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RayBiotech/Human c-Jun Transcription Factor Activity Assay/1 Plate Kit/TFEH-CJUN-1
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RayBiotech/Human c-Jun Transcription Factor Activity Assay/1 Plate Kit/TFEH-CJUN-1
品牌 / 
RayBiotech
货号 / 
TFEH-CJUN-1
美元价:
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数    量:
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4000-520-616

Antigen Information

Accession Number:
  • P05412
Gene ID:
  • 3725
Gene Symbols:
  • JUN
Protein Name & Synonyms:
Transcription factor AP-1, Activator protein 1 (AP1), Proto-oncogene c-Jun, V-jun avian sarcoma virus 17 oncogene homolog, p39
Target Species:
  • Human
Target Name:
c-Jun

Assay Format

Specificity:
The olionucleotide/antibody pair provided in this kit recognizes mouse c-Jun in whole lysates and nuclear extracts.
Number of Targets Detected:
1
Species Detected:
  • Human
Compatible Sample Types:
  • Cell Lysates
  • Nuclear Extracts
Design Principle:
  • Sandwich-based
Method of Detection:
Colorimetric
Quantitative/Semi-Quantitative:
  • Semi-Quantitative
Solid Support:
96-well Microplate

Product Specifications

Size:
1, 2, or 5 x 96-Well Strip Microplate Kit

Introduction

Activator protein-1 (AP-1) is a sequence-specific transcriptional activator composed of members of the Jun (c-Jun, JunB, and JunD) and Fos (c-Fos, FosB, Fra1, and Fra2) families in formats of homo- and heterodimers. These proteins belong to the bZIP group of DNA binding proteins with the ability to bind a common consensus sequence-defined AP-1-binding site. Jun and Fos proteins can also dimerize other basic leucine zipper proteins such as ATF, CCAAT enhancer-binding protein, Maf, and NF-E2. Jun-Jun and Jun-Fos dimers bind preferentially to TPA responsive element (TRE), whose consensus is TGAGTCA, whereas Jun-ATF dimers prefer to bind to the c-AMP-responsive element (CRE) whose consensus is TGAGCTCA. Inside cells, AP-1 activity is induced by an incredible diversity of signals, including growth factors, cellular stress, ionizing and ultraviolet irradiation, DNA damage, oxidative stress, neuronal depolarization antigen binding by T or B lymphocytes, and cytokines. The mechanisms involved in the induction of AP-1 activity are mediated through changes in the expression of AP-1 components or post-translational modification or both, resulting in regulation of their trans-activity positively or negatively. For example, stimulation by growth factors or by activating mutations in cytoplasmic effectors such as ras and raf, results in AP-1 activation by triggering the ERK signaling pathway. On the other hand, AP-1 responses to proinflammatory cytokines and UV radiation mostly depend on two other MAPK cascades, JNK and p38. The result is that AP-1 regulates various target genes executing biological functions such as cell proliferation, differentiation, apoptosis, or cell death.

Product Features

  • Specific transcription factor-DNA binding assay
  • Perfect alternative to EMSA
  • Easy to perform in an ELISA format
  • Non-radioactive assay
  • High throughput (96-well plate format)
  • Assay can be completed within 5 hours

Application Notes

Kit Components
  • 96-well Strip Microplate pre-coated with DNA probes
  • DNA Binding Buffer
  • Positive Control Sample
  • Specific Competitor DNA probe
  • Non-specific Competitor DNA probe
  • Assay Reagent
  • DTT
  • Wash Buffer
  • Primary Antibody
  • HRP-conjugated Secondary Antibody
  • Antibody Diluent Buffer
  • TMB One-Step Substrate Reagent
  • Stop Solution
Other Materials Required
  • Distilled or deionized water
  • 100 ml and 1 liter graduated cylinders
  • Tubes to prepare sample dilutions
  • Absorbent paper
  • Precision pipettes to deliver 2 µl to 1 ml volumes
  • Adjustable 1-25 ml pipettes for reagent preparation
  • < li="">
  • Microplate reader capable of measuring absorbance at 450 nm
Protocol Outline
  1. Prepare all reagents and samples as instructed in the manual.
  2. Add 100 µl of sample or positive control to each well.
  3. Incubate 2 h at RT or O/N at 4 °C.
  4. Add 100 µl of prepared primary antibody to each well.
  5. Incubate 1 h at RT.
  6. Add 100 µl of prepared HRP-secondary antibody to each well.
  7. Incubate 1 h at RT.
  8. Add 100 µl of TMB One-Step Substrate Reagent to each well.
  9. Incubate 30 min at RT.
  10. Add 50 µl of Stop Solution to each well.
  11. Read at 450 nm immediately.

