货号：	ECL-N-100/500
数量：	大量
保质期：	1年
保存条件：	避光置于4ºC
规格：	50mL

试剂盒组成：

货号	组份	数量	价格
ECL-N-100	A 液	50mL	259元
	B 液	50mL
	说明书	1 份
ECL-N-500	A 液	250mL	1089元
	B 液	250mL
	说明书	1 份

 
储存：避光置于4 ºC保存，有效期一年。
 
一、产品简介：
本试剂盒是非放射性发光系统，用于检测固定在膜上的蛋白或核酸，灵敏度高，背景低，最低检测灵敏度可达纳克(nanogram)级，适用于检测极微量的蛋白或核酸。发光信号较稳定，便于反复曝光操作。采用对碘苯酚作为发光增强剂，与普通 ECL 化学发光底物相比，可明显减少一抗和二抗的使用量。
 
二、原理：
增强型ECL化学发光底物试剂盒用于检测直接或间接标记辣根过氧化物酶（HRP）的抗体、抗原或者核酸。蛋白质或核酸在电泳后转移到印迹膜上，以HRP标记的抗体或探针结合膜上的目的蛋白或核酸，洗膜后置于本产品配制的ECL工作液中，室温孵育数分钟，HRP使工作液中的鲁米诺（Luminol）氧化并发光，试剂中添加的增强剂可以使得这种发光增强一千倍。此光经X光胶片或者电子装置感光记录下来，可清晰显示蛋白质或核酸条带。
 
三、产品优点：
纳克级灵敏度——高灵敏性，能快速检测广泛的蛋白范围，最低可检测几纳克(nanogram)的蛋白。
信号较稳定——发光时间长，能进行多次曝光，30min仍可保持约60%的发光强度。
信号强——发光信号比HRP-鲁米诺检测体系强一千倍。
稳定性高——试剂盒可在4度稳定存放一年。
节约抗体——需要更少（稀释更多）的一抗和二抗，节省抗体。
 
四、使用方法：
1.印迹膜制备：执行常规电泳、转膜、HRP标记的抗体或者HRP标记的核酸探针孵育、洗膜；ECL工作液含有HRP催化的发光底物，检测系统必须基于HRP酶标记的抗体或者核酸探针。充分的洗涤对于降低背景非常重要，所有步骤均在室温下完成。
2.ECL工作液的配置：在使用前取等量A液和B液，混合均匀并尽快使用；将膜片置混合液中，于室温下孵育约1分钟，每平方厘米膜片至少使用0.1-0.2ml以覆盖全膜片，注意不要在膜片表面形成气泡。
3.蛋白或核酸信号显现：
1).用平头镊钳住膜片，垂直置于吸水纸上以吸去过量试剂，仅留下少量液体覆盖表面，不可让膜完全干燥；
2).将膜片置于保鲜膜上，吸附蛋白面朝上，小心赶尽气泡；
3).用电子装置感光，或在暗室中用X光片曝光；
4).根据信号的强弱适当调整曝光时间，也可选择不同时间多次曝光，以达最佳效果。
 
五、安全性：
无特殊毒性，按普通化学品处理。如果不慎与眼、皮肤和衣物接触，请立刻用大量清水冲洗。
 
六、注意事项：
1．由于不同品牌的抗体质量不同，以及抗体的保存条件和保存时间的不同，初次使用时建议对抗体用量进行优化，以取得最优效果。
2．勿将ECL化学发光底物试剂盒暴露在阳光或强光下，否则会导致其失活；建议保存在棕色瓶中，并避免长时间暴露在阳光下，实验室光照对试剂盒影响不大；除了X光胶片曝光和洗片处理外，所有步骤均不必在暗室中操作。
3．使用充足的洗涤缓冲液、封闭液、抗体稀释液和底物工作液去覆盖印迹膜，以确保印迹膜处于湿润状态；使用大量的封闭液和洗涤液能减少非特异性信号的产生。
4．使用前配制ECL工作液，体积足够覆盖膜片即可；取A液和B液时一定要用不同的枪头，互相污染可能导致缓慢失活；配制完毕建议立即使用工作液，室温放置数小时后仍可使用但灵敏度略有降低；弃去使用过的混合试剂。
5．印迹膜与ECL工作液孵育后约2min时发出的光最强，然后随着时间的延长而缓慢减弱，至30min仍可保持约60%的光信号；蛋白点荧光较弱时可以适当延长曝光时间；使用过少的ECL工作液不利反应进行，为达节约目的可将膜剪小，但勿降低ECL工作液使用比例。
6．使用生物素/亲和素体系时，避免使用脱脂奶粉作为封闭液，因为脱脂奶粉中含有多种内源性生物素，容易产生非特异性信号。
7.避免将多张膜置于同一个洗膜盒内洗膜，相互吸附或摩擦可能造成很深的背景。
8.金属氧化物颗粒可能会造成膜上出现颗粒状斑点，避免使用带有锈迹的剪刀以及镊子，建议使用塑料的平头镊子。
9．NaN3能抑制HRP活性，应避免使用NaN3，如必须使用，浓度不要超过0.01%。
10.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作；戴手套可以避免在膜上留下手印，保持膜的干净。
11．本产品仅供研究使用。
 



常见问题：
 

问题	可能原因	解决方案
胶片反相(白色条带，黑色背景)	体系中HRP过量	将HRP标记物稀释10倍以上
印迹膜上出现棕色或黄色条带
膜在暗室中发光出强烈荧光
发光信号持续时间短于8小时
信号太弱或者无信号	体系中HRP过量，导致底物消耗过快	将HRP标记物稀释10倍以上
	抗原或抗体不足	提高抗原或抗体浓度
	蛋白转移率低	优化电转条件
	HRP或者底物活性太低	**参考下面的注释
背景过高	体系中HRP过量	将HRP稀释10倍以上
	封闭不充分	优化封闭条件
	封闭试剂不合适	更换封闭液
	清洗不充分	延长清洗时间、次数及清洗的体积
	胶片曝光过度	减少曝光时间
	抗原或抗体的浓度过高	减少抗原或抗体的浓度
蛋白条带为点状	蛋白电转失败	优化电转条件
	膜未平衡	按说明书将膜平衡
	膜和胶片之间有气泡	曝光之前去除气泡
出现非特异性条带	体系中HRP过量	将HRP标记物稀释10倍以上
	SDS引起的非特异性结合	Western blot 过程中避免使用SDS

              **检测底物的活性：准备1-2mL超敏底物工作液，于暗室中加入1μL稀释的HRP结合物，工作液将会立马发出荧光，随后荧光淬灭。