15-Isoprostane F2t ELISA Assay
The 15-Isoprostane F2t ELISA Assay is For Research Use Only
Size: 1×96 wells
Sensitivity: 0.05 ng/ml
Dynamic Range: 0.05 – 100 ng/ml
Incubation Time: 2.5 hour
Sample Type: Biological Fluids
Sample Size: 100 µl
Species: Human
Product manufactured in the USA
Assay Background
Isoprostanes are prostaglandin-like compounds that are produced by free radical mediated peroxidation of lipoproteins. This kit is for the quantification of a representative isoprostane, 15-isoprostane F2t (also known as 8-epi-PGF2a, 8-iso-PGF2a or 8-isoprostane). Levels of 15-isoprostane F2t (15-IsoP F2t) in biological fluids have been shown to be useful for assessment of oxidant stress in vivo. 15-IsoP F2t has also been shown to be a potent vasoconstrictor in rat kidneys and rabbit lungs, and plays a causative role in atherogenesis. Elevated isoprostane levels are associated with hepatorenal syndrome, rheumatoid arthritis, atherosclerosis, and carcinogenesis.
The 15-Isoprostane F2t ELISA Assay kit can be used for the quantification of free 15-IsoP F2t in urine, plasma, serum, and tissue samples following Solid Phase Extraction (SPE) of the isoprostane-containing fraction. Instructions are also provided for the quantification of total 15-IsoP F2t following hydrolysis of phospholipids.
NOTE: Alternatively, urine samples may be analyzed without SPE using a separately available kit, ISO34-K01 – Urinary Isoprostane ELISA, also available from Eagle Biosciences, Inc.
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在流式细胞仪中，用PI单染法区分死细胞和活细胞，怎么看数据结果？
正常人T细胞占到淋巴细胞的60-90%。T细胞一般有分为CD4+ 和CD8+这两种，两者的比例正常范围是0.9-6.
流式细胞仪（Flow cytometry ）是对细胞进行自动分析和分选的装置。它可以快速测量、存贮、显示悬浮在液体中的分散细胞的一系列重要的生物物理、生物化学方面的特征参量，并可以根据预选的参量范围把指定的细胞亚群从中分选出来。多数流式细胞计是一种零分辨率的仪器，它只能测量一个细胞的诸如总核酸量，总蛋白量等指标，而不能鉴别和测出某一特定部位的核酸或蛋白的多少。也就是说，它的细节 分辨率为零。
染色的各种染料，标记好的荧光抗体染色所需要的缓冲液，封闭液，PBS最终由于上样的缓冲液
缺点也很多。激光的功率很小，对荧光信号的灵敏度和分辨率都很差。只有很强的信号才适合于在这个机器上使用。如果经常要改变染色的步骤，使用不同的样本，或者抗原的量不确定，不建议用这个机器。
我有过两台，一台配有三色激光，当时的报价将近40万美元，最近买的另外一台，两个激光，30万美元。
过表达质粒转染细胞，以空载质粒做对照，48h后检测对凋亡的影响。请问定象限的时候是用空载质粒的对照组，还是需要用未转染的正常细胞？
取对数生长期的细胞，按1X106个/mL以1mL体积接种于6孔板内。培养24h后，加入不同浓度样品。在37 ℃、5 % 的CO2恒温箱中培养24h后终止。
（2）细胞固定
胰酶消化并离心收集细胞（800rpm/min），弃上清，用预冷PBS洗细胞两次，加入预冷70％乙醇， -20℃固定保存。
（3） 细胞染色
离心收集细胞（800rpm/min），以1mL的PBS洗细胞一次，加入500uLPBS含50ug/mL溴化乙锭（PI），100ug/mL RNase A, 4℃避光孵育20分钟。
（4）检测
以标准程序用流式细胞仪检测，汞激发波长488nm，计数8千个细胞，结果用软件WinMDI Version 2.9分析。
比如白血病，骨髓瘤，艾滋病治疗的监测（看CD4细胞的水平）等等。
而一些老式 的机器，由于装备的激光数量和检测器都很有限，比如BD calibur这款机器。最高配置也就是蓝色（488nm）和红色（647nm）两种激光。检测4种颜色（通道）。所以为方便起见，就命名为FL1,FL2, FL3和FL4。前三种由于蓝色激光，FL4用于检测红色激光所激发的荧光。其中FL1是检测绿色荧光的（比如FITC，荧光素或者绿色荧光蛋白），而FL2是检测橙色荧光的（比如PI染色）。
