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Details
Description:Mouse monoclonal antibody to human Transforming Growth Factor beta (TGF-β)
Purification: Protein G affinity purified
Product Type:Primary antibody
Target Protein:Human TGF-β
Immunogen:TGF-βfrom human platelets
Fusion Myeloma: Sp2/0-Ag14
Specificity:Western blotting demonstrated that this antibody reacts with the dimeric (25kDa) and monomeric (12.5kDa.) forms of TGF-β under both non-reducing and reducing conditions respectively. This antibody recognizes both human platelet-derived and recombinant TGF-β in ELISA.
Species Reactivity: Human, others not tested.
Host / Isotype: Mouse, IgG1 Kappa
Formulation: Lyophilized in 0.01M PBS, pH 7.0.
Reconstitution:Double distilled water is recommended and to adjust the final concentration to 1.00mg/mL.
Storage: Store at -20oC
Research Area:Growth Factors and Their Receptors, Angiogenesis
Background:
Transforming growth factor beta (TGF-β) has three isoforms (TGF-β1, TGF-β2, and TGF-β3) with similar functions.
The cytokine is a homodimer linked by disulfide bind. Inside cells, the cytokine forms a small latent complex with latent associated peptide (LAP). This small complex binds to latent TGF-β binding protein (LTBP) to be secreted to extra-cellular matrix. Disassociation of the latent proteins from TGF-β results in the release of the cytokine to its receptor. The process is called activation, which can be influenced by various factors, including proteases, metalloproteases, extreme pH, mild acidic condition, reactive oxygen species and integrins.
TGF-β is an anti-proliferation factor in normal cells. It increases the synthesis of p15 and p21, which can block the cyclin: CDK complex, and causes cells to stop at G1 phase. The cytokine can induce apoptosis through both SMAD and DAXX pathways. In cancer cells, TGF-β signaling is altered and TGF-β no longer stops cell proliferation.
Applications:
Western Blot:This antibody, when used at concentration of 50-500ng/mL, will allow visualization of 100-500ng/lane of TGF-β.
Neutralizing Activity: This antibody neutralizes TGF-β activity in vitro and in vivo.In an inhibition assay of CCL/64 cell growth and in a NRK-49F colony forming assay, the antibody neutralized TGF-β bioactivities. The effect of micro-injection of this antibody into one blastomere of two cell stage Xenopus embryos indicated that it was also able to neutralize the bioactivity of TGF-βin vivo.
Immunohistochemistry: Can be used in immunohistochemical applications to locate TGF-β within tissues.
References:
If research is published using this product, please inform Anogen in order to cite the reference on this datasheet. Anogen will provide one unit of product in the same category as gratitude.
