Immunoglobulin expressed by the mouse plasmacytoma hybridoma RPC 5 is an IgG2a kappa isotype of unknown specificity. It is used as a negative control when working with human cells (1).
References:
1. K Kondo, Y Tanaka, et al (2007) Hum Immunol 68(7): 563-71. PMID: 17584577
ebiomall.com
>
>
>
>
>
>
>
>
>
>
>
分光光度计已经成为现代分子生物实验室常规仪器。常用于核酸,蛋白定量以及细菌生长浓度的定量。
仪器主要由光源、单色器、样品室、检测器、信号处理器和显示与存储系统组成。
看了一些文献,但都没有具体说如何测HP浓度
1.想知道如何用分光光度计测幽门螺杆菌的浓度,是选择600nm波长吗?
2.看到一个比浊法测细胞浓度的原理帖子讲解,想问我是否先需要绘制标准线,可是如果要绘制,我又如何获得各种已知的不同浓度的幽门螺杆菌菌液呢?(我就是不知道我的细菌浓度所以才想测,那我该从哪儿获得已知浓度的细菌呢?)
如果可见分光光度计能满足你的需求,就千万别买那种带紫外功能分光光度计
我单位一台581、一台721、一台751(751带紫外功能)
你瞧,用的频率是:“721”>“581”远>“751” (近5年了,那751我们只在外协时用过两次————外协时,只有自己受累,没有任何好处的)
而“751”每年的维护费用相当于四台“721”
ND-2000是目前国内外实验室中使用最为广泛的一款微量分光光度计,其优越的性能、准确的结果赢得了广大用户的好评。
该产品可用于以下几个方面:
* 紫外检测:常规紫外光波长下检测样品吸光值;
* 核酸检测:可检测dsDNA、ssDNA、RNA等不同类型核酸的浓度及其在260nm、280nm处的吸光值;
* 探针检测:检测荧光标记探针的吸光值,可用于去除未能标记探针的样品;
* 细胞培养物检测:检测细胞培养物在600nm处的吸光值;
* 蛋白检测:检测普通纯化后蛋白的浓度和280nm处的吸光值;
* 蛋白标记检测:可检测被BCA、Bradford或Lowry标定的蛋白样品,自动画出标准曲线并计算出待测蛋白质浓度。
二、 产品简介
NanoDrop 2000超微量分光光度计是NanoDrop的最新产品,应用液体的表面张力特性,样品体积只需要 0.5~2ul,在检测台上,经上下臂的接触拉出固定的光径达到快速、微量、高浓度、免石英管、免毛细管等耗材检测吸收值的优点。此产品设计受专利保护,并在全世界广受欢迎,其准确度与便利性让科学家得以更有效率进行各项研究。
NanoDrop 2000使用高能量氙灯(pulsed xenon flash lamp)可提供190~840nm的全光谱检测,且不需要暖机,开机后立即使用。搭配高感度CCD array检测器,检测吸收值可高达300Abs(dsDNA浓度2~15000ng/ul),大部分纯化后的核酸几乎都不需要稀释即可检测。
待测样品的均质性是NanoDrop 2000的最高要求,一般核酸、蛋白质样品能在检测前以vortex mixer震匀为最佳,若无vortex mixer也应以pipette吸放数次混匀。若担心genomic DNA可能因前述动作而断裂,则改以55?C加热约一分钟,使样品在侦测前呈现均匀状态,以确保 2ul 具有代表性。
检测时选择不同检测模式,可以得到最快速的结果:
● Nucleic Acid ?C 吸收光谱、230nm, 260nm, 280nm吸收值(换算成10mm光径吸收值)、260/280 ratio、260/230 ratio及核酸浓度。
