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Addgene/pGP-AAV-syn-FLEX-jGCaMP7c variant 1513-WPRE/1unit/105322-AAV1
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| Item | Catalog # | Description | Quantity | Price (USD) | ||
|---|---|---|---|---|---|---|
| Plasmid | 105322 | Standard format: Plasmid sent in bacteria as agar stab | 1 | $75 | Add to Cart | |
| AAV1 | 105322-AAV1 | 100 µL at titer ≥ 7×10¹² vg/mLand Plasmid.More Information | Add to Cart | |||
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Backbone
- Vector backboneAAV-Syn-FLEX(Search Vector Database)
- Backbone manufacturerScott Sternson
- Backbone sizew/o insert(bp)4894
- Total vector size (bp)6247
- Vector typeMammalian Expression, AAV, Cre/Lox
Growth in Bacteria
- Bacterial Resistance(s)Ampicillin
- Growth Temperature30°C
- Growth Strain(s)NEB Stable
- Copy numberLow Copy
Gene/Insert
- Gene/Insert namejGCaMP7c variant 1513
- Alt nameGCaMP3-L59Q E60P T302L R303P M378G K379S D380Y T381R R392G T412N
- Alt nameGCaMP3 variant 1513
- Alt nameJanelia GCaMP7
- SpeciesR. norvegicus (rat), G. gallus (chicken); A. victoria (jellyfish)
- Insert Size (bp)1353
- PromoterSynapsin
- Tag/ Fusion Protein
- T7 epitope, Xpress tag, 6xHis
Cloning Information
- Cloning methodRestriction Enzyme
- 5′ cloning siteBsmBI(destroyed during cloning)
- 3′ cloning siteBsmBI(destroyed during cloning)
- 5′ sequencing primerACCACGCGAGGCGCGAGATAG (Common Sequencing Primers)
Resource Information
- Terms and Licenses
- UBMTA
- Ancillary Agreement for Plasmids Containing FP Materials
- genOway Notice of RIghts
- Industry Terms
- Not Available to Industry
Information for AAV1 (Catalog # 105322-AAV1)(Back to top)
Purpose
Ready-to-use AAV1 particles produced from pGP-AAV-syn-FLEX-jGCaMP7c variant 1513-WPRE (#105322). In addition to the viral particles, you will also receive purified pGP-AAV-syn-FLEX-jGCaMP7c variant 1513-WPRE plasmid DNA.
Synapsin-driven, Cre-dependent jGCaMP7c expression. jGCaMP7c exhibits high contrast between peak fluorescence and resting fluorescence.It is useful for activity imaging of large populations of densely-labeled neurons because background fluorescence from inactive neurons is reduced. These AAV preparations are suitable purity for injection into animals.Delivery
- Volume100 µL
- Titer≥ 7×10¹² vg/mL
- Pricing$350 USD for preparation of 100 µL virus + $30 USD for plasmid.
- StorageStore at -80℃. Thaw just before use and keep on ice.
- ShipmentViral particles are shipped frozen on dry ice. Plasmid DNA (≥ 200ng) will also be included in the shipment.
Viral Production & Use
- Packaging Plasmidsencode adenoviral helper sequences and AAV rep gene, AAV1 cap gene
- BufferPBS + 0.001% Pluronic F-68 + 200 mM NaCl
- SerotypeAAV1
- PurificationIodixanol gradient ultracentrifugation
Biosafety
Requestor is responsible for compliance withtheir institution"s biosafety regulations.Lentivirus is generally considered BSL-2. AAV isgenerally considered BSL-1, but may requireBSL-2 handling depending on the insert.Biosafety Guide
Resource Information
- Terms and Licenses
- Ancillary Agreement for Penn Vectors
- Terms of Use for Viral Vectors
- Industry Terms
- Not Available to Industry
Viral Quality Control
Quality Control:
- Addgene ensures high quality viral vectors by optimizing and standardizing production protocols and performing rigorous quality control (QC) (see a list of our QC assays). Thespecific QC assays performed varies for each viral lot. To learn which specific QC assays were performed on your lot, please contact us.
- Titer: the exact titer of your sample will be reported on the tube. The titer you see listed on this page is the guaranteed minimum titer. See how titers are measured.
Visit our viral production page for moreinformation.
