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DNA提取试剂盒是根据氯化芐法构建的，能够从样本中提取基因组DNA的试剂盒。氯化苄具有能将含有纤维素等的细胞壁中的羟基苄基化，从而破坏细胞壁的特性。本制品利用了氯化苄的这一特性，将植物样品冻结融解后，再使用Pipet Tip的尖端将植物样品在Microtube壁上数次按压即可破坏细胞壁。本法与传统方法相比，省去了液氮研磨等烦琐步骤，有利于一次性处理大量样品。而且，本制品经过了改良，热处理时间只需15分钟，使用本制品从实验开始至水相回收只需30分钟时间。得到的基因组DNA可以进行PCR扩增及限制酶处理等。

1、DNA提取问题：现在核算提取试剂盒大部分都是吸附柱法,相信你应该不会操作错误,如果提取之后进行核酸定量结果很低的话,试着再最后一步溶解核算的时候把水稍微加温（37℃就可以了）,溶解时间稍微长一些,然后再离心的时候采用分次离心,比如开始你用200ul溶解的话,你可以分两次用100ul水溶解离心,这样可以提高DNA的产率.
2、电泳问题：如果你核酸定量浓度不低的话就考虑电泳问题,电泳的时候加上1kb的marker,如果marker跑不出来说明你凝胶有问题,一般只要marker跑出来了,DNA浓度又比较高,而没有条带这样的现象很少见,DNA提取比较简单而且相当稳定,本人当时做甲基化提取的DNA有一次拿出来电泳忘了放回冰箱了,结果大夏天的在外面放了一天,心怀忐忑的进行了一次电泳,结果条带依然给力,一点都没有降解.

DNA提取方法的选择：全血提取试剂盒一般有离心柱和溶液型两种(比如Qiagen、Promega、Bioteke;摒弃酚氯仿手提的方法，时间长毒性大)，原理及步骤基本相同。虽然各公司推出了N多型号，让人不知如何去选择，但从原理和操作步骤看，基本就是离心柱和溶液型两种。一般来说，离心柱(DP1801)的提取纯度高一些，但是处理量小(0.1-1ml)、得率略低;溶液型(DP2101或DP2201)的提取量大(1-10ml)得率也高于离心柱。医院的血液标本一般在2ml以上，一般选择溶液型的方法提取.在说到国产和进口差别的时候，很多人以为进口一定比国产的好，我们觉得没有最好，只有更好!在不断的进行试验优化之后，全血基因组DNA提取试剂盒DP2101或DP2201开创了第三代技术，不需要蛋白酶K消化，进口的都是要借助蛋白酶K的啊!DP2101或DP2201减少了蛋白酶K现配现用的麻烦和消化的时间，而且提取量和稳定性更好。

是单链cDNA，想合成双链cDNA需要另外操作：一、cDNA第二链的合成:1. 第一链反应完成后,取2ul一链产物－20℃冰箱中保存，待电泳检测。其余的产物合并，混匀，然后顺序加入下列试剂(promega):20ul 10×DNA Polymerase I buffer6ul10mM dNTP(自己配制)xuldd H2O1ulRNase H(2U/ul)10ul DNA Polymerase I(10U/ul)总体系为200ul;2. 混匀后,16℃反应2.5小时;3. 70℃灭活10分钟;4. 反应完成后,得到200ul cDNA第二链反应体系,将此体系置于冰上;5．取2ul二链产物，同保存的一链产物一起电泳鉴定。同时上1kb ladder，确定双链的大小范围。注：一链，二链的电泳图是smear，且二链稍比一链大一些。二、双链cDNA末端补平:1. 在第二链反应体系中,顺序加入下列试剂(promega):6ul 10mM dNTP2ul T4 DNA Polymerase(8.7U/ul) 2ul BSA(10mg/ml)2. 稍微离心混匀反应物, 37℃反应至少30分钟,然后75℃灭活10分钟;3. 加入等体积酚/氯仿/异戊醇,剧烈振荡后,常温下13000g离心5分钟;4. 离心后,吸取上清于另一1.5ml eppendof管中,加入等体积氯仿,上下颠倒几次混匀后,常温下13000g离心5分钟;5. 吸取上清至另一eppendof管,加入1/10V3M NaAc(PH5.2)和2.5V预冷的无水乙醇,混匀,-20℃放置过夜以沉淀双链cDNA;6. 第二日,将昨日沉淀物在4℃,13000g离心60分钟以充分沉淀双链cDNA;7.离心完毕,弃上清,加入1ml 70%乙醇洗涤沉淀,常温下13000g离心5分钟;8.离心完毕,弃上清,干燥沉淀至无乙醇气味.注：第3，第4步可以用PCR 纯化试剂盒代替。PCR纯化试剂盒操作流程：1．溶液PE使用前应加入适量体积95％－100％的乙醇，混匀。2．向200ul二链补平产物中加入5倍体积的buffer PB，混匀。3．加入spin column中，13000rpm离心1min。4．加入0.75ml buffer PE，13000rpm离心1min。5．13000rpm，再离心1min。6．将spin column放入一新的离心管中，加入50ul buffer EB，静置10min。7．13000rpm离心2min。8．加入30ul buffer EB，静置10min。9．13000rpm离心2min。10．加入1/10体积3M的NaAc，2.5倍体积无水乙醇，混匀，－20℃沉淀过夜。