● UV-Vis ?C 190~840nm间所有波长的吸收值及光谱(以1mm光径吸收值呈现)。
● A280蛋白质定量法 ?C 280nm吸收值(换算成10mm光径吸收值)、260/280 ratio及蛋白质浓度。仅适用于纯化后的蛋白质,须具有已知的质量消光系数(mass extinction coefficient)方可计算。
● BCA、Bradford及Lowry ?C 依不同呈色剂提供不同波长吸收值结果,自动画出标准曲线并计算R square,待测蛋白质浓度。
* 蛋白质检测模式目前提供BCA、Bradford及Lowry三种常见定量呈色剂,因呈色剂随时间会逐渐加深,使用前请详阅试剂说明书并制备不同浓度的标准品,在最佳时间内完成检测,以得到良好的标准曲线。每个标准曲线最多可有七个标准品,每个标准品最多可做五重复。
* 测蛋白质时样品体积需使用 2ul,每个样品检测后需以Kimwipes 低尘擦拭纸(编号: 34155 )擦拭15~20回,以避免呈色剂与蛋白质的残留。
浓度范围:
样品种类
最低浓度
最高浓度
(超过时请稀释样品)
再现性 (五重复以上)
核酸
2 ng/ul
15000 ng/ul (dsDNA)
12000 ng/ul (RNA)
浓度范围在 2-100 ng/ul 时,SD为 ± 2 ng/ul
浓度范围大于 100 ng/ul 时,CV为 ± 2%
纯BSA
0.10 mg/ml
100 mg/ml
浓度范围在 0.05-10 mg/ml 时,SD为 ± 0.10 mg/ml
浓度大于 10 mg/ml 时,CV为 ± 2%
蛋白质,以BCA方式定量
0.2 mg/ml
8.0 mg/ml
CV:± 2% (在可侦测的浓度范围内皆然)
蛋白质,以modified Lowry方式定量
0.2 mg/ml
4.0 mg/ml
CV:± 2% (在可侦测的浓度范围内皆然)
蛋白质,以Bradford方式定量
100 ug/ml
8000 ug/ml
浓度范围在 100-500 ug/ml 时,SD为 ± 25 ug/ml
浓度大于 500 ug/ml 时,CV为 ± 5%
蛋白质,以Mini Bradford方式定量
15 ug/ml
100 ug/ml
浓度范围在 15-50 ug/ml 时,SD为 ± 4 ug/ml
浓度大于 50 ug/ml 时,CV为 ± 5%
三、技术参数:
1、波长范围: 190-840nm;
2、波长精度: 1nm;
3、分辨率: <1.8 nm (FWHM at Hg 253.7 nm);
4、其它: 1mm光程长度(可自动调整到0.05mm);
5、检测下限:2ng/μl(dsDNA);
6、检测上限:15000ng/μl(dsDNA);
7、吸光率精确度:0.002 absorbance (1mm光程);
8、吸光率准确性:2%(at 0.76 at 257 nm);
9、吸光率范围:0.02-300 (相当于10mm光程);
10、核酸检测周期:< 5s;
11、体积:14cm×20cm。
四、使用方法举例:
dsDNA:在主画面点选Nucleic Acid,计算机与仪器自动完成联机。依照DNA所溶于之液体准备该溶液(务必确认DNA溶于二次水、TE buffer或哪一组kit的elution buffer)取出1.5 ul 点在侦测台上,放下上臂后再按Blank。在右上方拉选Sample Type 选 DNA-50,在Sample ID位置输入样品名称,将样品混匀,取出1.5 ul 点在侦测台上,放下上臂后再按Measure。
五、结果整理:
NanoDrop2000 软件在侦测一开始会询问档案欲存至何处,若未指定,则档案会存在上一个使用者的档案内。
六、注意事项:
1. 侦测后立即使用拭镜纸(Kimwipe类)擦拭台面。先取一张将上下台面的液体吸走,再将此laboratory wipe吸过样品的面反折到内部,折迭四次后以单方向多次擦拭台面(DNA 擦 5次,Protein 擦 20次)。
