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separopore/Cobalt-Chelated Separopore® 4B-CL/50 mL/20181047-3_蚂蚁淘,【正品极速】生物医学科研用品轻松购|ebiomall 蚂蚁淘商城
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Cobalt-Chelated Separopore® 4B-CL

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美国著名BTX是专业的细胞融合、电穿孔仪的生产厂家。ECM系列产品在转基因的应用领域中得以广泛的应用,其无以伦比的高性能得到了全球同行的厚爱。BTX的系列产品适用于动植物、xi菌、酵母、哺乳动物、人类细胞(包括活体细胞)的转基因等操作,操作方法可参照相关文献,及向厂商索要。ECM630型是多才多艺型细胞转基因仪,适应于各类细胞 应用举例:10-500V电压:适用于哺乳动物细胞,植物细胞50-2500V电压:适用于xi菌、酵母各种型号, 查看更多>
中招国际招标有限公司受中国医学科学院北京协和医院委托,根据《中华人民共和国政府采购法》等有关规定,现对中国医学科学院北京协和医院手术显微镜和小鼠电生理仪、光学生物测量仪、超声乳化仪项目进行公开招标,欢迎合格的供应商前来投标。项目名称:中国医学科学院北京协和医院手术显微镜和小鼠电生理仪、光学生物测量仪、超声乳化仪项目项目编号:TC19035MN/01/02/03项目联系方式:项目联系人:罗会京、 查看更多>
wshtbioPAGE配胶的试剂和配方比例对电泳结果的质量当然有决定性的影响,这个配胶的比例,在《分子克隆》上有详细的论述,相信大家都不难查到。容易忽视的问题主要在于过硫酸铵(AP)一定要新鲜——最好用小指管配AP(写日期)保存在-20度,超过2周的AP扔掉算了,或者已经反复打开使用多次的AP都别用,小气病发作的后果往往是得不偿失——胶凝不好多半是这里疏忽(或者混合不匀),因为相对配胶的其... 查看更多>
什么是 CRISPR?CRISPR(Clustered regularly interspaced short palindromic repeats), 是细菌中用于与病毒进行斗争的免疫武器。 生命进化历史上,细菌为了将病毒的外来入侵基因清除,进化出 CRISPR 系统,利用这个系统,细菌可以不动声色地把病毒基因从自己的染色体上切除,这是细菌特有的免疫系统。这种切除功能其中比较典型的模式是依靠一个复合物,该复合物能在一段 RNA 指导下,定向寻找目标 DNA 序列 ... 查看更多>
大肠杆菌转化实验的相关实验步骤、实验技巧、实验protocol、实验经验及常见问题。大肠杆菌转化可以:(1)将重组DNA分子导入大肠杆菌受体细胞进行复制,增殖和表达,以获得目的基因;(2)验证大肠杆菌感受态细胞效果;(3... 查看更多>
For amplification of cognate sequences from different organisms, or for "evolutionary PCR", one may increase the chances of getting product by designing 查看更多>
上海启文生物科技有限公司在发布的BTX Agile Pulse MAX大容量电穿孔仪供应信息,浏览与BTX Agile Pulse MAX大容量电穿孔仪相关的产品或在搜索更多与BTX Agile Pulse MAX大容量电穿孔仪相关的内容。 查看更多>
美国Sutter仪器公司指定和授权成都泰盟软件有限公司,在中国市场隆重推出新一代膜片钳放大器IPA (Integrated Patch Clamp Amplifier)。为了使实验人员能充分掌握这套先进膜片钳放大器及其软件的使用,加快中国在该领域与国际接轨的速度,提高膜片钳技术在我国生物医学研究中水平,并熟练地用好相关配套仪器,如微操纵器和电极拉置仪等,我们将于2017年8月26—27日在武汉举办膜片钳电生理技术培训班。一、主办单位... 查看更多>
高通量全自动膜片钳是由普升科技有限公司代理或销售的SyncroPatch384PE品牌的仪器,产品来源于德国。普升科技有限公司是中国最权威的高通量全自动膜片钳销售服务商之一,在0等地方销售高通量全自动膜片钳已经多年。同时,生物在线为您提供众多企业高通量全自动膜片钳仪器产品及图片,以便挑选到性价比高,合适的高通量全自动膜片钳产品 查看更多>
伯乐生命医学产品(上海)有限公司 Bio-Rad Laboratories在发布的MicroPulser™ 电穿孔仪供应信息,浏览与MicroPulser™ 电穿孔仪相关的产品或在搜索更多与MicroPulser™ 电穿孔仪相关的内容。 查看更多>
Port-a-Patch全自动膜片钳系统是由北京安麦格贸易有限公司代理或销售的Nanion品牌的仪器,产品来源于德国。北京安麦格贸易有限公司是中国最权威的Port-a-Patch全自动膜片钳系统销售服务商之一,在北京等地方销售Port-a-Patch全自动膜片钳系统已经多年。同时,生物在线为您提供众多企业Port-a-Patch全自动膜片钳系统仪器产品及图片,以便挑选到性价比高,合适的Port-a-Patch全自动膜片钳系统产品 查看更多>
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膜片钳123
chliang20062021-08-13
做了个膜片钳的PPT,其中部分内容转自网上,部分内容偷自老师,见谅,传上来供大家拍砖,另外,恳请版主能赏给一分,无分寸步难行啊