作为何种用途啊，还有材料的种类呢？动植物方面差别很大，我个人只了解植物、细菌、藻类、土壤DNA的提取，植物总DNA的哪里的都差不多，价格0.5-2.5元每个样品，关键在研磨和酚类、多糖的去除（抽提），细菌核基因组DNA和土壤宏基因组冻融1.5*CTAB法足以，也没有太好的盒子。volume62提到的磁珠法绝对是非常好的方法，而且十分高效，适合高通量，就是贵啊，对样品的要求也较严格。其实大多数DNA试剂盒都是基于CTAB或SDS法制作的，其优点一般是简单快速，外加药品的来源稳定（自己配药的话这方面可以考虑西格玛分装或者国药，其实真的国药的是很不错的，只是不好搞），再就是配方好了，毕竟试剂公司的研发部门也不是白饭的。

要看你做什么用途了，血浆中的游离DNA本身就很少的，我用过天根和杭州昊鑫生物这两家的血浆游离DNA提取试剂盒，总的来说，两家的性能，杭州昊鑫生物的纯度和提取量要略好一点，后续检测的PCR结果也好一点，CT值比天根的要早3个循环左右，而且，杭州昊鑫生物的试剂盒提取耗时短，比较适合样本多的用户。

各位战友：

样本：从沸水煮过的中药上清
目的：提取DNA并进行PCR检测

问题：
（1）这样的样本中DNA应该会大部分降解，仅有痕量保留，能否推荐一些痕量DNA提取或检测的试剂盒？
（2）Qiagen的法医级别试剂盒有人用过吗？效果如何？
（3）这样的实验战友们有成功的案例吗？

非常感谢！

求助大神：有人提过柔嫩**尔球虫的DNA吗？要求是能构建出文库的，一般文献记载的都是跑PCR就可以了，质量不够。我需要能构建文库的。
不要RNA，不要CDNA文库，就要DNA文库！
好人一生平安，大神帮帮忙！

全血基因组DNA提取试剂盒（离心柱型）作用原来具体是这样的：独特的结合液/蛋白酶K迅速裂解细胞和灭活细胞内核酸酶,然后基因组DNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜,再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤,抑制物去除液和漂洗液将细胞代谢物,蛋白等杂质去除,最后低盐的洗脱缓冲液将纯净基因组DNA从硅基质膜上洗脱.　　试剂盒特点：　　不需要使用有毒的苯酚等试剂,也不需要乙醇沉淀等步骤.　　快速,简捷,单个样品操作一般可在20分钟内完成.　　多次柱漂洗确保高纯度,典型的产量200μl全血可提取出3-6μg,纯度达1.1.9,长度可达30Kb-50kb,可直接用于PCR,Southern-blot和各种酶切反应.　　从十几个配方中优选出的红细胞裂解液配方,裂解快速完全,客户可根据需要选择购买.　　说明书中针对实验过程出现的疑难做出了详细的解答,帮助你解决实验过程中遇到的问题（如标本中含有血凝块、红细胞裂解不完全、DNA产量低、DNA下游酶切不能切开或者酶切不完全、DNA长度小于15kb、A260吸光值异常偏高、洗脱下来的DNA溶液还带有轻微的颜色等）.

