Description
CPZ ™ is the cryopreservation solution formulated according to the M3™ family media formulation. CPZ™ is a complex cryopreservation medium containing multiple supplements, 10% FBS, clinical grade hydroxyethyl starch, dextran, and other factors in proprietary formulation. It binds water molecules, gives superior protection of human and mammalian cells, and increases viability of sensitive cell cultures when reanimated from cryopreservation. The DMSO-free CPZ™ formula (MCPZ) is designed to allow addition of a customized concentration of specific cryoprotectants such as DMSO or glycerol for the cells. CPZF™ media is commonly used to store cells propagated in M3™ media, including NCM cell lines.
Store at 2°C – 8°C.
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如果不用液氮罐,可以用-80度。我们是这样做的,将细胞转移至冻存管中,在-20放置半小时到一小时左右,预冻。之后放入-70中,我们尝试过载-70中放置1年的细胞没有问题,复苏之后状态尚佳。至于更长时间我们没有尝试过,但是老板说1年半没问题,在国外做实验的时候他使用过。
细胞冻存主要操作流程(供参考)
细胞冻存液推荐:DMSO(德国applichema3672)orBambanker细胞冻存液
1.选用对数生长期细胞,在收集细胞24小时前换液一次。
2.用常规方法将细胞消化下来,按(1-5)×106/ml浓度、悬浮于含有10%DMSO(applichema3672)的小牛血清或生长液中。冻存的细胞数量要充分,因复苏时接种的细胞数量应比平常多一些;
3.用吸管吸取细胞悬液,分装于无菌Eppendorf管中(每管1ml),严密封口,放入三层纱布小袋,注明细胞名称和冻存时间,便于以后查找。
4.从把安培悬液在液氮容器口开始计时,在30~40min内,下降到液氮表面,停留30min后,直接投入液氮中。或先将安培移入液氮罐口颈部气相中过夜,次日将纱布袋缓慢下降至液氮中,历时3分钟。在液氮中可长期保存。若没有液氮,可冻存于-80冰箱内,稳定保持一年以上。
细胞冻存遵循:慢冻速溶的原则。
除了常规的以上操作,还可以拿毛巾包着冻存管就可以直接放进-70,即可以遵循细胞冻慢冻速溶的原则,又比较方便,不用先放-20,因为是慢慢冻进去的,所以能更好的达到梯度冻存。保证了Bambanker细胞冻存液的高复苏率。
慢冻是要给DMSO(applichema3672)orBambanker细胞冻存液,以渗透入细胞的时间,所以我的经验是4度的半小时要保证,之后就基本上可以马上冻起来也没有什么关系了。
毛巾包裹法十分新颖,呵呵。不过,从原理上看,确实是值得尝试的好方法,既保证了时间,又省去了搬来搬去的麻烦。
至于-80度的保存时间,我亲眼所见,一年以上稳定保存。复苏效果尚佳。
在4度的情况下,要看你是什么细胞了,如果是老鼠的细胞可以放1小时左右,其他细胞最多半小时(本人做过试验的);在-20度的情况下,老鼠的可以放1天左右,其他细胞半天,但其状态不是很好了;在-70度的情况下,老鼠的细胞可以放1到2年,在此期间要复苏一次看其生长情况,其他细胞冻存约一年了!
不过现在也有一些即用型的冻存液,比较不错,不需要这么麻烦,悬浮好细胞以后直接加,也不用程序性降温,直接-80度冰箱就搞定了的,配方的话,应该不是传统的DMSO加血清,里面有些东西比较复杂,但也就是这配方保证了细胞冻存和复苏的效果,过一年以上复苏的话,复苏率还非常高,比传统的DMSO加血清要高很多,没法比,很给力。不过这东西国产的还没有做到这么高级,都是进口的,比较贵,比如日本的Bambanker。不过用量少,每管加1ml,整体来说花费也不多,但是节省了很多时间和精力,有这些精力可以集中起来看很多文献和做实验啦。现在国内的实验室用的倒不多,有钱的也用,主要是CRO企业和制药企业有大量的细胞冻存和反复复苏的,用这个非常适合,超级节省人力和时间,而且还保证了复苏率,对于那些难复苏的细胞,简直是福音啊。
A3672_en_GB.pdf(95.9k)
细胞冻存液.docx(122.32k)
1, 液氮罐口径只有50mm,里面根本看不清,也不能伸进去大的东西捞,通过打捞的办法很难打捞起来。
2. 把液氮全倒出来的话,我担心泡沫盒承受不了这个温度,而且没有备用液氮罐,也没备用液氮,也没有负80度冰箱,万一这些倒出来的液氮气化掉了,而且口子这么小,我担心液氮灌不进去,到时候只能眼睁睁的看着细胞化掉了。
谁有这个经验啊,救救小女子吧,不胜感激啊!我要尽快把细胞弄出来!

