描述
ThequbitRNAHSAssayKit,whenusedwiththeQubitFluorometer,providesanaccurateandselectivemethodforthequantitationoflow-abundanceRNAsamples.TheassayishighlyselectiveforRNAandwillnotquantitateDNA,protein,orfreenucleotides.Commoncontaminants,suchassalts,freenucleotides,solvents,detergents,orprotein,arewell-toleratedintheassay.TheassaykitisdesignedtobeaccurateforRNAsampleconcentrationsbetween250pg/µLand100ng/µL.Thekitprovidesconcentratedassayreagent,dilutionbuffer,andpre-dilutedRNAstandards.Simplydilutethereagentusingthebufferprovided,addyoursample(anyvolumebetween1µLand20µLisacceptable),andreadtheconcentrationusingtheQubitFluorometer.
WhichproducttochooseforRNAHS(HighSensitivity)quantitation?
•For1–20samples:usethisQubitRNAHSAssayKitwiththeQubitFluorometer
•For20–2000samples:usetheQuant-iTRNAHSAssayKitwithmicroplatereader
Notes:
1.AllQubitassaykitscanbeusedwiththeQubit1.0,Qubit2.0,Qubit3,andQubit4fluorometers.
2. 500µLthin-walledPCRtubes arerequiredbutnotincluded.
ForResearchUseOnly.Notforuseindiagnosticprocedures.
Invitrogen创立于1987年,公司总部设于加利福尼亚州卡尔斯巴德市。我们为制药和生物技术公司以及学术研究和政府科研机构提供生命科学相关产品与服务。2006年Invitrogen公司(纳斯达克股票代码IVGN),年营业额达12亿美元。作为一家全球性的跨国公司,Invitrogen现有员工4,800余名,在全球超过70个国家和地区设有分支机构。我们为全球的科研工作者提供25,000余种产品和服务,支持疾病研究、新药研发和商业性生物生产。Invitrogen中国总公司,凭借丰富经验,集中人力建立了提供合成,测序及其它多种项目服务的实验生产基地,是唯一一个在同行业中引进6西格码(SixSigma)和精益(Lean)管理方法的公司,公司由有着丰富管理经验的黑带大师(MasterBlackBelt)指导,根据数据来不断优化生产流程,降低成本,提高质量,以及提高发货速度.我们有一个强大的集研发和生产于一体的梯队,队员构成中有归国博士,硕士和本科生。另外我们Invitrogen的美国,欧洲,日本的梯队与我们紧密联系,资源共享,共同传递高质量的产品,提供更新更全更快的技术和服务.全面细致的标准操作程序,严格的入职前培训和在职培训。使我们的产品成为成为您的首选品牌.因此我们相信以Invitrogen在全球的合成与测序业务技术力量为后盾,在我们杰出的技术团队的带领下,将会为您提供高质量、全方位和多角度的服务。
Invitrogen旗下包括Invitrogen、Gibco、MolecularProbes、Dynal、Biosource、Caltag、Zymed、Panvera、InforMax、BioReliance等众多行业顶尖品牌。为分子生物、疾病研究,药物研发和生物制品生产等提供全面的技术和服务。
Invitrogen的壮大历程:
2005
Dynal细胞分离与纯化用磁珠、细胞刺激、蛋白质研究、核酸研究和微生物学
Zymed病理学、癌症和细胞生物产品,一般免疫化学试剂
BioAsia引物合成及测序,合并后的公司称为上海英骏生物技术有限公司
2004
DRIDNA纯化产品和其它核酸
Protometrix蛋白质微阵列技术
BioReliance合同服务机构(CSO)假设测试,为全球生物技术和制药公司提供生物药品开发和生产服务
2003
SequiturRNA干扰技术(RNAi)
MolecularProbes为生物研究和药品开发提供分子分类方面的荧光技术
GeniconSciences超敏感信号产生与探测工具和方法
2002
PanVera生物化学、细胞检验和蛋白质收集
InforMax生物信息软件
2000
LifeTechnologies分子生物和GIBCO细胞培养试剂
Ethrog电泳完全附着系统
ResearchGenetics为基因药品开发研究提供cDNA克隆
1999
NOVEX预制电泳胶
ebiomall.com
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2.加大辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素;
原理简介:
本试剂盒采用改进SDS-碱裂解法裂解细胞,离心吸附柱内的硅基质膜在高盐,低pH值状态下选择性地结合溶液中的质粒DNA,再通过去蛋白液和漂洗液将杂质和其它细菌成分去除,最后低盐,高pH值的洗脱缓冲液将纯净质粒DNA从硅基质膜上洗脱。
注意事项:
◆ 第一次使用时,将试剂盒所带全部的RNase A加入溶液P1后(终浓度100ug/ml)置于4℃保存。如果溶液P1中RNase A失活,提取的质粒可能会有混杂有微量RNA残留, 这时可在溶液P1中补加RNase A即可。
◆ 第一次使用前请先在15ml漂洗液WB中加入45ml无水乙醇,加入后请及时在方框打钩标记已加入乙醇,以免多次加入!
◆ 温度低时溶液P2中SDS可能会出现浑浊或者析出沉淀,可在37℃水浴加热几分钟,即可恢复澄清,不要剧烈摇晃,以免形成过量的泡沫。
◆ 避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化,各溶液使用后应及时盖紧盖子。
试剂盒特点:
◆ 产量高---一次提取高达30ug以上的质粒。
◆ 纯度高---OD260/OD280一般为1.80~1.85本试剂盒提取的质粒纯度好,能充分保证测序所需要的读长(用于ABI3730测序一般可达1000bp有效读长)。
◆ 快速,方便,不需要使用有毒的苯酚,氯仿等试剂,也不需要乙醇沉淀。
提示
BIOTEKE的质粒提取试剂盒既适用于革兰氏阴性菌中质粒的提取,同时也可从革兰氏阳性菌中提取质粒。由于革兰氏阳性菌外被一层较厚的细胞壁,会严重阻碍细菌细胞的裂解,因此必须在裂解细胞前破除,方法如下:
收集适量的菌体,加入250ul溶液P2,充分悬浮菌液,加入溶菌酶使其终浓度在10-20mg/ml左右在37℃处理30分钟左右。加入溶菌酶的浓度和处理的时间可根据不同的菌主和具体实验条件进行调整。
1、如果是提取的总蛋白,然后做WB,用β-actin或者GAPDH做内参肯定是没有问题的,这是公认的东西。
2、如果用膜蛋白提取试剂盒提取蛋白,再用β-actin作为内参似乎不妥,因为理论上来讲β-actin在膜上是不表达的。WB能做出β-actin来是因为膜蛋白提取时把胞质蛋白也提出来了。然而,如果我们试验目的是用药物处理细胞,比较处理前后某种膜蛋白的表达情况,此时用膜蛋白提取试剂盒提取膜蛋白后再用β-actin做内参似乎就不妥了,因为你根本不知道药物处理前后混杂了多少的胞质蛋白进来。如果没有胞质蛋白混进去的话,β-actin就是检测不到的。
3.逆转录:逆转录试剂盒(或者一步法试剂盒),这一步可以用普通PCR做,也可以用水域做。
4.荧光定量PCR试剂:通常有用SYBR Green Mix做的,但是这里建议你用EvaGreen做,灵敏度和平行性都要好于SYBR Green,并且如果你那是ABI或者Stratagene的PCR如果用SYBR Green还需要加一步Rox很麻烦。
5.其他:除了以上的那些还需要离心管、PCR管或板(Axygen反应比较好)、移液枪等,暂时就想到这么多。