膜片钳基础.pptx(11746.01k)
短路了就不会有电压了吧 不过应该是仪器出问题了 你设恒定电流看看呗
电生理常规技术 电生理常规技术 一.电刺激。 二.生物放大器:正确选择,植物性神经冲动幅度多为50-100μV。不同组织,应采用不同的参 数。如 ECG:振幅0.1-2mV, 灵敏度0.5-1mV,时间常数0.1-1.0s,高频滤波1KHz 植物性神经冲动:振幅50-150μV, 灵敏度25-100μV,时间常数0.01-0.1s,高频滤波3-5KHz 中枢神经元单位放电:振幅100-300μV, 灵敏度50-100μV,时间常数0.01-0.1s,高频滤波5-10KHz 三.玻璃微电极: 常用尖端0.5-5μm,向细胞内插入时,需小于0.5μm(细胞直径的1/10~1/100),且尖端的倾斜度应相当缓和,一般微电极可分为金属微电极和玻璃微电极两类。 金属微电极,现多用镀铂钨丝电极(platinum-plated tungsten electrode),在钨丝上镀铂,可极大改善电极的电学特性,噪声可大大降低,加之机械强度大,适合长期体外记录(paré D, Gaudreau H. Projection cells and interneurons of the lateral and basolateral amygdala: distinct firing patterns and differential relation to the thera and delta rhythms in conscious cats. J Neursci, 1996,16(10):3334-3350 现要也常用镀银碳纤维电极。玻璃微电极记录易受机械位移的影响,加之尖端的电解质会漏出或堵塞,不适合半小时以上的长时间记录,玻璃微电极可分单管和多管微电极。 毛坯管在国外多用Pyrex管,国内多用GG-17和95料玻管。细胞外记录多采用外径1.5-2mm玻璃,细胞内记录则采用外径1mm细玻管,内外径之比约为2:3或5:6,长6-8cm。拉制前必须经过清洁处理。 清洁液:用等量的(250ml)王水(可反复应用)。一般毛坯管捆成把放入清洁液中1-2h,取出自来水冲洗20-30min,再放入无水酒精中洗 涤,再放入盛满蒸馏水烧杯中加热煮沸10min,倒去蒸馏水,再换新蒸馏水反复3次,再放入烤箱中烤干,备用,切不可用市售的洗涤剂,以防降低电极充灌液的表面张力而影响冲灌。 充灌液常用3mol/L KCl,为避免Cl-扩散,也可用2mol/L醋酸钾或柠檬酸钾充灌,也有人用0.5-1mol/L NaCl(低浓度)充灌可降低噪音。细胞外记录时,最后再用3-4mol/L NaCl +2%旁胺天蓝溶液定位。在膜片钳中还常加钙螯合剂,如EGTA。 阻抗与不同组织相关。 四.电生理实验中噪声和干扰的形成和排除。 (一)来源。 1.干扰信号与生物电生理信号的鉴别。准确区分生物电信号与干扰的伪迹是电生理实验的先决条件。 2.来源。主要有三个方面: 其一。物理性干扰。1)静电和电磁的干扰:实验室附近高压电,室内日光灯可产生50Hz的静电干扰,尤其是交流电,尤其是50Hz频率干扰最大(电子设备为50Hz)。其特点是幅度大,波形规则。2)噪声干扰:电子元件本身产生杂乱无章电压和电流称噪声,一般与放大器内部元件的质量与性能有关。 其二。接地不良。1)地线电阻应小。2)仪器故障。产生漏电电流,在地线上形成电位差,产生干扰。3)地线行走过程中打圈,形成线圈,易接受电场和磁场的干扰。4)各仪器设备应采用一点接地的方式,若采用多点接地,形成大地回路,也会引起干扰。5)地线过长与电源线形成交流环路。6)误用市电三孔中性线作为大地线(中性线上有4-5A电流)。 其三。生理性干扰。1)大脑电活动时,眨眼、眼球运动均对脑电具有干扰作用。2)实验中环境温度过低,动物寒战、抖动,引起肌电的发放而干扰记录,或因呼吸运动引起记录部位机械位移引起干扰信号。3)心电干扰,频率与心电一致。 (二)排除。 1.物理性干扰。1)屏蔽法:用于低频电和静电干扰,屏蔽线分布电容较大,线与线之间不可平行排列,更不可为了美观而将多线扎在一起,这会加大分布电容,易偶合高频干扰噪声。2)远离法。3)改变位置法。