Porphyrins HPLC Assay Column
The Porphyrins HPLC Assay Column is For Research Use Only
Each column is can be utilized for approximately 500-1000 samples depending on column care and sample type.
Assay Background
Hemoglobin, myoglobin and the cytochromes contain the heme structure as active site. The porphyrins are precursors of the heme molecules. They play an important role in the oxygen metabolism. The heme synthesis is located mainly in the erythrocyte cells. Glycin and succinyl-CoA are condensed to δ-aminolävulinic acid. Two molecules of δ-aminolävulinic are then condensed to porphobilinogen. The porphyrin ring is built up by four porphobilinogen molecules.
An increase of porphyrins caused by a defect in the synthesis is described as porphyria. The different porphyries are determined by the characteristic pattern of porphyrins in urine. In autosomal dominant acute porphyrin disorders uro-, copro-, penta- und tricarboxyporphyrin are increased. In chronic porphyries including porphyria cutanea tarda the concentration of uro- and heptaporphyrin are increased. In chronic lead intoxication the coproporhyrins are slightly increased, whereas an acute lead intoxication shows extremely high excretion of porphyrins in urine.
The Eagle Biosciences Porphyrins HPLC Assay Kit makes it possible to determine them in an easy, fast and precise way. The Porphyrins HPLC Assay Kit includes all reagents in ready to use form for preparation and separation of the samples with exception of the columns (IC2601rp) and the controls (IC2601ko). Both can be supplied by Eagle Biosciences. Beside the complete test kit it is possible to order all components separately. Please request our single component price list.
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3.1透过率、吸收度测量
a.暗电流调零：开启电源后，若试样室盖未打开，将显示提示符P.1（请做第一步骤操作），打开试样室盖直到接触检测开关，提示符P.1消失，显示暗电流值。如果它的绝对值小于5.0，则两秒内自动归零，否则可调节面板上之0%T旋钮。
b.调整参比讯号（100T/OA）：微机所显示的提示符为P.2（请做第二步操作）。将T—A—C旋钮开关置T/A，参比溶液放进1号试样槽并移入光路，关闭试样室盖，显示参比讯号强度，调整狭缝和光楔（试样槽拉手左面之100%T旋钮），使显示数在90.0—119.9%T或相应A值范围以内，2秒以内将自动调整为100%T/OA。
c.比色皿误差校正：为校正比色皿的系统误差，要求在同一次测量过程中，比色皿与槽位编号一一照应。将使用的比色皿盛参比溶液放进试样槽，移入光路，所显示的T（或A值）就反映了该与1号槽中比色皿之间的配对误差。按一下ADJ（Adjust）校正键，则误差数据存入微机并自动校正为100%T/OA。这项操作在每次开机后只需作一次，若所用的比色皿配对性很好，可免去这一步骤。开机时，校正系数初始值为1，即相当于不校正。