我用的是华美生物工程公司全血基因组DNA纯化系统试剂盒，说明书上说利用A260光吸测定浓度对该方法制备的基因组DNA是不适用的，产量可达1ug/20ul全血，5-10ul上清液可以直接用于PCR扩增。
我分别用3ul、5ul、8ul都试过了，没有任何条带，用别人别的方法提好的DNA做，却能出现结果，不知道是自己提取的DNA浓度不够，还是根本没有提取出来。
不知道谁用过，或者有更好的全血提取NDA的试剂盒推荐呢？
本人刚刚开始做PCR，谢谢各位高手！

规格50T售价300，规格100T售价560。以下为试剂盒使用方法及介绍。保存：室温(15℃-25℃) 干燥保存，复检期12个月，2℃-8℃保存时间更长。试剂盒内容： 向左转|向右转产品简介：本试剂盒采用可以特异性结合DNA的离心吸附柱和独特的缓冲液系统，提取细菌基因组DNA。离心吸附柱中采用的硅基质材料为本公司特有新型材料，能够高效专一吸附DNA，可最大限度去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物。提取的基因组DNA片段大，纯度高，质量稳定可靠。使用本试剂盒提取的基因组DNA可用于各种常规操作，包括酶切、PCR、文库构建、Southern杂交等实验。操作步骤：使用前请先在漂洗液中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶体上的标签。 所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。1、取细菌培养液1ml，12000rpm离心1min.，尽量吸除上清。2、向菌体中加入200ul溶液A，振荡或用移液器吹打使菌体充分悬浮（如果是革兰氏阳性菌，可在此步骤加入终浓度为20mg/ml的溶菌酶），向悬浮液中加入20ul的RNase A (10mg/ml)，充分颠倒混匀，室温放置15-30min。3、向管中加入20ul的蛋白酶K(10mg/ml)，充分混匀，55℃消化30-60min，消化期间可颠倒离心管混匀数次，直至样品消化完全为止，此时可见菌液呈清亮粘稠状。4、向管中加入200ul溶液B，充分颠倒混匀，如出现白色沉淀，可于75℃放置15-30min，沉淀即会消失，不影响后续实验。如果溶液未变清亮，说明样品消化不彻底，可能会导致DNA的提取量以及纯度降低，还可能堵塞吸附柱。5、向管中加入200ul无水乙醇，充分混匀，此时还可能会出现絮状沉淀，不影响DNA的提取，可将溶液和絮状沉淀都加入到吸附柱中，静置2min。6、12000rpm离心2min.弃废液，将吸附柱放入收集管中。7、向吸附柱中加入600ul漂洗液(使用前请先检查是否己加入无水乙醇)。12000rpm离心1min，弃废液，将吸附柱放入收集管中。8、向吸附柱中加入600ul漂洗液，12000rpm离心l min， 弃废液，将吸附柱放入收集管中。9、12000rpm离心2min，将吸附柱敞口置于室温或50℃温箱放置数分钟，目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除，否则漂洗液中的乙醇会影响后续实验如酶切、PCR等。10、将吸附柱放入一个干净的离心管中，向吸附膜中央悬空滴加50-200ul经65℃水浴预热的洗脱液，室温放置5min，12000rpm离心1min。11、离心所得洗脱液再加入吸附柱中，室温放置2min，12000rpm离心2 min，即可得到高质量的细菌基因组DNA。注意事项:1、样品应避免反复冻融，否则会导致提取的DNA片段较小且提取量下降。2、若试剂盒中的溶液出现沉淀，可在65℃水浴中重新溶解后再使用，不影响提取效果。3、如果实验中的离心步骤出现柱子堵塞的情况，可适当延长离心时间。4、洗脱缓冲液的体积最好不少于50ul，体积过小会影响回收效率；洗脱液的pH值对洗脱效率也有影响，若需要用水做洗脱液应保证其pH值在8.0左右(可用NaOH将水的pH值调至此范围)，pH值低于7. 0会降低洗脱效率。DNA产物应保存在-20℃，以防DNA降解。5、DNA浓度及纯度检测：得到的基因组DNA片段的大小与样品保存时间、操作过程中的剪切力等因素有关。 回收得到的DNA片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。DNA应在OD260处有显著吸收峰，OD260值为1.0相当于大约50μg/ml双链DNA、40μg/ml单链DNA。OD260/0D280比值应为1.7-1.9，如果洗脱时不使用洗脱缓冲液，而使用去离子水，比值会偏低，因为pH值和离子存在会影响光吸收值，但并不表示纯度低。

我正在准备制备细胞样品用于检测凋亡的DNAladder，不知道DNAladder的DNA提取与普通的DNA提取有无不同之处，可否用tripure或者一般的DNA提取试剂盒提取细胞的DNA用于凋亡的DNAladder检测吗？也就是可不可以不用专用的用于凋亡检测的DNAladder提取试剂盒？