依电流方向相反,产生反向磁场的原理,改变各个仪器的位置或放大器输入的方位,会使干扰磁场抵消,微电极放大器探头阻抗高,易引入干扰,实验前可反复调整其方向和位置。4)微电极记录时尽量减少微电极本身的阻抗,减少输入阻抗及干扰信号在这个阻抗上形成干扰电压降,微电极到探头的连线<5cm。5)用监听器监听噪声,以便及时排除。 2.仪器质量,尽量改进。 3.接地不良。地线应尽量短粗,不能与电源线平行或打圈,不 要接在电源线的中性线 上,地线单独埋设,埋置处应较潮湿,附近无大型变压电动机,并在坑内加些食盐。 4.检查各仪器 是否漏电。 5.慢生物电变化时用乏极化电极,实验对象宜安静,勿受振动。 (三)刺激伪迹过大及防止。1)尽量减少刺激脉冲的波宽和强度。2)在动物体或标本上,尽量延长刺激部位 的距离,在刺激电极 和引导电极之间加一接地电极,此电极离引导电极愈近,刺激伪迹就越小;采用变换刺激极性,结合叠加处理,可抵消伪迹。 注:微电极中高浓度充灌液易蒸发,造成电极回路的开路,因此常在微电极插入Ag-AgCl丝或铂金丝后,在微电极尾部开口处涂上一层凡士林,防止水分蒸发。 动物麻醉和制动下,体温会下降,故应保温调节,加温维持肛温36-38℃. 记录脊髓背角或腹角神经元将脊柱前后拉直以减小呼吸运动造成的位移。记录脑神经元应在表面用温热石蜡制成一油槽,防止血管博动和呼吸运动的影响。 五.细胞内微电极记录 多用幼年离体标本,其原因:1)幼年动物骨骼骨化不完全,结缔组织少,神经组织易于分离,标本耐缺氧能力强,有的标本可存活数小时至数天,但标本也可能发育不完全,如背根和脑干到脊髓的投射纤维要到三周动物才完全。神经纤维髓鞘化不全,其药理作用与成年动物也不同。从实验角度上讲,脊髓背腹根短,不利于电生理刺激记录。小鼠一般应小于15g,制备标本才 有可能成功,而这样小鼠背腹根神经节不利于电生理实验。最适合的动物是金黄地鼠(hamster),介于大小鼠之间,制备标本活性很好,可能与其冬眠习性有关,而且其脊髓背腹根长达20-25mm,利于电生理记录。动物选择仍依实验而定,同一标本,不同中枢结构对缺氧耐受力也不同。金黄地鼠,若观察脊髓背角神经元活动,可用150-160g体重的鼠均可,但要研究腹角神经元,则体重不宜超过30g。 离体标本的灌流注,如ACSF。其中缓冲液成分有两种,一是重碳酸盐(bicarbonate):温度低(4℃),配方有利于降低组织兴奋性。二是磷酸盐缓冲液和HEPES缓冲液:其优点是接近于 人体环境。各种缓冲液一般都先配母液,临用前一天,或临用前稀释。
膜片钳技术被称为研究离子通道的“金标准”。是研究离子通道的最重要的技术。目前膜片钳技术已从常规膜片钳技术(Conventional patch clamp technique)发展到全自动膜片钳技术(Automated patch clamp technique)。
传统膜片钳技术每次只能记录一个细胞(或一对细胞),对实验人员来说是一项耗时耗力的工作,它不适合在物开发初期和中期进行大量化合物的筛选,也不适合需要记录大量细胞的基础实验研究。全自动膜片钳技术的出现在很大程度上解决了这些问题,它不仅通量高[3] ,一次能记录几个甚至几十个细胞,而且从找细胞、形成封接、破膜等整个实验操作实现了自动化,免除了这些操作的复杂与困难。这两个优点使得膜片钳技术的工作效率大大提高了!签于全自动膜片钳技术的这些优点,目前已经广泛的用于物筛选。
膜片钳技术概述123
秋雨飒2882021-08-08
膜片钳技术 是用微玻管电极(膜片电极或膜片吸管)接触细胞膜,以千兆欧姆以上的阻抗使之封接,使与电极尖开口处相接的细胞膜的小区域(膜片)与其周围在电学上分隔,在此基础上固定点位,对此膜片上的离子通道的离子电流(pA级)进行监测记录的方法
用场效应管运算放大器构成的I-V转换器是测量回路的核心部分。在场效应管运算放大器的正负输入端子为等电位,向正输入端子施加指令电位时,由于短路负端子以及膜片都可等电位地达到钳制的目的,当膜片微电极尖端与默片之间形成10GΩ以上封接时,其间的分流电流达到最小,横跨膜片的电流可100%作为来自膜片电极的记录电流(lp)而被测量出来。
这一伟大的贡献,使Neher和Sakmann获得1991年度的诺贝尔生理学与医学奖。

