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【求助】miRNA northern blot 结果灵敏度低 信号差 望高手指点
2021-08-05
问题描述:

各位同行,本人最近在做miRNAnorthern杂交时,我的探针使用地高辛标记的,最后也是用地高辛检测试剂盒来检测,不过我用的是化学发光检测仪没有用压片曝光的方法,最后检测结果信号很差,灵敏度不高,请教高手是什么原因?是不是CDPstar用发光检测仪效果不好的原因吗?有没有人用过这种方法?急待回复谢谢!

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踏雪飞扬
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补充一下,我使用AB的miRNA试剂盒来提取的total RNA 浓度还可以,上样量为10ug
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cathymary
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我杂交siRNA,我是用的压光片的方法,我是加大的上样量,条带就很清晰了,对了,你用的什么型号的仪器检测的?你的探针是如何制备的啊?你检测了没有啊?这些都会影响杂交结果的。
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踏雪飞扬
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你的上样量一般要多少啊?我一般加10ug左右的总RNA,探针是从国外带回来的,应该没有问题
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sxh03
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请问你的探针有没有加LNA修饰呢?看了好多帖子,地高辛标记的只有加了LNA修饰才有结果。我想知道,只用地高辛标记的探针可以出结果吗,因为LNA修饰好贵啊!
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willion1982
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