Typical Data

Figure 1Transcription factor assay of c-JUN from nuclear extracts of K562 cells or K562 cells treated with PMA (50 ng/ml) for 3 hr. A. Western blot of c-Jun from cytoplasmic and nuclear fractions. B. Detection of c-Jun from nuclear fractions with the RayBio® Activity Assay Kit.

Transcription factor assay of c-JUN from nuclear extracts of K562 cells or K562 cells treated with PMA (50 ng/ml) for 3 hr.

Figure 2Transcription factor assay of c-Jun from nuclear extracts of K562 cells or K562 cells treated with PMA (50 ng/ml) for 3 hr with the specific competitor or non-specific competitor. The result shows specific binding of c-Jun to the conserved binding site detected by using the RayBio® c-Jun TF Activity Assay Kit.

Transcription factor assay of c-Jun from nuclear extracts of K562 cells or K562 cells treated with PMA (50 ng/ml) for 3 hr with the specific competitor or non-specific competitor.

Storage/Stability

Upon receipt, the positive control should be removed and stored at -20° or -80°C. The remainder of the kit can be stored for up to 6 months at 2-8°C from the date of shipment. Opened Microplate Wells or reagents may be stored for up to 1 month at 2° to 8°C. Return unused wells to the pouch containing desiccant pack, reseal along entire edge. Note: The kit can be used within one year if the whole kit is stored at -20°C upon receipt. Avoid repeated freeze-thaw cycles.

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一、活细胞成像系统原理
目前主流的活细胞成像系统从原理上可以分为两大类:
基于宽场反卷积技术
基于共聚焦技术
两种技术作为目前最流行的活细胞成像技术,均可以实现在维持细胞存活的情况下,快速获取单一焦平面的信号,在具体性能上则各有擅长。
宽场反卷积技术
对光线进行反卷积运算是光学成像领域的成熟技术,最早由美国国家航空航天局开发并成为观察微弱天体信号的标准技术。去卷积和共聚焦技术是光学显微镜领域获得单一焦平面光线的两大主流技术(J.M.Murray, live cell imaging, 2010)。通过将非焦平面的光线还原至焦平面上,大大提高了样品信号的强度以及图像的信噪比。由于去卷积技术设计到大量的后期运算,因此在高性能计算机发明以前,一直受制于运算能力,没有得到大规模的推广。随着近年来计算机性能的大幅提升和价格的下降,去卷积技术逐渐成为光学显微镜的主流技术。一个点光源经过显微镜的光路,由于镜片对光线的衍射和散射,最终呈现在观察者面前的是一个模糊的点,所以点光源变成模糊的点的过程即为卷积。反卷积就是把模糊的点还原成点光源的过程。
以API 公司的DeltaVision 系统为例,其反卷积过程经历以下几步:
1)首先通过无数的计算和实验,得到点光源经过显微镜物镜后变模糊的规律,建立模型。
2)选择完美的物镜,保证样品信号经过物镜后变模糊的规律符合步骤一中得到的模型。
3)将通过显微镜光路的所有的光信号进行收集,因为点光源经过显微镜光路后会变成一个空间中的倒圆锥形,所以在收集信号的时候需要很准确的记录信号的Z 轴信息。
4)对收集到的所有光信号按照步骤一中的模型进行还原,最终将模糊的点还原成清晰的点,客观反映它在空间的位置和强度。
目前去卷积技术越来越广泛地应用于生物学图像的研究中。
共聚焦技术
共聚焦显微镜它采用点光源(point lightsource) 照射标本,在焦平面上形成了一个轮廓分明的小的光点(light spot ) ,该点被照射后发出的荧光被物镜收集,并沿原照射光路回送到探测器。探测器前方有一个针孔(pinhole) ,几何尺寸可调。这样,来自焦平面的光,可以会聚在探测针孔范围之内,而其它来自焦平面上方或下方的散射光,都被挡在探测针孔之外而不能成象。光束扫描器又分为单光束、多光束或狭缝扫描器几种。其中单光束扫描获得的图像质量最好,狭缝扫描器虽然产生图像的速率很高(可达实时水平) ,但其图像信噪比低于单光束扫描,这是因为从狭缝长轴来的漫射光不能被有效遮挡。多光束扫描如碟片式共聚焦是由电动马达驱动Nipkow 盘旋转而实现的,其荧光量较低,速率一般较高。