我用Bio-rda转膜仪,转膜2分钟就停止,然后机器上显示“noloaddetected“。各位知道这是为什么吗??

第一次出现这种情况,同样的条件,之前一直没有问题。

原代培养心肌细胞作为一种主要的研究模型,被广泛应用于心血管研究之中.我们实验室经过长期尝试,摸索出了一些行之有效的方法,并积累了一些经验,现总结如下:

1新生大鼠鼠龄的选择新生大鼠心肌细胞在出生后3 d内具有部分的增殖能力,成年大鼠心肌细胞则为终末分化细胞,不再具有分裂增殖能力.因此,大鼠出生时间越短,其心肌细胞分离后成活率越高,越容易贴壁生长.大量观测表明,选择1~3 d龄大鼠分离其心肌细胞进行原代培养较为理想.其中尤以半日龄大鼠心肌细胞培养效果最佳.

2消化酶的选择及使用
新生大鼠心肌细胞的分离可采用组织块法和消化法,前者因不易获得密度均一的细胞且难控制成纤维细胞的生长而较少采用.消化法中常使用的酶有3种:胰蛋白酶、胶原酶I或Ⅱ以及透明质酸酶.透明质酸酶多与胰蛋白酶或胶原酶联合应用.胰蛋白酶作用较强,容易造成心肌细胞损坏.胶原酶作用较缓和,能消化细胞间质中的胶原纤维以释放细胞,对细胞损伤小,且在新生大鼠心肌组织,以胶原I为主,故我们选用胶原酶I.文献报道胶原酶的工作浓度一般在0.6~1 g?L1,我们使用的为0.8 g?L1.胶原酶最好现用现配.

3消化程度的把握
新生大鼠心肌细胞对酶消化极为敏感.消化过度可使肌原纤维出现萎缩,细胞死亡率增加或丧失贴壁能力及搏动能力;消化不足,细胞聚集成团,无法分清细胞边界,难以形态学观测.消化过程中使用磁力搅拌器时应注意1)转速一般控制在60~80 r?min1左右.(2)每次消化的时间须结合消化酶浓度确定.(3)将粘附在搅拌子上的心肌组织吹散,使酶液充分接触组织.(4)适宜温度为35~37℃.(5)当组织由红转白呈半透明状态时,应停止消化.

