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Description
Details
BioLite™ surface markers allow for direct immunofluorescent staining of live, unfixed pluripotent stem cell populations. The antibodies undergo meticulous application testing and validation to ensure they are sterile, non-toxic, contain no sodium azide, and are free of culture pathogens. Colonies stained with BioLite antibodies are able to continue in culture with no adverse effect on proliferation and differentiation potential when compared to untreated cells.Background Stage-specific embryonic antigen-1 (SSEA-1) is a carbohydrate epitope expressed upon the surface of early mouse embryos, murine embryonal carcinoma (EC), murine embryonic stem (ES), and murine and human germ (EG) cells. No immunoreactivity is evident with undifferentiated human EC and ES cells. Differentiation of human EC results in an increase in SSEA-1 expression, while in the mouse expression is diminished. SSEA-1 is associated with cell adhesion, migration and differentiation.
Details
Details
| Concentration | 0.5 mg/mL |
|---|---|
| Species Reactivity | Human, Mouse |
| Host | Mouse Monoclonal |
| Clone | MC-480 |
| Isotype | IgM, κ |
| Immunogen | F9 tetracarcinoma stem cells (X-irradiated) |
| Formulation | 0.2 μm filter sterilized phosphate-buffered solution, pH 7.2, containing no preservative. Endotoxin level is <0.1 eu/μg="" of="" the="" protein=""><0.01 ng/μg="" of="" the="" protein)="" as="" determined="" by="" the="" lal="" test.="" formulation="" is="" free="" from="" bacteria,="" fungi,="" and=""> |
| Storage and Stability | Store at 2-8°C protected from light. Stable for 6 months from date of receipt when stored as directed. The BioLite format contains no preservative and therefore must be handled under aseptic conditions. |
| Applications Tested | Immunofluorescence (IF) on live, unfixed mouse ES cells |
| Recommended Dilutions | Immunofluorescence 1:100 Flow Cytometry 1:100 It is recommended that the antibody be titrated for optimal performance for each application. |
| Alternative Names | CD15, Stage-specific embryonic antigen 1 |
| References | Brambrink, T., et al. (2008) Sequential expression of pluripotency markers during direct reprogramming of mouse somatic cells. Cell Stem Cell 2: 151-159. PMID: 18371436Draper, J.S., et al. (2002) Surface antigens of human embryonic stem cells: changes upon differentiation in culture. J Anat 200: 249-258. PMID: 12033729 |
| Technical Documents | ST11006 Technical Data Sheet Protocol: Immunofluorescent Staining of Live Cells |
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激光扫描共聚焦显微镜（LSCM）是近年来迅速发展起来的一种新型高精度显微镜,不仅用于观察经固定的各种细胞和组织结构,而且还可对活细胞的形态、结构,离子的实时动态等进行观察和定量荧光测定,以及定量图像分析。目前国内LSCM技术应用前景广泛，并且发表众多具影响力的文章。为了推动LSCM技术的创新发展、促进相关人员技术的提升，我们特此制定激光共聚焦显微镜高级应用培训，面向生物医药领域从事成像技术方法创新的科研人员和成像平台管理者，充分发挥现有成像设备的作用，通过理论加实践的系统学习，最大限度地掌握该技术的使用方法，独立判断与排除科研常见问题和障碍。
2017年8月26日星期六
08:30-08:45报道
08:45-08:50欢迎致辞
08:50-09:05清华大学细胞影像中心介绍
09:05-09:45光学显微镜的选择和如何拍出高质量共聚焦图像王文娟
09:45-10:15休息与讨论
10:15-11:00多色影响与荧光光谱扫描及线性分析孙悦
11:00-11:45荧光漂白后恢复(FRAP)冯倩倩
11:50-13:30午餐
13:30-16:30上机操作培训(根据情况进行分组操作)
8:30-8:45学习内容回顾与总结
2017年8月27日星期日
09:00-09:15培训回顾
09:15-10:00荧光共振能量转移(FRET)王瑾瑜
10:00-10:45转盘共聚焦显微镜成像张彦丽
10:40-11:00休息与讨论
11:00-11:50图像处理基础与荧光共定位分析王文娟
11:50-13:30午餐
13:30-16:30上机操作培训(根据情况进行分组操作)
8:30-8:45学习内容回顾与总结
2017年8月28日星期一
09:00-09:30培训回顾与总结
09:30-10:00培训测验
10:00-10:30颁发证书
10:30-10:40合影
清华大学细胞影像中心是在生命学科校级平台（清华大学生物医学测试中心、清华大学蛋白质研究技术中心）范围内、跨中心、多平台联合组建的虚体技术中心，简称细胞影像中心。中心包括的平台有：生物医学测试中心细胞生物学平台光学显微镜机组、共享仪器平台光学显微镜机组、尼康生物影像中心、蛋白质研究技术中心细胞影像平台。细胞影像中心作为一个综合型光学成像平台，以科研服务为宗旨，主要提供细胞生物学影像及分析测试服务。包含的仪器有：激光扫描共聚焦(Confocal：Zeiss、Nikon、Leica、Olympus)、转盘共聚焦(SpinningDiskConfocal)、激光显微切割、双光子显微镜、超高分辨SIM/STORM/STED、全内反射（TIRF）荧光显微镜、荧光寿命成像-荧光相关光谱系统（FCS/FLIM）、高分辨活细胞成像系统、活细胞工作站、全自动数字玻片扫描系统和图像处理工作站（软件有Imaris,Image-ProPremier/Plus,Huygens,AutoQuant,MetaMorph和NIS-Elements等）,为实验提供一站式的解决方案。
转盘共聚焦显微镜拍摄，发表于Eph/ephrinsignalingmaintainstheboundaryofdorsalforerunnercellclusterduringmorphogenesisofthezebrafishembryonicleft-right
使用Nikon超分辨率显微镜拍摄，N-SIM显微镜显示NRK细胞稳定的表达线粒体标记20-GFP。标尺，1μm。WangC,DuW,YuLi*,etal.Dynamictubulationofmitochondriadrivesmitochondrialnetworkformation[J].Cellresearch,2015,25(10):1108.