宽场反卷积技术与共聚焦技术比较表

二、API 高分辨活细胞成像系统的主要特点
DeltaVision 活细胞成像系统有以下优势:
1)高灵敏:得益于精密和高效的光路,以及领先的还原型反卷积技术,DeltaVision 将宽场显微镜的灵敏度和分辨率提高到新的水平,标准配置下最低可以探测到13个GFP 分子,成为目前为止最灵敏的光学显微系统之一。

HIV 病毒通过DC 细胞和T 细胞的接触侵染T 细胞,绿色颗粒为HIV 病毒
2)高速:标配下可达到 21 帧/秒(512×512)的成像速度。当配备EM-CCD 后,最高可达到224 帧/秒(64×64),可用于囊泡运动和钙火花等快速的生理生化过程观察。
3)低光毒性:得益于灵敏度的显著提高,即使微弱的荧光,也可以收集到足够的信号,因此激发光的强度和时间可以大幅度减少。光损伤和光淬灭不再是活细胞和微弱荧光观察的障碍。
4)智能:焦点漂移和细胞脱离视野是活细胞观察的梦魇。DeltaVision 特有的自动对焦(autofocus)和细胞跟踪(cell tracking)功能,不仅可以自动维持焦平面的稳定,而且能够跟踪移动的细胞,使这些问题迎刃而解,长时间连续的活细胞观察不再困难。

通过对荧光信号和细胞轮廓的识别,DeltaVision 可以精确的跟踪需要观察的细胞。
5)免维护:整个系统无易损易耗部件,光源寿命在 5000 小时以上,可正常使用7-10年以上,无需更换光源和校准光路。。系统控制和图形处理基于Linux 操作系统,更适合多线程控制和数据处理,不仅大幅度降低了数据处理时间,也避免了在数据传输过程中感染病毒的危险。人性化的softWoRX软件简单易用,一个对话框内即可完成所有的控制操作。
三、API 高分辨活细胞成像系统的主要功能与应用领域
1)多维成像
目前可以做到六维(XYZ 三维,时间,不同点,不同波长)成像。通过光学切片(optical section)技术,实现对样品的3D 观察,构建样品的立体结构。

经过3D 重建的肿瘤细胞:A 为正面,B 为旋转30 度后,C 为旋转90 度后。
2)3D 还原型反卷积处理
显微镜的分辨率和图像的对比度取决于物镜收集的光学信息。显微镜光路中衍射和折射现象的存在,使得样品信号的位置和强度都发生了变化,降低了系统的分辨率和图像的质量。API 作为对图像数据进行反卷积处理最早的实践者,将显微镜的硬件设计和后期软件处理完美的结合在一起,通过对光学信号的3D 还原型反卷积处理,大大提高了显微镜的灵敏度和分辨率。

原始图像和经过3D 反卷积处理后图像的对比:A,B 为处理前,C,D 为处理后。
经过反卷积处理后,信号的强度和图像对比度得到很大提升。
3)延时摄影
通过软件精确的控制,拍摄的时间间隔从数秒到数小时不等,在长时间拍摄下也不会造成荧光信号的淬灭。根据实验需求的不同,无论单一层面还是3 维结构,都可以获得良好的效果。

正在分裂的Hela 细胞,其中绿色标记微管蛋白,红色标记染色体
4)高速离子成像
结合高速 CCD 和高效的光路,在512×512 像素下仍然可以实现21 帧/秒的成像速度。对于快速的离子浓度的变化,最快可以50-100 帧/秒的速度获取图像。

细胞间钙信号的传递。使用Fluo‐3 标记胞内的钙离子,并给予荧光信号对钙离子的强度进
5.荧光共定位分析
通过比较多个荧光通道的定位情况,即可知道他们在空间上和时间上的分布信息,进而得到相应的荧光信号是否存在相互作用、协同运动、定向运输等。

体外重组的病毒颗粒侵染细胞,绿色标记病毒的壳蛋白,红色标记病毒的RNA结合蛋白。病毒入侵前,由于病毒颗粒完整,绿色信号和红色信号共定位。病毒入侵细胞后,脱掉表面的壳蛋白,绿色信号和红色信号分离。
6)荧光共振能量转移(FRET)
DeltaVision 特制的活细胞滤片组保证CFP/YFP,GFP/mcherry(RFP)荧光强度的精确记录,并进一步计算出蛋白对之间精确的能量转移系数。