Addgene Comments
Using FLEX vectors in vivo: LoxP sites in FLEX plasmids are known to recombine during DNA amplification and viral vector production, which may result in a minority of Cre-activated (i.e., "flipped") viral vectors. Addgene has measured this occurs in 0.01-0.03% of viral vectors in our typical production protocol. This can lead to a small number of cells exhibiting Cre-independent transgene expression in vivo. To address this, we recommend titrating to find the optimal AAV dosage required for Cre-dependent transgene expression and function in vivo. This may include reducing the viral vector dosage in order to reduce the likelihood of Cre-independent expression.
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蚂蚁淘（www.ebiomall.cn）是中国大陆目前唯一的生物医疗科研用品B2B跨境交易平台，
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2021-09-01
简单的样品制备，分析成本低 ViroCyt TM2100病毒计数仪采用通用的核酸和蛋白染料对病毒染色，整个分析过程耗费少，无需免疫法中昂贵的抗体费用，每个样品的分析成本是免疫法的1/1000。 ViroCyt TM2100病毒计数仪采用结合了靶标才产生荧光的混合染料对病毒衣壳蛋白和核酸分别染色分析，无需洗涤步骤消除游离的荧光染料，无背景信号的干扰，简化了样品的制备过程。 样品制 查看更多
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2021-09-14
深圳市新锐科技发展有限公司在发布的Auto HG-24 Plus全自动分散机_全自动均质器_全自动均质仪_全自动匀浆机供应信息，浏览与Auto HG-24 Plus全自动分散机_全自动均质器_全自动均质仪_全自动匀浆机相关的产品或在搜索更多与Auto HG-24 Plus全自动分散机_全自动均质器_全自动均质仪_全自动匀浆机相关的内容。 查看更多
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2021-07-31
对于上肢远端手术的臂丛神经阻滞可通过腋窝、锁骨下或锁骨上方法来实现。在表面成像技术、异感和神经刺激仪引导下，多次注射臂丛神经阻滞比单次阻滞更成功，起效更迅速。超声引导下周围神经阻滞要比成像技术和神经刺激仪的成功率更高。但腋窝、锁骨下或锁骨上这几种不同方法对臂丛神经阻滞是否有影响，相关报道较少。近期加拿大 Albrecht 教授等在 Anaesthesia 杂志 查看更多
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2021-08-29
北京胜达惠捷科技有限公司在发布的磁力搅拌器供应信息，浏览与磁力搅拌器相关的产品或在搜索更多与磁力搅拌器相关的内容。 查看更多
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2021-09-20
[db:简介] 查看更多
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2021-08-06
处理样品容量为250ml至数升(仪器处理量是根据选择的探头而定的)
