DescriptionLeavesomefeedback! TestedandCertifiedforinvivoimaging(See"LuciferinFAQ"inadditionalinformation)Luciferinisacommonbioluminescentreporterusedforinvivoimagingoftheexpressionofluciferase.ThiswatersolublesubstrateforthefireflyluciferaseenzymeutilizesATPandMg2+ascofactorstoemitacharacteristicyellow-greenemissioninthepresenceofoxygen,whichshiftstoredlightinvivoat37°C.ThroughtheutilizationofATP,thereactioncanbefurtherusedtoindicatethepresenceofenergyorlifeinordertofunctionasalife-deathstain.Luciferinisacommonreagentusedthroughoutthebiotechnologyfieldandspecificallyforinvivoimaging.Luciferaselabeledtumorcells,stemcellsorinfectiousdiseasesareofteninoculatedintoresearchanimalssuchasratsormiceforinvestigation.Theinjectionofluciferinallowsforthereal-time,noninvasivemonitoringofdiseaseprogressionand/ordrugefficacyinthesemodelsystemsthroughBioluminescenceImaging(BLI).Luciferinisalsocommonlyusedforinvitroresearch,includingluciferaseandATPassays,genereporterassays,highthroughputsequencingandvariouscontaminationassays.FireflyLuciferinisidenticaltoBeetleLuciferin.(See"AdditionalInformation"forstructures.)ProductSpecifications:D-Luciferin,PotassiumSalt,4,5-Dihydro-2-(6-hydroxy-2-benzothiazolyl)-4-thiazolecarboxylicacidpotassiumsalt,MOLECULARBIOLOGYGRADE(PremiumPure)Formula:KC11H7N2O3S2MW:318.42g/molColor:LightyellowpowderPurity:>99%pure.(QualityverifiedbynineindependentcriteriaincludingHPLCandFTIR.)Storage/Handling:Storedesiccatedat-20°C.Protectfromlight.PubChemChemicalID:44134804
GoldBio活体成像技术：早在1999年由美国哈佛大学Weissleder博士率先提出了分子影像学(molecularimaging，MI)的概念，即应用影像学的方法对活体状态下的生物过程进行细胞和分子水平的定性和定量研究。活体成像便是基于分子影像学孕育而生的，通过这个成像系统，可以观测活体动物体内肿瘤的生长及转移，感染性疾病的发展进程，特定基因的表达等生物学过程。活体成像技术主要采用生物发光（bioluminescence）与荧光（fluorescence）两种技术。★生物发光是用荧光素酶基因标记细胞或DNA。★荧光技术则采用荧光报告基团（GFP、RFP,Cyt及dyes等）进行标记。★这一技术对肿瘤微小转移灶的检测灵敏度极高，不涉及放射性物质和方法,非常安全。操作极其简单、所得结果直观、灵敏度高。
活体成像两种检测技术介绍活体成像特点优点缺点生物发光检测bioluminescence★荧光素酶（Luciferase）对基因、细胞和活体动物进行标记；★荧光素酶催化底物（例如荧光素钾盐）反应后，会产生化学发光。这种光是由化学反应而来，不需要激发光；★标记方法是通过克隆技术，将荧光素酶的基因插入到预期观察的细胞染色体内，通过对克隆细胞进行筛选，培养出能稳定表达荧光素酶的细胞株。再将细胞株转移至特定的小鼠体内形成模型。★特异性强，无自发荧光；★高灵敏度，在体内可检测到几百个细胞，检测的深度在3-100px；★定量精确 ★信号较弱，检测时间较长；★仪器精密度要求较高；★细胞或基因需要转基因标记；★不可用于人体，不适用于抗体、多肽等标记荧光检测fluorescence★采用荧光报告基因(GFP、RFP等)或荧光染料进行标记；★需要外接激发光源，利用报告基因、荧光蛋白质或染料产生的荧光，就可以形成体内的生物光源。★荧光染料、蛋白标记能力强；★信号强，成像速度快，操作简便，实验成本较低；★未来可用于人；★适用范围广，可以是动物、细胞、微生物，也可以是抗体、药物、纳米材料等。★存在自发荧光，影响灵敏度；★光容易被动物组织吸收；★检测深度受限；★背景光干扰，定量准确度低
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Elisa生物试验是一种敏感性高,特异性强,重复性好的实验诊断方法。
但是在选择的时候,也需要注意其他的一些问题。
1、采用何种原料和抗体,是否高效、灵敏、特异
2、规范包被操作,吸附是否均匀
3、重复性、可靠性
6、是否提供技术服务
7、适用于血浆、血清、组织匀浆液、细胞培养上清液、尿液等多种类型的样本
8、可检测动物类型是否丰富
9、可检测指标是否齐全
elisa试剂盒 就查下博欧特生物
使用方法：
1、 血清：操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后，1000×g离心10分钟将血红细胞迅速小心地分离。
2、 血浆：EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。
3、 细胞上清液：1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4、 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。1000×g离心10分钟，取上清液。
5、 保存：如果样品不立即使用，应将其分成小部分-70℃保存，避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒，检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
目前，我用该蛋白的鼠源性单抗来包被ELISA板子，5%BSA37度封闭二小时后，洗涤四次后将板子分三个组加入抗原：其中一个组中加入的是我重组的蛋白，另一个组为用其它方法证实含该蛋白的人体内血清，最后一个组加入PBS。37度一小时后洗涤四次后每孔加入我制备的兔源性多抗。37度一小时洗涤六次后我再加入酶标记的抗兔的抗体37度40分钟后洗涤六次后TMB显色。
问题就在我显色后所有的孔都是阳性，其中以抗原为我的重组蛋白组与PBS组OD值最高，两组都可以达到1.8以上，而加入的抗原为人体血清组低，为0.6-1.0不等。
后面我优化条件，封闭液用过5%的脱脂奶粉，2%的BSA，包被的单抗浓度摸了梯度，加入的多抗也摸了梯度，酶标的抗体也摸了梯度。结果都没有改变，连趋势每次都是一样以重组蛋白组与PBS组OD最高。
今天我还试着把抗原换成其它蛋白也做出了强阳性？
请教各位高手，我的ELISA该如何往下面做了啊，是不是我的抗体本身有问题呢？
对了，我包被用的单抗是用GE公司的预装柱纯化的，很纯，在考染中是看不到一条杂带的。
第一，血清成分复杂，最好用密理博的Montage Albumin Deplete Kit去除血清里50%的白蛋白
第二，磷酸化蛋白提取蛋白的时候，最好加入原钒酸钠，和磷酸酶抑制剂，防止蛋白脱磷酸化。
第三，不要用牛奶做封闭剂，用BSA。因为牛奶中含有磷酸化酪蛋白，防止非特异带。
第四，如果条带杂带多，而且，条带弱，可以选择millipore的signal boost，增加条带特异性，而且，增强条带的亮度。