计算不同荧光通道荧光信号的强度,进一步可得到能量转移系数。
主要应用领域:
1)细胞迁移与细胞骨架;
2)细胞分裂与细胞周期;
3)细胞信号转导;
4)组织分化与发育;
5)囊泡和蛋白运输;
6)生理学和神经科学;
7)钙离子信号研究;
8)蛋白质与DNA 的相互作用;
9)宿主与病原体相互作用;
10)癌症研究;
11)药理研究;
12)生物物理研究。
在全世界,人们一直在寻找一种方法来恢复大量脱发后的头发生长。在美国核医学协会2012年年度会议上,研究人员陈述了如何采用一种基于生物发光的光学成像技术来监控利用干细胞让新毛囊生长的过程。
目前人们可以获得大量的治疗方法如乳膏和药物来促进头发脱落,但是没有方法非常有效地促进头发生长。已知毛囊干细胞发送信号来指示毛囊和自然头发再生。人们使用一种被称作生物发光的分子成像技术来在细胞水平上展示这些再生过程。生物发生信号是在特异性的化学底物上产生的。这些信号容易被非常灵敏的光学成像系统识别,因而可以观察到在最小的地方(即毛囊干细胞)中正在发生的事情。
韩国庆北大学医学院核医学部门主任和教授Byeong-Cheol Ahn博士说,“利用毛囊干细胞进行头发再生是一种新兴的有望治疗头发脱落的方法。分子成像能够加速这种疗法的开发。这项研究是第一次利用体内分子成像技术来研究毛囊再生。”
当前的研究涉及将毛囊干细胞移植到模式动物中来观察它们是否能够像正常细胞那样生长和增殖。
利用生物发光报告基因的表达产物作用于特定底物发光来非侵入式地追踪毛囊干细胞的治疗过程。目前有来源于萤火虫、甲虫和其他生物发光有机体中的几种生物发光报告基因供人们选择。利用生物发光报告基因进行追踪的策略对干细胞研究是比较理想的,这是因为生物发光只在活细胞中发挥作用。
………………
详细资料请参考:on
http://www.bio1000.com/news/cp/
如何选择适合自己的高内涵仪器,主要考虑三个方面:
1、成像速度
高内涵仪器是在显微镜的基础上搭建的高速显微成像的平台,从所得图像中抽出一张和普通显微镜拍摄的图像没有区别,也就是说,宽场荧光显微镜型高内涵提供的是宽场荧光显微图像,共聚焦荧光显微镜型高内涵提供的是共聚焦质量的图像。
高内涵仪器和普通显微镜最本质的区别在于成像速度极大提高,如果每个孔取一个视野,双色荧光,Hoechst染细胞核,EGFP标记细胞器,硬件自动聚焦,GE Healthcare的IN Cell 2000可以在约3分钟内对整块96孔板成像,在短短几分钟内得到将近200张照片。IN Cell 2000能够高速成像是因为:1)明亮的光源,和显微镜以液体光导纤维相连,光的传输效率高,显著缩短曝光时间;2)大芯片CCD相机可选择,成像视野约是标准芯片相机成像视野的四倍,大芯片CCD相机一个视野就有可能捕捉到足够的细胞用于统计学分析,节省很多时间;3)在线细胞计数功能:微孔板各个孔中细胞的生长状态可能会不同,在线细胞计数针对不同的孔自动调整拍摄视野数量,整体缩短实验时间;4)自动聚焦:是提高成像速度的关键,IN Cell 2000提供基于激光的硬件自动聚焦和基于图像对比度的软件自动聚焦,二者可结合使用。
需要注意的是,宽场荧光显微镜型高内涵比普通宽场荧光显微镜成像速度快,共聚焦型高内涵比共聚焦显微镜成像速度快,而共聚焦型高内涵未必比普通宽场荧光显微镜成像速度快,所以用户需要根据实验的需要来选择适合自己的高内涵仪器。IN Cell 2000虽然不是共聚焦高内涵,但其独有的去卷积图像复原功能可以显著提高图像的对比度和分辨率,提供可以和共聚焦图像媲美的高质量的图像。
2、图像质量和成像速度之间的平衡
科研用户既希望成像速度快,又希望图像质量好,可以考虑GE Healthcare的IN Cell 6000。它是以激光为光源的可变光阑线扫描共聚焦高内涵仪器,拥有专利的光学系统,成像完全可调:光阑完全打开时成像速度最快,完全共聚焦模式去除背景最有效,光阑打开的程度在1-3 AU之间可调,可以针对不同的需求调节共聚焦程度达到成像速度和图像质量的优化组合。IN Cell 6000感光成像采用550万像素新一代sCMOS相机,噪音比CCD相机低五倍,超高灵敏度并缩短曝光时间,比标准相机的视野大四倍。
3、图像分析软件
科研用户检测的指标复杂多样,除了基本的模块式分析工具,还需要有更强大的分析软件允许用户自主定义分析程序。GE Healthcare的高内涵平台除了基本的分析工具,还提供IN Cell Developer Toolbox 客户自定义分析软件,可以分析各种实验的图像结果。针对特定的实验,用户使用一系列的图像分析工具来编写自己的分析程序,包括:高级区分(segmentation)工具,图像处理工具,自定义测量值,宏子程序等。Developer Toolbox曾获得2006年全球最佳生物图像分析软件奖(美国知名科学杂志Scientific Computing颁发)。
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IN Cell Miner HCM数据管理软件以经过验证的 EMC Documentum 软件为基础,可以方便地注释、建档、检索、存储高内涵图像和数据。研究机构的所有使用者可以分享和比较数据,最大限度地挖掘和实现这些数据的价值。快速制做精美的数据图,用于工作展示、技术交流和文章发表。
IN Cell 2000和IN Cell 6000都可以对玻片成像,透射光成像有三种模式可选(明场、相差和微分干涉),可以提供温度、湿度和CO2用于活细胞的长时间观察,有自动移液加样模块用于动力学分析。
此外,IN Cell平台独有的三种功能为高内涵实验提供更多的帮助:1)预览扫描功能:可以在任何放大倍数下对任意区域进行预览扫描,帮助了解样品概况,确定感兴趣的区域和视野的分布,如果需要,可以对整个微孔板或者整张盖玻片进行预览扫描。2)整孔成像功能:低倍物镜和大芯片CCD结合使用时,一张照片就可以快速捕捉整孔细胞、大面积组织和小生物体的图像,在用高倍物镜成像前可以快速确定感兴趣区域的位置,也不会漏掉偶发事件。3)手动显微镜模式:当前视野全屏显示,鼠标移动到四周可以显示4组成像工具,分辨率更高,调整成像参数后,可以实时观察效果。
我单位提供小动物超声、光声成像服务,有需要可以联系!
荧光分子开光怎么用于生物成像
荧光高分子在生物成像中的应用;摘要:生物荧光成像技术在生命科学、医学及相关交叉;关键词:荧光高分子生物成像生物标记;直接在活体细胞内研究细胞内分子或器官的生物意义是;1荧光材料简介;荧光材料主要分为三类:无机荧光纳米粒子、有机荧光;新型荧光高分子材料是当前材料学科研究的热点;相对荧光小分子而言,荧光高分子作为一种新型功能材;生色团以化学键结合在高分子中,不容