d.用同比色皿盛被测溶液放进同一试样槽，则显示校正后的透过率或吸光率。
3.2浓度测量
a.标准对照法
b.按3.1节（1）—（3）操作。
c.将标准浓度的样品放如光路。
d.旋钮开关至C，分别按三个浓度置数键，使显示数与已知浓度值一致，浓度值仅取其三为有效数字，小数点位置自定义。
e.将被测式样移入光路，则显示样品的浓度（比色皿误差已校正）。
3.2标准曲线法（标准曲线为直线）
a.按3.1节（1）—（3）操作。
b.旋钮至A， 调整光楔使A值变化至标准曲线高端某一点的坐标A0。
c.旋钮至C，按浓度置数键显示数与对应于A0的浓度值C0一致。
d.重新调整对比讯号后按（1）之（4）操作。
3.3测试完毕，依次关闭主机电源开关，电气箱开关，拔下电源插头，盖上护罩。
3.4认真填写使用操作记录。
2、以空白为参比（或水）测得系列吸光度；
3、以标准溶液的吸光度为纵坐标,对应的标准溶液的含量为横坐标,找出相对的点；
4、将点用一条直线连接起来；尽量将点都落在线上；（绘制标准曲线；）
5、由此根据测得的样品的吸光度查找相对的含量；
分光光度计就是利用分光光度法对物质进行定量定性分析的仪器。
而分光光度法则是通过测定被测物质在特定波长处或一定波长范围内光的吸收度，对该物质进行定性和定量分析。 常用的波长范围为：(1)200～400nm的紫外光区,(2)400～760nm的可见光区,(3)2.5～25μm（按波数计为4000cm<-1>～400cm<-1>）的红外光区。所用仪器为紫外分光光度计、可见光分光光度计（或比色计）、红外分光光度计或原子吸收分光光度计。为保证测量的精密度和准确度，所有仪器应按照国家计量检定规程或本附录规定，定期进行校正检定。 单色光辐射穿过被测物质溶液时，被该物质吸收的量与该物质的浓度和液层的厚度（光路长度）成正比，其关系如下式： 1 A=log — =ECL T 式中 A 为吸收度； T 为透光率； E 为吸收系数，采用的表示方法是(E1％ 1cm),即吸收度换算成溶液浓度为1％(g/ml)，液层厚度为1cm的数值； C 为100ml溶液中所含被测物质的重量，g(按干燥品或无水物计算）； L 为液层厚度 ，cm。 物质对光的选择性吸收波长，以及相应的吸收系数是该物质的物理常数。当已知某纯物质在一定条件下的吸收系数后,可用同样条件将该供试品配成溶液，测定其吸收度,即可由上式计算出供试品中该物质的含量。在可见光区，除某些物质对光有吸收外，很多物质本身并没有吸收,但可在一定条件下加入显色试剂或经过处理使其显色后再测定,故又称比色分析。由于显色时影响呈色深浅的因素较多，且常使用单色光纯度较差的仪器，故测定时应用标准品或对照品同时操作。
分光光度计已经成为现代分子生物实验室常规仪器。常用于核酸，蛋白定量以及细菌生长浓度的定量。
分光光度计的简单原理
分光光度计计采用一个可以产生多个波长的光源，通过系列分光装置，从而产生特定波长的光源，光源透过测试的样品后，部分光源被吸收，计算样品的吸光值，从而转化成样品的浓度。样品的吸光值与样品的浓度成正比。
长（频率、或波数）,分别测定后,手工绘制光谱图.显然这种仪器对于需要经常根据光谱图定性分析的用户而言是很不方便的,但价格相对于光谱仪要便宜得多,
对只需定量分析的用户就够用了.
1、光谱仪，以光电倍增管等光探测器测量谱线不同波长位置强度的装置。其构造由一个入射狭缝，一个色散系统，一个成像系统和一个或多个出射狭缝组成。以色散元件将辐射源的电磁辐射分离出所需要的波长或波长区域，并在选定的波长上（或扫描某一波段）进行强度测定。分为单色仪和多色仪两种。
2、分光光度计是将成分复杂的光，分解为光谱线的科学仪器。测量范围一般包括波长范围为380~780
nm的可见光区和波长范围为200～380
nm的紫外光区。不同的光源都有其特有的发射光谱,因此可采用不同的发光体作为仪器的光源。钨灯的发射光谱：钨灯光源所发出的380～780nm波长的光
谱光通过三棱镜折射后，可得到由红、橙、黄、绿、蓝、靛、紫组成的连续色谱；该色谱可作为可见光分光光度计的光源。
今天，导师问到我一个问题，
HPLC检测器与UV分光光度计的主要区别。
我说HPLC检测器的分光部件在样品流动池的后面，UV分光光度计的分光部件在样品的前面。
导师问我，那么分光部件的前置和后置各有什么优点和缺点呢？
我百思不得其解。
特地前来请教
2.将灵敏度开关调至“1”档（若零点调节器调不到“0”时，需选用较高档。）
3.根据所需波长转动波长选择钮。
4.将空白液及测定液分别倒入比色杯3/4处，用擦镜纸擦清外壁，放入样品室内，使空白管对准光路。
5.在暗箱盖开启状态下调节零点调节器，使读数盘指针指向T=0处。
6.盖上暗箱盖，调节“100”调节器，使空白管的T=100，指针稳定后逐步拉出样品滑竿，分别读出测定管的光密度值，并记录。
7.比色完毕，关上电源，取出比色皿洗净，样品室用软布或软纸擦净。