集成温度控制器防止样品过热，监测并控制样品处理温度在1℃至100℃范围内
密封式变频器，隔离水汽、灰尘和腐蚀性气体
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2021-08-28
【使用手册】磁力搅拌器是用于液体混合的实验室仪器，主要用于搅拌或 查看更多
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2018-12-25
For amplification of cognate sequences from different organisms, or for "evolutionary PCR", one may increase the chances of getting product by designing 查看更多
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2021-07-28
非接触式超声波细胞粉碎机因其样品容器的构造像杯子所以也称为杯式全自动超声破碎仪，常用于无菌破碎，隔着离心管能打断染色体、破碎细胞。... 查看更多
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2017-12-04
巩义市予华仪器有限责任公司最新产品宣传文章《延长磁力搅拌器使用寿命，保养是关键！》。中国仪器网，致力打造仪器行业互动门户。 查看更多
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2021-08-22
超声波功率：250W
随机变幅杆 ：Φ6
破碎容量 ：20-200ml 查看更多
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如何选择高效多点磁力搅拌器 高效多点磁力搅拌器适用于搅拌或加热搅拌同时进行 查看更多
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商品咨询
超声波细胞破碎仪使用注意事项:新芝生物123
牛牛n7Q2021-08-06
进行活细胞植发技术前5天，不要使用阿司匹林药物，进行活细胞植发技术前要对身体进行检查，保证身体健康，精神正常，而且手术者要正确看待手术效果。女性在进行活细胞注射前要避开月经期，而且在手术前要洗澡，保持身体的清洁。在进行植发前要保证手术部位吴局部感染病灶。
超声波细胞破碎仪超声波萃取仪123
1075tcok2017-10-21
主要是功率大小不同，频率可能有些差别。
高通量组织研磨仪为何要将摇臂放置对称,其作用是什么？拓赫机电...123
此生可带TA13392017-10-21
起平衡作用 ，如果运转不平衡会造成传动轴的垂直轴向力，造成传动轴的磨损-米淇研磨专家
紫外可见分光光度计价格翱艺仪器(上海)有限公司123
学生艺苑2021-07-31
小弟想请问下诸位大神，超声破碎仪能够破坏肺组织匀浆中细胞的胞核么？如果可以，请提供转速及时间
磁力搅拌器品牌哪个好 123
qym012021-07-28
基本要求：1、精确控温常温～100度范围即可。有温度探头。
2、可以设置搅拌速度和温度，同时显示实际速度和产品温度。
3、温度控制精度正负1度左右。速度控制精度正负30转。
4、国产、进口都可以。
5、价格：1万以内。
希望大家给提供几个好品牌，谢谢大家！
2、可以设置搅拌速度和温度，同时显示实际速度和产品温度。
3、温度控制精度正负1度左右。速度控制精度正负30转。
4、国产、进口都可以。
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天根研磨器 电动组织研磨器 OSEY30 OSEY50 匀浆器123
cwj2011-10-21
组织活检标本，查到了天根的研磨器，价格也可以接受，不知有用过的没
http://www.tiangen.com/newEbiz1/EbizPortalFG/portal/html/Contact.html?GeneralContentShow_DocID=c373e9301df02f0e8ffb6a8ce2b41ad3
