移蛋白及周期蛋白的影响,应该在SiRNA干扰后多长时间检测这些蛋白的变化?48小时?72小时?96小时?

望高手解答,我的理解是转染48小时后A蛋白表达下降,如果要观察A蛋白对以上蛋白的影响,应该在转染后超过48小时再检测这些蛋白的变化,比如72小时或96小时,不知道我的理解对不对?

先谢了!

你好,很高兴回答你的问题。
探针就是DNA弹针。用于检测特定的DNA片段。
基因探针,即核酸探针,是一段带有检测标记,且顺序已知的,与目的基因互补的核酸序列(DNA或RNA)。基因探针通过分子杂交与目的基因结合,产生杂交信号,能从浩翰的基因组中把目的基因显示出来。根据杂交原理,作为探针的核酸序列至少必须具备以下两个条件:①应是单链,若为双链,必须先行变性处理。②应带有容易被检测的标记。它可以包括整个基因,也可以仅仅是基因的一部分;可以是DNA本身,也可以是由之转录而来的RNA。
进行分子突变需要大量的探针拷贝,后者一般是通过分子克隆(molecular cloning)获得的。克隆是指用无性繁殖方法获得同一个体、细胞或分子的大量复制品。当制备基因组DNA探针进,应先制备基因组文库,即把基因组DNA打断,或用限制性酶作不完全水解,得到许多大小不等的随机片段,将这些片段体外重组到运载体(噬菌体、质粒等)中去,再将后者转染适当的宿主细胞如大肠肝菌,这时在固体培养基上可以得到许多携带有不同DNA片段的克隆噬菌斑,通过原位杂交,从中可筛出含有目的基因片段的克隆,然后通过细胞扩增,制备出大量的探针。
为了制备cDNA 探针,首先需分离纯化相应mRNA,这从含有大量mRNA的组织、细胞中比较容易做到,如从造血细胞中制备α或β珠蛋白mRNA。有了mRNA作模板后,在逆转录酶的作用下,就可以合成与之互补的DNA(即cDNA),cDNA与待测基因的编码区有完全相同的碱基顺序,但内含子已在加工过程中切除。
寡核苷酸探针是人工合成的,与已知基因DNA互补的,长度可从十几到几十个核苷酸的片段。如仅知蛋白质的氨基酸顺序量,也可以按氨基酸的密码推导出核苷酸序列,并用化学方法合成。

我想要定量血浆miRNA,目前用的方法就是Qiagen公司的血浆提取、逆转、SYBGreenPCR试剂盒引物也是qiagen,目前做出来的结果不是很理想,公司不提供引物序列,只有miRbase上的参考序列,想要证明引物序列、扩增产物是否是我们想要的,有人推荐设计Tapman探针,再做PCR,对比SYBGreenPCR结果,从而来看引物特异性。我的问题是:这样对比有意义吗?我问过很多公司做tapman只合成不设计,要自己提供序列,可我只有数据库中的参考序列,如果我自己有序列了不就可以合成特异引物,为啥要用tapman探针来验证呢?求专业人士答疑解惑!谢谢

【求助】siRNA转染讨论123
心碎在黄昏3822017-11-04
三到五小时。
siRNA (Small interfering RNA),是一种小RNA分子(~21-25核苷酸),由Dicer(RNAase Ⅲ家族中对双链RNA具有特异性的酶)加工而成。SiRNA是siRISC的主要成员,激发与之互补的目标mRNA的沉默。

各种系统都可以使用,AlleleID7.0没搞的定

本软件只作为学习研究之用,研究完后马上删除,支持正版。。。




感谢ddd198599及其他司机的信息及启发

http://www.stemcell8.cn/thread-20673-1-1.html



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