使用ZeissLSM710激光共聚焦显微镜拍摄，图为人眼晶状体祖细胞中的晶状体球蛋白聚集体。绿色：绿色荧光蛋白和晶状体球蛋白融合蛋白；红色：P62蛋白；蓝色：细胞核；标尺：10μm。发表于Lanosterolreversesproteinaggregationincataracts.Nature,2015(523),607-611
使用ZeissLSM780激光共聚焦显微镜拍摄，图为酿酒酵母十二号染色体的设计与合成。发表于ZhangW,ZhaoG,LuoZ,etal.EngineeringtheribosomalDNAinamegabasesyntheticchromosome.[J].
王文娟博士清华大学细胞影像中心主任，高级工程师。毕业于北京大学，美国纽约大学医学中心博士后，主要从事光学显微成像和图像处理技术。技术专长：1.光学显微镜技术用于生物医学的研究，包括激光共聚焦、超高分辨、全内反射和荧光寿命成像等技术。2.单分子成像光学仪器搭建与单分子荧光成像3.图像处理、展示和数据分析。
冯倩倩共享仪器平台主管，工程师。技术专长：激光共聚焦显微镜影像技术
孙悦共享仪器平台主管，工程师。技术专长：激光共聚焦显微镜、全自动数字玻片扫描和双光子成像技术
王瑾瑜尼康生物影像中心负责人，工程师。技术专长：光诱导蛋白相关技术(FRET、FRAP、PA-GFP等)和超高分辨率技术
张彦丽张彦丽，工程师。技术专长：转盘共聚焦成像、双光子成像
培训时间：2017年8月26日-28日
报到时间：2017年8月25日12:00-18:002017年8月26日08:00-08:45
培训地点：清华大学生物技术馆会议室
报名费用：
单人：3000元/人
两人：2400元/人
三人及以上：2000元/人
(含注册费、培训费、资料费、茶歇费、午餐费)主办方可协助学员预定住宿(费用自理，需提前一周预定)
报名截止时间：8月20日
在线报名链接：http://www.damor.cn/app/wap-activity/sign-up/index.html
解释如下：
因为病毒很小。多数单个病毒粒子的直径在100nm左右，也就是说，把10万个左右的病毒粒子排列起来才可能用肉眼勉强看得到。
病毒如此细小，绝大多数病毒必须借助电子显微镜才能观察，电子显微镜的分辨率是光学显微镜的1000倍。不同病毒间大小差异很大。最小的如植物的联体病毒（Geminiviruses）直径仅18-20nm，最大的动物痘病毒（Poxviruses）大小达300-450nm×170-260nm，最长的如丝状病毒科（Filoviridae）病毒粒子大小为80nm×790-14000nm。
光学显微镜的分辨距离为d=0.61λ/NA 式中
d——物镜的分辨距离，单位 nm。
λ——照明光线波长，单位 nm。
NA ——物镜的数值孔径
例如油浸物镜的数值孔径为1.25，可见光波长范围为400—700nm ，取其平均波长550 nm，则d=270 nm，约等于照明光线波长一半。一般地，用可见光照明的显微镜分辨力的极限是0.2μm也就是200nm，大于病毒的直径，因此用光学显微镜是看不到病毒的。
细菌就比病毒大得多，单个球菌的直径约在0.8～1.2μm左右，大多数杆菌中等大小长2～5μm，宽0.3～1μm，在光学显微镜的可观测范围内。
光学显微镜跟放大镜相同点是放大都属于光学放大,显微镜的放大其实就是多个放大镜组合起来的放大.区别是放大镜放大倍数低,常规放大镜为3倍5倍8倍10倍等,最高不超过20倍。而除了体视镜放大倍数不高外其它都可以达到1000倍或1600倍。
电子显微镜是根据电子光学原理，用电子束和电子透镜代替光束和光学透镜，使物质的细微结构在非常高的放大倍数下成像的仪器，所以并不能说电子显微镜是超倍的放大镜。
列文虎克又动手做了一个金属支架和一个小圆筒，把两块镜片分别装在圆筒两头，还安上旋钮，来调节两块镜片间的距离。这样，世界上第一台显微镜就诞生了。