http://www.tiangen.com/newEbiz1/EbizPortalFG/portal/html/Contact.html?GeneralContentShow_DocID=c373e9301df02f0e8ffb6a8ce2b41ad3
均质器的三种分类介绍 上海秉越电子仪器有限公司123
妩媚在搞基4582021-08-16
随着生物医药、石油化工、食品工业等领域的发展，越来越多的运用到均质器。而实验仪器行业的发展，也为上述行业的实验室提供了多种多样不通功能的均质器。实验室常用的均质器的原理：将实验样本和溶液或溶剂混合均匀，达到实验所要求的标准溶液。
【求购】帮忙推荐震荡仪 实验室建设与采购讨论版论坛123
冰蝶2021-07-22
由于药物难溶，要购买震荡仪，请各位帮忙推荐
有多少种不同类型的震荡仪，型号是什么？
谢谢！
有多少种不同类型的震荡仪，型号是什么？
谢谢！
【恒温磁力搅拌器品牌】恒温磁力搅拌器什么牌子好_恒温磁力搅拌器...123
qiandandan812005-07-29
请教各位:我们实验室没有恒温磁力搅拌器,现在要购买,但我查了很多厂家和型号,用于搅拌这种黏度较大的东西的搅拌器转速都都最低100r/mim,但我需要的是速度在60-80r/min,请问你们都用什么型号的恒温搅拌器啊?
Guess Doodles 安卓下载 | 好玩安卓网123
xinancaoldh2021-07-31
我不下心把旋转蒸发仪的收集器的瓶口打碎了（只是一个小口）！我用粘玻璃的胶粘上了，可是现在有点漏气，液体总是蒸发不下来，郁闷！！
请问有什么方法可以不漏气呢？
谢谢大家！！
请问有什么方法可以不漏气呢？
谢谢大家！！
进口超声波破碎仪那个品牌比较好南京铭奥仪器设备有限公司123
luohanwen1232021-08-17
其实用国产的苏州索尼克超声科技的嘉音超声波细胞破碎仪JY-Y21S就行，何必用老外的，贵还不算，性能也并没有比嘉音牌的好。作为当代年轻人，我们绝不崇洋媚外，发展民族产业，强大中华才是硬道理。
88880018 赛默飞世尔Thermo LP涡旋振荡器123
ballance1﹟d弼2017-11-04
（一）辣根过氧化物酶标抗体制备技术编辑本段 辣根过氧化物酶（horseradish peroxidase，HRP）广泛分布于植物中，因辣根中含量最高而得名，由无色酶蛋白和深棕色铁卟啉（辅基）构成一种糖蛋白（含糖18%）。此酶溶于水和50%饱和度以下的硫酸铵溶液。
HRP分子量较小（40kDa），标记物容易穿透入细胞内部；作用底物为H2O2，以二氨基联苯胺（DAB）为供氢体的反应产物为不溶性的棕色吩嗪衍生物，可用普通光镜观察；在pH3.5～12范围内稳定，对热及有机溶剂的作用亦较稳定，能耐受63℃加热15min；用甲苯与石腊包埋切片处理或用纯乙醇及10%甲醛水溶液固定作冰切片均不影响其活性；溶解性好，100mL缓冲盐溶液中可溶解5gHRP，并可溶解于62%饱和度以下的硫酸铵溶液中，故常用硫酸铵分级沉淀法分离纯化；氰化物、硫化物、氟化物、及叠氮化物等对HRP的活性有抑制作用，应避免使用NaN3作为酶标试剂的防腐剂，以防止失活。
凡能在HRP和H2O2存在时被酶催化H2O2反应而和成有色产物的化合物（供氢体）都可以用显色剂。供氢体的产物分不溶性和可溶性两类。前者最常用的为3，3‘二氨基联苯胺(3,3’diaminobenzidine,DAB)，适用于免疫组化法；反应后的氧化型中间体迅速聚合，形成不溶性棕色吩嗪衍生物；这种多聚物还能还原和螯合四氧化饿，形成具有电子密度的产物，适用电镜检查；此外还有饱和联苯胺溶液，氧化后产物呈黄褐色，多用于酶免疫扩散的深沉线显色。后者最常用的为邻苯二胺(O-phenylene diamine,OPD)，产物橙色，可溶性、敏感性高，最大吸收值为490nm，可用肉眼判别；易被浓酸终止反应，颜色可数小时不变，是ELISA中最常用的一种；但对光敏感，使用时要避光，并发现有致癌作用。
用HRP标记抗体需借助交联剂的作用，将酶连接在抗体分子上。常用的交联剂为过碘酸钠和戊二醛(glutaraldehyde,CHO-(CH2)3-CHO)。1、改良过碘酸钠法 HRP分子中与酶活性无关的糖基被过碘酸钠氧化为醛基，再与抗体蛋白的氨基形成schiff碱。为了防止酶蛋白的氨基与醛基反应发生自身偶联，在标记前先用2，4-二硝基氟苯（DNFB）封闭酶蛋白中残存的α-和ε-氨基。酶与抗体的结合反应后，再加入硼氢化钠(NaHB4）还原成稳定的结合物。