荧光高分子在生物成像中的应用

摘要:生物荧光成像技术在生命科学、医学及相关交叉领域具有重要应用与广阔前景。荧光材料主要分为无机纳米荧光材料、有机小分子荧光材料和有机高分子荧光材料。目前,这三类荧光材料在生物成像方面均有一定的研究与使用,比如Zn2+型探针、荧光共振能量转移(Fluorescence
Resonance Energy Transfer, FRET)探针、荧光蛋白等[1]。本文将对有机高分子荧光材料及其在生物成像中的应用进行介绍。

关键词:荧光 高分子 生物成像 生物标记

直接在活体细胞内研究细胞内分子或器官的生物意义是后基因组时代的一个巨大挑战。如果可以将细胞内的分子或体内器官进行可视化,则可以直接研究其生化活动与功能。生物成像技术(Biological
Imaging)是近年来发展起来的一项分子、基因表达的分析检测系统。利用荧光探针(Fluorescent
Probe),对特定分子或器官进行标记,利用灵敏的检测方法,让研究人员能够直接监控活体生物体内肿瘤的生长及转移、感染性疾病发展过程、特定基因的表达等生物学过程。传统的动物实验方法需要在不同的时间点宰杀实验动物以获得数据,得到多个时间点的实验结果。相比之下,可见光体内成像通过对同一组实验对象在不同时间点进行记录,跟踪同一观察目标(标记细胞及基因)的移动及变化,所得的数据更加真实可信。因其操作极其简单、所得结果直观、灵敏度高等特点,已广泛应用于生命科学、医学研究及药物开发等方面。