4接种的细胞密度
心肌细胞接种密度不仅影响细胞间的相互接触,进而影响细胞对肥大刺激的反应,而且影响长期培养细胞的成活率.接种细胞的绝对数量应经精确计算.一般而言,应根据实验的观测目的决定单位面积上的细胞数量.例如,如作形态学观测,六孔板中每孔的接种细胞数量应控制在1×105~2×105个;若需收获心肌细胞作mRNA或蛋白表达水平的观测,则每孔的接种密度可增加到5×105~6×105个.
1)细胞吸附式膜片(cell attached patch)是膜片钳的基本方式,其它方式由此衍生。这种膜片形式比较稳定,因细胞骨架及有关代谢过程是完整的,故对细胞结构和环境干扰最小。但这种膜片形式易在电极尖端形成囊泡,从而细胞骨架可能有所变化。另外这种膜片不能控制细胞内成分。且任何影响膜电位的处理均可影响其电位水平。
2)内面向外式膜片( inside outpatch)细胞内外和电极内的溶液均可调控,既能较容易地改变细胞内的离子或物质浓度,又能把酶等直接加于膜的内侧面,适宜研究胞内物质对通道活动的影响。但实验中难以改变膜外侧物质,且需浸于低钙液中。常用于研究依赖细胞内钙的离子通道,如钙敏感的钾通道,还可用于细胞内激素和第二信使与通道的调节作用。
3) 外面向外式膜片(outside outpatch)能接触膜的两侧,可以任意改变膜外物质的浓度,有利于研究离子、递质对膜外表面的作用,多用于研究细胞膜外侧受体控制的离子通道。这些受体直接作用于离子通道,而不需经过第二信使系统。因细胞外液容易更换,故加药方便。缺陷是实验中难以改变胞内成分,而且电极管内必须充以低钙液。
4) 全细胞式膜片(whole cell patch)方式使细胞内与浴槽之间的漏流极少。电极本身阻抗(1~10MΩ)与细胞封接后的阻抗相比较低,这种低接触阻抗使单管电压钳容易实现。电极管内与细胞之间弥散交换与平衡快,因而容易控制细胞内液的成分。细胞钳记录的是许多通道的平均电流,有利于综合分析。如果有目的地将膜电位钳制在某一程度,可做到选择性抑制某些通道的活性而只记录某种通道电流的总和,并可在同一细胞上观察几种不同通道的情况。通过改变内部介质,如改变电极液成分,或在电极液中加入所需药物,通过渗透很快改变胞浆成分并达到平衡,该手段在全细胞记录中广泛应用。它适合于小细胞的电压钳位,对于直径大于30μm的细胞很难实现钳位。不足之处是由于电极与细胞间交换快,细胞内环境很容易破坏,因此记录所用的电极液应与胞浆主要成分相同,如高K+,低Na+和Ca2+及一定的缓冲成分和能量代谢所需的物质。
5) 穿孔膜片(perforated patch)是为克服常规全细胞模式的胞质渗漏问题,有学者将与离子亲和的制霉菌素或二性霉素B经微电极灌流到含有类甾醇的细胞膜上,形成只允许一价离子通过的孔,用此法在膜片上做很多导电性孔道,借此对全细胞膜电流进行记录。由于此模式的胞质渗漏极为缓慢,局部串联阻抗较常规全细胞模式高,所以钳制速度很慢,也称为缓慢全细胞模式。
感觉这样的提问没有什么意义
建议,可以自己查阅下资料
相关疾病:癫痫心律失常阵发性室上性心动过速室性期前收缩房室结折返性心动过速今年4月,我有幸赴纽约,师从著名心脏电生理(EP,electrophysiology)专家Luig...
主要是做蛋白纯化过程中测样品及溶液的电导用,价格在1000、2000左右,国产进口均可。看了写资料还是不知道怎么选,如果我要测一个0.5MNaCl溶液,是不是要选一个测量范围大于100ms/cm的电极呀,那那个什么常数什么的怎么确定?K=1or10还是其他的呀。
膜片钳技术原理与基本操作123
腐姐控百合9202017-11-09
(1)膜片微电极的制作
拉制
膜片微电极是将玻璃毛细管用拉管仪拉制而成。
涂硅酮树酯
将硅酮树酯涂于微电极的最尖端以外的部分,然后将其通过加热镍铬电阻线圈而烘干变固。
热刨光
在显微镜下,将微电极尖端接近热源进行热刨光处理可提高巨阻抗封接的成功率。
充灌微电极液
用于灌充微电极的液体需经为空滤膜过滤,出去妨碍巨阻抗封接形成的灰尘。
(2)巨欧姆阻抗封接
(3)单一离子通道记录
(4)全细胞记录
(5)制真菌素穿孔膜片钳法
(6)膜片电容测定法
(7)参数补偿向左转|向右转
Bio-RadMini-II垂直电泳仪一开始就显示“E1”,有时显示“E10”。好不容易不报错了,在80V的恒压下,电流才2mA,以前一直未出现这种情况。听其他人建议,更换了电泳缓冲液,仍然不行。呜呜呜,我把所有的样品都加进去了,结果…………