[标记步骤]
（1）取5mg HRP溶于0.5mL蒸馏水，加入1%2，4而二硝基氟苯（DNFB）无水乙醇溶液0.1mL，室温（20℃±）下轻微搅拌作用1h。
（2）加入1mL 0.06mol/L NaIO4，室温下避光轻搅30min，溶液呈黄绿色。
（3）加入1mL0.16mol/L乙二醇，室温（20℃±）下轻搅作用1 h，终止氧化反应。
（4）加入5mg抗体（Ig），装入透析袋，置0.05mol/L，pH9.6碳酸盐缓冲液（无水碳酸钠1.5g，碳酸氢钠2.93g,蒸馏水加至1 000 mL）1 000 mL中，4℃透析过夜，更换3次。
（5）取出透析袋中液体（约3 mL），加入5mg/mLNaHB4 0.2 mL 4℃ 2h或过夜。
（6）加50%饱和硫酸铵（NH4）2SO4溶液（硫酸铵850g，蒸馏水加至1 000 mL，以30%氨水调pH7.2）6 mL沉淀结合物，置4℃30min后，3 000r/min离心30min，取深沉（SPA不需要进行此步）。
（7）将沉淀物溶于PBS（0.02M pH7.4）中，装入透析袋，并以此缓冲液透析平衡6-12h，换液3次。
（8）在结合物内加入BSA至蛋白浓度为10mg/ mL，或加等量60%甘油，测定工作效价后，小量分装（或冻干，不需加甘油），低温保存备用。2、戊二醛交联法 戊二醛是一种常用的同型双功能交联剂，通过它的两个醛基分别与HRP和抗体蛋白的氨基结合，形成HRP-戊二醛-Ab蛋白结合物。反应可在4-40℃温度范围，pH6.0～8.0 的缓冲溶液中进行，分为一步法和二步法，戊二醛一步法是将酶和待标记抗体混合，同时加入戊二醛进行交联反应。戊二醛二步法是将酶先与戊二醛作用，形成酶-戊二醛结合物，结过透析或层析除去未结合的戊二醛，然后再与抗体结合。
[标记步骤]
（1）取10mgHRP溶于0.2 mL1.25%戊二醛(用0.01mol/L、pH6.8PB将25%戊二醛稀释为1.25%)，室温（20℃左右）反应结合18h。
（2）用0.15mol/LNaCl平衡过的Sephadex G-50凝胶柱洗脱，除去游离的戊二醛，或用0.01mol/L，pH7.2PBS，4℃透析过夜。
（3）将5mg抗体IgG溶于1mL0.15mol/L NaCl，再与醛化HRP溶液（10mg/mL）混合。
（4）加入0.1mL 1mol/L pH9.6碳酸盐缓冲液（调节pH至9.0～9.6），4℃，电磁搅拌下结合24h。
（5）加入0.1mL0.2mol/L赖氨酸（0.29g溶于10mL蒸馏水），4℃放置2h，以封闭残留的醛基，终止反应。
（6）装入透析袋，以0.01mol/L、pH7.2 PBS，4℃透析过夜，或通过Sephadex G-200凝胶柱层析，用PBS洗脱，收集第1峰洗脱液，加入等量60%甘油，测工作效价后，小量分装，4℃或-20℃保存。（二）过氧化物酶编辑本段简介 抗过氧化物复合物制备技术
Stemberger(1970)等，首先报道了过氧化物酶-抗过氧化物酶复合物（peroxidase-antiperoxidase,PAP）法，此法也称为非标记抗体酶法（unlabelled antibody enzymemethod）。PAP法不需用任何化学交联剂处理酶和抗体，二者活性不受化学反应的影响，可大大提高免疫酶法的灵敏度。标记步骤 （1）取5mL抗HRP血清，16 000r/min 4℃离心20min，取上清液。
（2）加入1mL HRP(2mg/mL)溶液混匀，室温（20℃±）静置1h，16 000r/min，4℃离心20min，取沉淀物。
（3）加冷生理盐水反复洗涤-离心（16 000r/min，4℃离心20min）3次，弃上清，取沉淀物。
（4）加入过量HRP溶液4mL（2mg/mL）混匀后，移至小烧杯内。
（5）在pH计监控下，边搅拌边加入0.1及0.01mol/L HCl调至pH2.4左右，使沉淀完全溶解。
（6）立即加入0.01mol/LnaOH,调pH7.4，16 000r/min，4℃离心20min，取上清液。
（7）加入1/10体积的0.075mol/L醋酸钠和0.15mol/L醋酸铵的等量混合液后混匀。