DNAzure蓝色核酸凝胶染料是一种超敏感试剂,用于在琼脂或聚丙烯酰胺凝胶中可见的dsDNA染色。这种染色的灵敏度和市场上普遍的核酸荧光染料相当。检测下限能达到1ng。这项技术的关键是这种DNA结合染料在强光下能从无色变成深蓝色

DNAzure特点:

在白炽灯强光或蓝光照射下,20分钟可见深蓝色带

超灵敏检测,检测下限能到1ngDNA

简化DNA带的割胶过程,不会造成紫外线下的DNA损伤

兼容后续的测序和克隆

不需要用到昂贵的凝胶成像系统,方便在简陋条件下的核酸研究

染色后的凝胶和条带可以长期储存


CQ1高内涵细胞成像分析系统123
Tiffanytingabc2017-11-06
CQ1是一款典型高内涵细胞成像分析系统,因为它由三个部分组成:全自动高速显微成像,全自动图像分析和数据管理。全自动高速显微成像在短时间内生成大量的图像,全自动图像分析从这些图像中提取大量的数据,数据管理软件负责建档存储、注释比较、检索分享这些图像和数据。
高内涵技术实现了高速显微成像,以前耗时费力的工作瞬间完成,综合海量信息更快做出决策。在药物靶标的确认,化合物的药理和毒性筛选中高内涵技术优势明显,对于复杂细胞学机理的研究,高内涵技术所提供的有价值的信息可以帮助研究人员在日益激烈的科研竞赛中胜出。高内涵技术消除了人为偏差,人会选择比较好的细胞来拍摄和分析,而机器是客观的,所有样品的成像分析条件是完全相同的。
总之,这是一款超快速、稳定、灵活、模块化的成像系统,能够对细胞器、细胞、组织和整个生物体开展显微镜观察和自动化的高内涵筛选。CQ1有多种可选模块和附件,可根据研究人员的具体需求来配置。它可在多个模式下使用,包括全孔成像、在线细胞计数和全自动显微镜。这让研究人员能够高效地优化分析设置,开展简单或复杂的高通量(配合机器人组件)高内涵分析。系统融合了直观且易用的工具,可简化不同样品类型的成像过程,实现广泛的应用,包括化合物筛选、预测毒理学、蛋白定位和运输、功能研究以及干细胞分析等。
高分辨率活细胞成像系统 123
我了割草啊372017-11-06
一、活细胞成像系统原理
目前主流的活细胞成像系统从原理上可以分为两大类:
基于宽场反卷积技术
基于共聚焦技术
两种技术作为目前最流行的活细胞成像技术,均可以实现在维持细胞存活的情况下,快速获取单一焦平面的信号,在具体性能上则各有擅长。
宽场反卷积技术
对光线进行反卷积运算是光学成像领域的成熟技术,最早由美国国家航空航天局开发并成为观察微弱天体信号的标准技术。去卷积和共聚焦技术是光学显微镜领域获得单一焦平面光线的两大主流技术(J.M.Murray, live cell imaging, 2010)。通过将非焦平面的光线还原至焦平面上,大大提高了样品信号的强度以及图像的信噪比。由于去卷积技术设计到大量的后期运算,因此在高性能计算机发明以前,一直受制于运算能力,没有得到大规模的推广。随着近年来计算机性能的大幅提升和价格的下降,去卷积技术逐渐成为光学显微镜的主流技术。一个点光源经过显微镜的光路,由于镜片对光线的衍射和散射,最终呈现在观察者面前的是一个模糊的点,所以点光源变成模糊的点的过程即为卷积。反卷积就是把模糊的点还原成点光源的过程。
以API 公司的DeltaVision 系统为例,其反卷积过程经历以下几步:
1)首先通过无数的计算和实验,得到点光源经过显微镜物镜后变模糊的规律,建立模型。
2)选择完美的物镜,保证样品信号经过物镜后变模糊的规律符合步骤一中得到的模型。
3)将通过显微镜光路的所有的光信号进行收集,因为点光源经过显微镜光路后会变成一个空间中的倒圆锥形,所以在收集信号的时候需要很准确的记录信号的Z 轴信息。
4)对收集到的所有光信号按照步骤一中的模型进行还原,最终将模糊的点还原成清晰的点,客观反映它在空间的位置和强度。
目前去卷积技术越来越广泛地应用于生物学图像的研究中。
共聚焦技术
共聚焦显微镜它采用点光源(point lightsource) 照射标本,在焦平面上形成了一个轮廓分明的小的光点(light spot ) ,该点被照射后发出的荧光被物镜收集,并沿原照射光路回送到探测器。探测器前方有一个针孔(pinhole) ,几何尺寸可调。这样,来自焦平面的光,可以会聚在探测针孔范围之内,而其它来自焦平面上方或下方的散射光,都被挡在探测针孔之外而不能成象。光束扫描器又分为单光束、多光束或狭缝扫描器几种。其中单光束扫描获得的图像质量最好,狭缝扫描器虽然产生图像的速率很高(可达实时水平) ,但其图像信噪比低于单光束扫描,这是因为从狭缝长轴来的漫射光不能被有效遮挡。多光束扫描如碟片式共聚焦是由电动马达驱动Nipkow 盘旋转而实现的,其荧光量较低,速率一般较高。

