Uracil-DNA Glycosylase (UDG)
- Thermo-labile version-
- Removing uracil-containing DNA
- Elimination of carryover contamination
- Engineered for heat susceptible
- Best for real-time PCR with dUTP
Products
| Cat.No. | Product | Size |
|---|---|---|
| UDG1000 | HelixZyme™ Uracil-DNA Glycosylase (UDG) | 1,000 units |
| UDG5000 | HelixZyme™ Uracil-DNA Glycosylase (UDG) | 5,000 units |
- Description
- Data
- Details
- Documents
NanoHelix Uracil-DNA-glycosylase(UDG), also known as UNG, is an engineered E. coli enzyme catalyzing the hydrolysis of N-glcosylic bond between the uracil and sugar, leaving an apyrimidinic site in uracil-containing single or double-stranded DNA. This enzyme has been engineered to be more susceptible to high-temperature and inactivated easily during the dUTP containing PCR or real-time PCR. The wild-type of E. coli UDG is resistant to thermal inactivation. For PCR diagnosis, UDG can be used for efficient removal of carryover contaminated uracil-containing DNA.
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我现在要测脑组织匀浆的SOD活性和MDA的含量,但是因为还有其他的一些指标要测,所以需要先把脑组织保存5-10天左右才有时间测.虽然这两个指标有很多人测,我查了一下资料,也问了几个人,答案各不相同,有人说是放在低温冰箱里面就可以了,液氮罐只是适用于长期保存;也有人说放低温冰箱SOD的活性容易丧失,到底该怎么样保存最合适?谢谢!
液氮冷冻的原理与工艺:液氮是一种比较理想的制冷剂,五色透明、稍轻于水、惰性强、无腐蚀、对震动、电火花是稳定的,一个大气压下,液氮的汽化温度为—195.81t,蒸发潜热为47.9kcal/kg,由于空间技术和炼钢等工业的发展,大量的制氧副产品——氮气经过液化得到的液氮作为一种深冷冷源已经广泛应用于医药、激光、超导、食品、生物等各工业生产和科研领域。20世纪肋年代液氮制冷剂直接气化制冷修筑地下建筑工程,已成为一种新的土层冻结方法,为提高地层冻结速度开辟了新的途径。
1.先将冻存管放入4℃冰箱,约40min.
2.接着置于-20℃冰箱,约30~60min.
3.置于-80℃超低温冰箱中放置过夜.
4.置于液氮罐中长期保存.
如果不用液氮罐,可以用-80度。我们是这样做的,将细胞转移至冻存管中,在-20放置半小时到一小时左右,预冻。之后放入-70中,我们尝试过载-70中放置1年的细胞没有问题,复苏之后状态尚佳。至于更长时间我们没有尝试过,但是老板说1年半没问题,在国外做实验的时候他使用过。
细胞冻存主要操作流程(供参考)
细胞冻存液推荐:DMSO(德国applichema3672)orBambanker细胞冻存液
1.选用对数生长期细胞,在收集细胞24小时前换液一次。
2.用常规方法将细胞消化下来,按(1-5)×106/ml浓度、悬浮于含有10%DMSO(applichema3672)的小牛血清或生长液中。冻存的细胞数量要充分,因复苏时接种的细胞数量应比平常多一些;
3.用吸管吸取细胞悬液,分装于无菌Eppendorf管中(每管1ml),严密封口,放入三层纱布小袋,注明细胞名称和冻存时间,便于以后查找。
4.从把安培悬液在液氮容器口开始计时,在30~40min内,下降到液氮表面,停留30min后,直接投入液氮中。或先将安培移入液氮罐口颈部气相中过夜,次日将纱布袋缓慢下降至液氮中,历时3分钟。在液氮中可长期保存。若没有液氮,可冻存于-80冰箱内,稳定保持一年以上。
细胞冻存遵循:慢冻速溶的原则。
除了常规的以上操作,还可以拿毛巾包着冻存管就可以直接放进-70,即可以遵循细胞冻慢冻速溶的原则,又比较方便,不用先放-20,因为是慢慢冻进去的,所以能更好的达到梯度冻存。保证了Bambanker细胞冻存液的高复苏率。
慢冻是要给DMSO(applichema3672)orBambanker细胞冻存液,以渗透入细胞的时间,所以我的经验是4度的半小时要保证,之后就基本上可以马上冻起来也没有什么关系了。
毛巾包裹法十分新颖,呵呵。不过,从原理上看,确实是值得尝试的好方法,既保证了时间,又省去了搬来搬去的麻烦。
至于-80度的保存时间,我亲眼所见,一年以上稳定保存。复苏效果尚佳。
在4度的情况下,要看你是什么细胞了,如果是老鼠的细胞可以放1小时左右,其他细胞最多半小时(本人做过试验的);在-20度的情况下,老鼠的可以放1天左右,其他细胞半天,但其状态不是很好了;在-70度的情况下,老鼠的细胞可以放1到2年,在此期间要复苏一次看其生长情况,其他细胞冻存约一年了!
不过现在也有一些即用型的冻存液,比较不错,不需要这么麻烦,悬浮好细胞以后直接加,也不用程序性降温,直接-80度冰箱就搞定了的,配方的话,应该不是传统的DMSO加血清,里面有些东西比较复杂,但也就是这配方保证了细胞冻存和复苏的效果,过一年以上复苏的话,复苏率还非常高,比传统的DMSO加血清要高很多,没法比,很给力。不过这东西国产的还没有做到这么高级,都是进口的,比较贵,比如日本的Bambanker。不过用量少,每管加1ml,整体来说花费也不多,但是节省了很多时间和精力,有这些精力可以集中起来看很多文献和做实验啦。现在国内的实验室用的倒不多,有钱的也用,主要是CRO企业和制药企业有大量的细胞冻存和反复复苏的,用这个非常适合,超级节省人力和时间,而且还保证了复苏率,对于那些难复苏的细胞,简直是福音啊。
A3672_en_GB.pdf(95.9k)
细胞冻存液.docx(122.32k)