（8）电磁搅拌下逐滴加入等量饱和硫酸铵溶液，并继续搅拌10min，4℃放置20min，16 000r/min，4℃离心20min，去上清，取深沉物。
（9）以50%饱和硫酸铵洗涤，4℃、16 000r/min×20min，离心2次，取深沉物。
（10）加5mL蒸馏水将深沉物溶解后装入透析袋，用Ph6.75醋酸盐缓冲液（13.5L生理盐水、1.5L蒸馏水、75mL 1.5mol/L醋酸钠及75mL粉酶3moL/L醋酸铵）4℃透析3d，每天换液2次。
（11）17 000r/min，4℃离心20min，取上清液进行工作效价鉴定。
（12）加等量60%甘油，小量分装，-20℃保存。（三）McAb-PAP制备技术编辑本段 用抗HRP McAb制备PAP复合物的工艺条件较为简便，而且不需严格的条件限制。用小鼠抗HRP McAb制备的腹水，按一定的HRP/IgG克分子比混和，置37℃水浴反应2h，即成鼠PAP复合物。以按HRP/IgG克分子比为4︰1制备为宜。（四）碱性磷酸酶标抗体制备技术编辑本段简介 碱性磷酸酶（alkaline phosphatase，AP），系小牛肠粘膜和大肠杆菌中提炼出来的一种磷酸酯的水解酶，由多个同功酶组成。从小牛肠粘膜提取的AP分子量为100kDa，酶作用的最适pH为9.6；从大肠杆菌中提取酶分子量为80kDa，最适pH为8.0。它的作用底物较多，常用的酶底物有对硝基本磷酸盐（PNP）、β-甘油磷酸钠、磷酸萘酯等。AP主要用作双标记染色，研究递质共存及酶名疫测定。AP标记抗体，一般采用戊二醛作交联剂一步法，使酶和抗体蛋白的氨基分别与戊二醛的两个醛基结合。标记步骤 （1）取抗体（2～5mg/mL）1mL，加入AP 5mg溶解。
（2）装入透析袋，用0.01mol/L、Ph7.2PBS4℃透析18h，换液3次。
（3）加入2.5%戊二醛20uL，室温（20℃±）放置2h。4℃0.01mol/L、pH7.2PBS透析过夜，换液3次。
（4）移入0.05mol/L、pH8.0Tris-HCl缓冲液中，4℃透析过夜，换液3次。
（5）取出标记抗体，用含%BSA和0.02%NaN3的Tris-HCl缓冲液稀释至4mL，即为酶标记物原液。
（6）加入1/3量纯甘油，测定工作效价后，小量（0.1mL）分装，4℃保存（使用前以pH7.4PBS-吐温溶液将结合物适当稀释）。（五）碱性磷酸酶编辑本段 -抗碱性磷酸酶复合物制备技术
Mason等（1978），用碱性磷酸酶代替过氧化物酶，建立了碱性磷酸酶-抗碱性磷酸酶复合物（APAAP）桥联酶标技术。但以AP作为抗原用常规免疫方法制备的抗血清，很难达到APAPP桥联酶标技术的质量要求，在一定程度上限制了此项技术的推广使用。杨志刚等（1989）利用抗AP的McAb建立了一种制备APAAP复合物的简便方法。只需将AP和抗AP的McAb以适当比例混合，4℃结合过夜即可使用。采用改良的ELISA方法检测APAAP复合中AP的最适含量。具体方法是：用羊抗鼠Ig包被微量滴定板；加入一定量的抗APMcAb；分别加入不同量的AP作用后经过洗涤；加底物显色，测定光密度值（OD）。在一定范围内，APAAP复合物溶液中AP含量增加的同时，相应的OD值也随之增大；当AP增加到一定量时（约6～8mg/mL）、OD值保持稳定。展开
HRP分子量较小（40kDa），标记物容易穿透入细胞内部；作用底物为H2O2，以二氨基联苯胺（DAB）为供氢体的反应产物为不溶性的棕色吩嗪衍生物，可用普通光镜观察；在pH3.5～12范围内稳定，对热及有机溶剂的作用亦较稳定，能耐受63℃加热15min；用甲苯与石腊包埋切片处理或用纯乙醇及10%甲醛水溶液固定作冰切片均不影响其活性；溶解性好，100mL缓冲盐溶液中可溶解5gHRP，并可溶解于62%饱和度以下的硫酸铵溶液中，故常用硫酸铵分级沉淀法分离纯化；氰化物、硫化物、氟化物、及叠氮化物等对HRP的活性有抑制作用，应避免使用NaN3作为酶标试剂的防腐剂，以防止失活。