宽场反卷积技术与共聚焦技术比较表

二、API 高分辨活细胞成像系统的主要特点
DeltaVision 活细胞成像系统有以下优势:
1)高灵敏:得益于精密和高效的光路,以及领先的还原型反卷积技术,DeltaVision 将宽场显微镜的灵敏度和分辨率提高到新的水平,标准配置下最低可以探测到13个GFP 分子,成为目前为止最灵敏的光学显微系统之一。

HIV 病毒通过DC 细胞和T 细胞的接触侵染T 细胞,绿色颗粒为HIV 病毒
2)高速:标配下可达到 21 帧/秒(512×512)的成像速度。当配备EM-CCD 后,最高可达到224 帧/秒(64×64),可用于囊泡运动和钙火花等快速的生理生化过程观察。
3)低光毒性:得益于灵敏度的显著提高,即使微弱的荧光,也可以收集到足够的信号,因此激发光的强度和时间可以大幅度减少。光损伤和光淬灭不再是活细胞和微弱荧光观察的障碍。
4)智能:焦点漂移和细胞脱离视野是活细胞观察的梦魇。DeltaVision 特有的自动对焦(autofocus)和细胞跟踪(cell tracking)功能,不仅可以自动维持焦平面的稳定,而且能够跟踪移动的细胞,使这些问题迎刃而解,长时间连续的活细胞观察不再困难。

通过对荧光信号和细胞轮廓的识别,DeltaVision 可以精确的跟踪需要观察的细胞。
5)免维护:整个系统无易损易耗部件,光源寿命在 5000 小时以上,可正常使用7-10年以上,无需更换光源和校准光路。。系统控制和图形处理基于Linux 操作系统,更适合多线程控制和数据处理,不仅大幅度降低了数据处理时间,也避免了在数据传输过程中感染病毒的危险。人性化的softWoRX软件简单易用,一个对话框内即可完成所有的控制操作。
三、API 高分辨活细胞成像系统的主要功能与应用领域
1)多维成像
目前可以做到六维(XYZ 三维,时间,不同点,不同波长)成像。通过光学切片(optical section)技术,实现对样品的3D 观察,构建样品的立体结构。

经过3D 重建的肿瘤细胞:A 为正面,B 为旋转30 度后,C 为旋转90 度后。
2)3D 还原型反卷积处理
显微镜的分辨率和图像的对比度取决于物镜收集的光学信息。显微镜光路中衍射和折射现象的存在,使得样品信号的位置和强度都发生了变化,降低了系统的分辨率和图像的质量。API 作为对图像数据进行反卷积处理最早的实践者,将显微镜的硬件设计和后期软件处理完美的结合在一起,通过对光学信号的3D 还原型反卷积处理,大大提高了显微镜的灵敏度和分辨率。

原始图像和经过3D 反卷积处理后图像的对比:A,B 为处理前,C,D 为处理后。
经过反卷积处理后,信号的强度和图像对比度得到很大提升。
3)延时摄影
通过软件精确的控制,拍摄的时间间隔从数秒到数小时不等,在长时间拍摄下也不会造成荧光信号的淬灭。根据实验需求的不同,无论单一层面还是3 维结构,都可以获得良好的效果。

正在分裂的Hela 细胞,其中绿色标记微管蛋白,红色标记染色体
4)高速离子成像
结合高速 CCD 和高效的光路,在512×512 像素下仍然可以实现21 帧/秒的成像速度。对于快速的离子浓度的变化,最快可以50-100 帧/秒的速度获取图像。

细胞间钙信号的传递。使用Fluo‐3 标记胞内的钙离子,并给予荧光信号对钙离子的强度进
5.荧光共定位分析
通过比较多个荧光通道的定位情况,即可知道他们在空间上和时间上的分布信息,进而得到相应的荧光信号是否存在相互作用、协同运动、定向运输等。