2. 同一滴液体只能做一次侦测,欲重复定量同一样品,请擦掉前一滴,重新取出一滴进行侦测。
3. 基本上核酸样品可使用1~2ul做测量,随各液体体积特性之不同会有不同体积需求,原则上不超过 2ul。并请使用2ul pipette避免体积不足导致液柱无法完整形成。唯蛋白质样品因呈色剂与蛋白质本身特性,务必使用2ul进行侦测。
4. 当软件跳出错误讯息时,请详细阅读并依指示进行障碍排除。最常发生的情形是在侦测过程液柱并未正确形成,软件会出现以下讯息。可先用肉眼观察液柱是否未完整连接上下台面,或样品内有泡泡,将上臂拉起后,擦掉该滴样品,再重新进行侦测,必要时可将样品体积加大至2ul。
5. 不可使用含有Hydrofluoric Acid (HF)之腐蚀样品,其它无腐蚀性之液体皆可使用。
品牌:
可见分光光度计(又名可见光度计、分光光度计)是可见光分光光度法是上海美析仪器采用最新的单片机技术,开发出能够进行定量测量(标准曲线测量,可对物质进行浓度直读);OD值直接测量(吸光度、透过率和能量等直读);动力学测试(测出物质浓度随时间变化OD值的变化);光谱扫描(可以对某一种物质进行全波段扫描,分析物质的特征波长,判断实验过程的误差);多波长测试(可以对物质同时进行多个波长的测试,分析物质的相关特性);还有可以进行DNA/蛋白质测试、总磷总氮测试、重金属测试、农药残留测试、食品安全检测、热力发电金属离子测试等等,广泛应用于食品、药品、电力、生物研究、教学科研、化学化工、质量监督、水质环保和商检等各大领域。V-1500PC型可见分光光度计,波长范围:320nm-1100nm,能满足不同物质的测试。
(1)【诺顶仪器】为了防止光电管疲劳,不测定时必须将试样室盖打开,使光路切断,以延长光电管的使用寿命。
(2)取拿比色皿时,手指只能捏住比色皿的毛玻璃面,而不能碰比色皿的光学表面。
(3)比色皿不能用碱溶液或氧化性强的洗涤液洗涤,也不能用毛刷清洗。比色皿外壁附着的水或溶液应用擦镜纸或细而软的吸水纸吸干,不要擦拭,以免损伤它的光学表面。
具体应用是使用在:依据朗伯比尔定律(A=kbc)测定物质的吸光度A值,进行定量的目的。
可见分光光度计是有光源(钨丝灯发出连续光谱)、比色皿(装有色溶液)、单色器(给出单色光)、检测器(读出吸光度值)。
标准曲线是直接用标准溶液制作的曲线,是用来描述被测物质的浓度(或含量)在分析仪器响应信号值之间定量关系的曲线。在分光光度法分析中,被测物质的浓度在仪器上的响应信号值在一定范围内呈直线关系,水样测定的结果可以从标准曲线上查出。因此标准曲线制作的好坏,将会影响测定结果的准确度。1标准曲线的表达式标准曲线应是一条通过原点的直线,如果坐标上各浓度点基本在一条直线上可不进行回归处理,但在实验中不可避免地存在测定误差,往往会有一、二点偏离直线,此时可用最小二乘法进行回归分析,然后绘制曲线,通常称为回归直线,而代表回归直线方程叫回归方程,表达式为:y=bx+a(式中:b为直线斜率,a为y轴上的截距,x为被测溶液的浓度,y为吸光度,是多次测定结果的平均值)。在实际工作中,制作标准曲线的目的,是要借助它来查出水样中被测物质的浓度,而不是由x值通过回归方程去求得最可靠的y值,为了便于将观察到仪器响应信号值代入回归方程中直接计算试样的浓度或含量,勿需去绘制标准曲线再从曲线上查出被测物的浓度,改用下式计算;x=by+a(式中:a为x轴线上的截距,其它解释同前)。2标准曲线的参数标准曲线有3个参数,即相关系数r,斜率b
绘制标准曲线的意义
以某一特定波长条件下由分光光度计分别测出一系列不同溶度标准溶液然的吸光度值,以吸光光度值为纵坐标,相应的溶液浓度为横坐标,在坐标纸上可作出一条吸光度与浓度成正比通过原点的直线,称作标准曲线。~~~绘制标准曲线的实用意义就是只要测得其吸光度值即可在标准曲线上查出相应的浓度值。。展开