凡能在HRP和H2O2存在时被酶催化H2O2反应而和成有色产物的化合物（供氢体）都可以用显色剂。供氢体的产物分不溶性和可溶性两类。前者最常用的为3，3‘二氨基联苯胺(3,3’diaminobenzidine,DAB)，适用于免疫组化法；反应后的氧化型中间体迅速聚合，形成不溶性棕色吩嗪衍生物；这种多聚物还能还原和螯合四氧化饿，形成具有电子密度的产物，适用电镜检查；此外还有饱和联苯胺溶液，氧化后产物呈黄褐色，多用于酶免疫扩散的深沉线显色。后者最常用的为邻苯二胺(O-phenylene diamine,OPD)，产物橙色，可溶性、敏感性高，最大吸收值为490nm，可用肉眼判别；易被浓酸终止反应，颜色可数小时不变，是ELISA中最常用的一种；但对光敏感，使用时要避光，并发现有致癌作用。
用HRP标记抗体需借助交联剂的作用，将酶连接在抗体分子上。常用的交联剂为过碘酸钠和戊二醛(glutaraldehyde,CHO-(CH2)3-CHO)。1、改良过碘酸钠法 HRP分子中与酶活性无关的糖基被过碘酸钠氧化为醛基，再与抗体蛋白的氨基形成schiff碱。为了防止酶蛋白的氨基与醛基反应发生自身偶联，在标记前先用2，4-二硝基氟苯（DNFB）封闭酶蛋白中残存的α-和ε-氨基。酶与抗体的结合反应后，再加入硼氢化钠(NaHB4）还原成稳定的结合物。
[标记步骤]
（1）取5mg HRP溶于0.5mL蒸馏水，加入1%2，4而二硝基氟苯（DNFB）无水乙醇溶液0.1mL，室温（20℃±）下轻微搅拌作用1h。
（2）加入1mL 0.06mol/L NaIO4，室温下避光轻搅30min，溶液呈黄绿色。
（3）加入1mL0.16mol/L乙二醇，室温（20℃±）下轻搅作用1 h，终止氧化反应。
（4）加入5mg抗体（Ig），装入透析袋，置0.05mol/L，pH9.6碳酸盐缓冲液（无水碳酸钠1.5g，碳酸氢钠2.93g,蒸馏水加至1 000 mL）1 000 mL中，4℃透析过夜，更换3次。
（5）取出透析袋中液体（约3 mL），加入5mg/mLNaHB4 0.2 mL 4℃ 2h或过夜。
（6）加50%饱和硫酸铵（NH4）2SO4溶液（硫酸铵850g，蒸馏水加至1 000 mL，以30%氨水调pH7.2）6 mL沉淀结合物，置4℃30min后，3 000r/min离心30min，取深沉（SPA不需要进行此步）。
（7）将沉淀物溶于PBS（0.02M pH7.4）中，装入透析袋，并以此缓冲液透析平衡6-12h，换液3次。
（8）在结合物内加入BSA至蛋白浓度为10mg/ mL，或加等量60%甘油，测定工作效价后，小量分装（或冻干，不需加甘油），低温保存备用。2、戊二醛交联法 戊二醛是一种常用的同型双功能交联剂，通过它的两个醛基分别与HRP和抗体蛋白的氨基结合，形成HRP-戊二醛-Ab蛋白结合物。反应可在4-40℃温度范围，pH6.0～8.0 的缓冲溶液中进行，分为一步法和二步法，戊二醛一步法是将酶和待标记抗体混合，同时加入戊二醛进行交联反应。戊二醛二步法是将酶先与戊二醛作用，形成酶-戊二醛结合物，结过透析或层析除去未结合的戊二醛，然后再与抗体结合。
[标记步骤]
（1）取10mgHRP溶于0.2 mL1.25%戊二醛(用0.01mol/L、pH6.8PB将25%戊二醛稀释为1.25%)，室温（20℃左右）反应结合18h。
（2）用0.15mol/LNaCl平衡过的Sephadex G-50凝胶柱洗脱，除去游离的戊二醛，或用0.01mol/L，pH7.2PBS，4℃透析过夜。
（3）将5mg抗体IgG溶于1mL0.15mol/L NaCl，再与醛化HRP溶液（10mg/mL）混合。
（4）加入0.1mL 1mol/L pH9.6碳酸盐缓冲液（调节pH至9.0～9.6），4℃，电磁搅拌下结合24h。
（5）加入0.1mL0.2mol/L赖氨酸（0.29g溶于10mL蒸馏水），4℃放置2h，以封闭残留的醛基，终止反应。
（6）装入透析袋，以0.01mol/L、pH7.2 PBS，4℃透析过夜，或通过Sephadex G-200凝胶柱层析，用PBS洗脱，收集第1峰洗脱液，加入等量60%甘油，测工作效价后，小量分装，4℃或-20℃保存。（二）过氧化物酶编辑本段简介 抗过氧化物复合物制备技术
Stemberger(1970)等，首先报道了过氧化物酶-抗过氧化物酶复合物（peroxidase-antiperoxidase,PAP）法，此法也称为非标记抗体酶法（unlabelled antibody enzymemethod）。PAP法不需用任何化学交联剂处理酶和抗体，二者活性不受化学反应的影响，可大大提高免疫酶法的灵敏度。标记步骤 （1）取5mL抗HRP血清，16 000r/min 4℃离心20min，取上清液。