体外重组的病毒颗粒侵染细胞,绿色标记病毒的壳蛋白,红色标记病毒的RNA结合蛋白。病毒入侵前,由于病毒颗粒完整,绿色信号和红色信号共定位。病毒入侵细胞后,脱掉表面的壳蛋白,绿色信号和红色信号分离。
6)荧光共振能量转移(FRET)
DeltaVision 特制的活细胞滤片组保证CFP/YFP,GFP/mcherry(RFP)荧光强度的精确记录,并进一步计算出蛋白对之间精确的能量转移系数。

计算不同荧光通道荧光信号的强度,进一步可得到能量转移系数。
主要应用领域:
1)细胞迁移与细胞骨架;
2)细胞分裂与细胞周期;
3)细胞信号转导;
4)组织分化与发育;
5)囊泡和蛋白运输;
6)生理学和神经科学;
7)钙离子信号研究;
8)蛋白质与DNA 的相互作用;
9)宿主与病原体相互作用;
10)癌症研究;
11)药理研究;
12)生物物理研究。
《缓冲溶液》PPT课件123
myRain11102017-11-07
请举出至少三种应用
Cell Press 的期刊是生物医学方面最为权威的学术期刊。通过Cell Press 网站或ScienceDirect,您可以服务其出版的14种期刊网络版,迅速地获得最新的科研成果。15种期刊名称及简介如下(可以通过主页的滚动图片菜单查看,或者cell press 简介):
Cell
American Journal of Human Genetics
Biophysical Journal
Cell Host & Microbe
Cell Metabolism
Cell Reports
Cell Stem Cell
Molecular Cell
Neuron
Immunity
Current Biology
Structure
Developmental Cell
Cancer Cell
Chemistry & Biology

期刊简介如下:
Cell
三十年来,Cell 始终关注生物学方面最前沿的第一手学术资料,在出版业中树立起行业典范。从未有其它刊物能如Cell 一般长期为用户带来大批高质量的学术文章。文章质量高居“生物化学与分子生物学”门类榜首
Immunity
全面介绍免疫学方面的相关知识。出版学术论文和评论,超越狭义上的免疫学概念,将外延扩展至与其相关,或与有机体免疫系统相互影响的所有系统中。
Cancer Cell
致力于将新型的科研成果应用于基础和临床癌症群体,促进两者间的沟通交流。在癌症研究领域,Cancer Cell已成为出版前沿学术论文的权威刊物。
Structure
作为细胞和分子生物学原创研究、深入探讨或结构调研信息方面的权威论坛,Structure总能提供最丰富的资料,让读者及时掌握其研究领域的最新资讯。
Current Biology
涵盖整个生物学的相关知识,紧扣主题,以独特的视角将权威的学术论文与深入分析结合起来。跨学科分析、快速敏锐的评论,Current Biology 无疑是寻求出版、阅读生物学最新学术研究成果之人士的首选。
Neuron
关注分子、细胞和发展神经生理学方面的学术成果,同时Neuron 也致力于系统研究(包括视觉、听觉、运行和边缘系统)、神经成像、学习、记忆、行为和附加认知学习等方面的科技动态。
Developmental Cell
全面介绍细胞生物学和发展生物学领域的相关知识。主要出版各种评论资料及核心研究成果。
Molecular Cell
创建于1997 年,作为Cell配套刊物的Molecular Cell在分子分析学领域独占鳌头。其研究主题涵盖从基础结构到人类病理基础等诸多方面。
Chemistry & Biology
创建时即以连系化学合成学和生物调研学为已任,现已成为本方面最具影响力的刊物。致力于出版最为优秀的学术成果,尤其适用于从事蛋白质阶段前沿研究的研究者。

trends journal也是其旗下的网络期刊,影响因子也大都在10左右,这是Cell Press从2007年开始出版的Trends (趋势)期刊。

如有疑问请追问,解决问题还望采纳。
把图贴出来,我讲给你听
全内反射荧光显微镜介绍123
淡定°MP98PW2021-07-29
将高清晰图像与使用简便的系统,以及广泛的宽视野显微镜应用相结合。研究者使用该显微镜除了可以完成从高速成像到TIRF的日常试验之外,还可以获得超清的影像。 联合全内反射荧光(TIRF)与快速荧光共振能量转移(FRET) 分析技术,适用于细胞膜分析或单分子结构分析;小泡跟踪、荧光活细胞成像或延时成像与其它功能确保生成高质量的图像,从而显著提高了科学研究的结果。


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