（2）加入1mL HRP(2mg/mL)溶液混匀，室温（20℃±）静置1h，16 000r/min，4℃离心20min，取沉淀物。
（3）加冷生理盐水反复洗涤-离心（16 000r/min，4℃离心20min）3次，弃上清，取沉淀物。
（4）加入过量HRP溶液4mL（2mg/mL）混匀后，移至小烧杯内。
（5）在pH计监控下，边搅拌边加入0.1及0.01mol/L HCl调至pH2.4左右，使沉淀完全溶解。
（6）立即加入0.01mol/LnaOH,调pH7.4，16 000r/min，4℃离心20min，取上清液。
（7）加入1/10体积的0.075mol/L醋酸钠和0.15mol/L醋酸铵的等量混合液后混匀。
（8）电磁搅拌下逐滴加入等量饱和硫酸铵溶液，并继续搅拌10min，4℃放置20min，16 000r/min，4℃离心20min，去上清，取深沉物。
（9）以50%饱和硫酸铵洗涤，4℃、16 000r/min×20min，离心2次，取深沉物。
（10）加5mL蒸馏水将深沉物溶解后装入透析袋，用Ph6.75醋酸盐缓冲液（13.5L生理盐水、1.5L蒸馏水、75mL 1.5mol/L醋酸钠及75mL粉酶3moL/L醋酸铵）4℃透析3d，每天换液2次。
（11）17 000r/min，4℃离心20min，取上清液进行工作效价鉴定。
（12）加等量60%甘油，小量分装，-20℃保存。（三）McAb-PAP制备技术编辑本段 用抗HRP McAb制备PAP复合物的工艺条件较为简便，而且不需严格的条件限制。用小鼠抗HRP McAb制备的腹水，按一定的HRP/IgG克分子比混和，置37℃水浴反应2h，即成鼠PAP复合物。以按HRP/IgG克分子比为4︰1制备为宜。（四）碱性磷酸酶标抗体制备技术编辑本段简介 碱性磷酸酶（alkaline phosphatase，AP），系小牛肠粘膜和大肠杆菌中提炼出来的一种磷酸酯的水解酶，由多个同功酶组成。从小牛肠粘膜提取的AP分子量为100kDa，酶作用的最适pH为9.6；从大肠杆菌中提取酶分子量为80kDa，最适pH为8.0。它的作用底物较多，常用的酶底物有对硝基本磷酸盐（PNP）、β-甘油磷酸钠、磷酸萘酯等。AP主要用作双标记染色，研究递质共存及酶名疫测定。AP标记抗体，一般采用戊二醛作交联剂一步法，使酶和抗体蛋白的氨基分别与戊二醛的两个醛基结合。标记步骤 （1）取抗体（2～5mg/mL）1mL，加入AP 5mg溶解。
（2）装入透析袋，用0.01mol/L、Ph7.2PBS4℃透析18h，换液3次。
（3）加入2.5%戊二醛20uL，室温（20℃±）放置2h。4℃0.01mol/L、pH7.2PBS透析过夜，换液3次。
（4）移入0.05mol/L、pH8.0Tris-HCl缓冲液中，4℃透析过夜，换液3次。
（5）取出标记抗体，用含%BSA和0.02%NaN3的Tris-HCl缓冲液稀释至4mL，即为酶标记物原液。
（6）加入1/3量纯甘油，测定工作效价后，小量（0.1mL）分装，4℃保存（使用前以pH7.4PBS-吐温溶液将结合物适当稀释）。（五）碱性磷酸酶编辑本段 -抗碱性磷酸酶复合物制备技术
Mason等（1978），用碱性磷酸酶代替过氧化物酶，建立了碱性磷酸酶-抗碱性磷酸酶复合物（APAAP）桥联酶标技术。但以AP作为抗原用常规免疫方法制备的抗血清，很难达到APAPP桥联酶标技术的质量要求，在一定程度上限制了此项技术的推广使用。杨志刚等（1989）利用抗AP的McAb建立了一种制备APAAP复合物的简便方法。只需将AP和抗AP的McAb以适当比例混合，4℃结合过夜即可使用。采用改良的ELISA方法检测APAAP复合中AP的最适含量。具体方法是：用羊抗鼠Ig包被微量滴定板；加入一定量的抗APMcAb；分别加入不同量的AP作用后经过洗涤；加底物显色，测定光密度值（OD）。在一定范围内，APAAP复合物溶液中AP含量增加的同时，相应的OD值也随之增大；当AP增加到一定量时（约6～8mg/mL）、OD值保持稳定。展开
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