Additional
Additional Information
| Product Specificity | mAb anti-Human TGF-β, 2C6 |
|---|---|
| Application | N, IHC, WB |
| Size | 0.1 mg |
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高内涵技术实现了高速显微成像,以前耗时费力的工作瞬间完成,综合海量信息更快做出决策。在药物靶标的确认,化合物的药理和毒性筛选中高内涵技术优势明显,对于复杂细胞学机理的研究,高内涵技术所提供的有价值的信息可以帮助研究人员在日益激烈的科研竞赛中胜出。高内涵技术消除了人为偏差,人会选择比较好的细胞来拍摄和分析,而机器是客观的,所有样品的成像分析条件是完全相同的。
总之,这是一款超快速、稳定、灵活、模块化的成像系统,能够对细胞器、细胞、组织和整个生物体开展显微镜观察和自动化的高内涵筛选。CQ1有多种可选模块和附件,可根据研究人员的具体需求来配置。它可在多个模式下使用,包括全孔成像、在线细胞计数和全自动显微镜。这让研究人员能够高效地优化分析设置,开展简单或复杂的高通量(配合机器人组件)高内涵分析。系统融合了直观且易用的工具,可简化不同样品类型的成像过程,实现广泛的应用,包括化合物筛选、预测毒理学、蛋白定位和运输、功能研究以及干细胞分析等。
为了提高活体细胞的显微图像分辨率虽然有多种方法,然而至今还未找到一种公认的处理所有活体细胞图像方法。本文采用伪彩色处理与多种图像处理方法结合处理50幅原始图像,并比较处理前后的卵母细胞图像 ,使用SPSS10.0统计软件包加以处理 ,探讨处理活体细胞是否能提高图像的分辨率及系统是否适用于活体细胞的图像处理 ,为今后临床和科研研究活体细胞创造条件。
1、成像速度
高内涵仪器是在显微镜的基础上搭建的高速显微成像的平台,从所得图像中抽出一张和普通显微镜拍摄的图像没有区别,也就是说,宽场荧光显微镜型高内涵提供的是宽场荧光显微图像,共聚焦荧光显微镜型高内涵提供的是共聚焦质量的图像。
高内涵仪器和普通显微镜最本质的区别在于成像速度极大提高,如果每个孔取一个视野,双色荧光,Hoechst染细胞核,EGFP标记细胞器,硬件自动聚焦,GE Healthcare的IN Cell 2000可以在约3分钟内对整块96孔板成像,在短短几分钟内得到将近200张照片。IN Cell 2000能够高速成像是因为:1)明亮的光源,和显微镜以液体光导纤维相连,光的传输效率高,显著缩短曝光时间;2)大芯片CCD相机可选择,成像视野约是标准芯片相机成像视野的四倍,大芯片CCD相机一个视野就有可能捕捉到足够的细胞用于统计学分析,节省很多时间;3)在线细胞计数功能:微孔板各个孔中细胞的生长状态可能会不同,在线细胞计数针对不同的孔自动调整拍摄视野数量,整体缩短实验时间;4)自动聚焦:是提高成像速度的关键,IN Cell 2000提供基于激光的硬件自动聚焦和基于图像对比度的软件自动聚焦,二者可结合使用。
需要注意的是,宽场荧光显微镜型高内涵比普通宽场荧光显微镜成像速度快,共聚焦型高内涵比共聚焦显微镜成像速度快,而共聚焦型高内涵未必比普通宽场荧光显微镜成像速度快,所以用户需要根据实验的需要来选择适合自己的高内涵仪器。IN Cell 2000虽然不是共聚焦高内涵,但其独有的去卷积图像复原功能可以显著提高图像的对比度和分辨率,提供可以和共聚焦图像媲美的高质量的图像。
2、图像质量和成像速度之间的平衡
科研用户既希望成像速度快,又希望图像质量好,可以考虑GE Healthcare的IN Cell 6000。它是以激光为光源的可变光阑线扫描共聚焦高内涵仪器,拥有专利的光学系统,成像完全可调:光阑完全打开时成像速度最快,完全共聚焦模式去除背景最有效,光阑打开的程度在1-3 AU之间可调,可以针对不同的需求调节共聚焦程度达到成像速度和图像质量的优化组合。IN Cell 6000感光成像采用550万像素新一代sCMOS相机,噪音比CCD相机低五倍,超高灵敏度并缩短曝光时间,比标准相机的视野大四倍。
3、图像分析软件
科研用户检测的指标复杂多样,除了基本的模块式分析工具,还需要有更强大的分析软件允许用户自主定义分析程序。GE Healthcare的高内涵平台除了基本的分析工具,还提供IN Cell Developer Toolbox 客户自定义分析软件,可以分析各种实验的图像结果。针对特定的实验,用户使用一系列的图像分析工具来编写自己的分析程序,包括:高级区分(segmentation)工具,图像处理工具,自定义测量值,宏子程序等。Developer Toolbox曾获得2006年全球最佳生物图像分析软件奖(美国知名科学杂志Scientific Computing颁发)。
Spotfire是一款用于科学数据分析的可视化分析平台,其最大的特点是通过多种动态的图形(点图、线图、柱状图、饼状图、热图等)和筛选条件,快速对大量的数据进行分析和处理,并可以做出报告或与他人分享结果,做出决策。支持多种客户端界面和Web界面的访问和显示。IN Cell 图像分析软件内嵌和Spotfire DecisionSite Basic软件连接的图标,轻松使用数据可视化分析工具。
IN Cell Miner HCM数据管理软件以经过验证的 EMC Documentum 软件为基础,可以方便地注释、建档、检索、存储高内涵图像和数据。研究机构的所有使用者可以分享和比较数据,最大限度地挖掘和实现这些数据的价值。快速制做精美的数据图,用于工作展示、技术交流和文章发表。
IN Cell 2000和IN Cell 6000都可以对玻片成像,透射光成像有三种模式可选(明场、相差和微分干涉),可以提供温度、湿度和CO2用于活细胞的长时间观察,有自动移液加样模块用于动力学分析。
此外,IN Cell平台独有的三种功能为高内涵实验提供更多的帮助:1)预览扫描功能:可以在任何放大倍数下对任意区域进行预览扫描,帮助了解样品概况,确定感兴趣的区域和视野的分布,如果需要,可以对整个微孔板或者整张盖玻片进行预览扫描。2)整孔成像功能:低倍物镜和大芯片CCD结合使用时,一张照片就可以快速捕捉整孔细胞、大面积组织和小生物体的图像,在用高倍物镜成像前可以快速确定感兴趣区域的位置,也不会漏掉偶发事件。3)手动显微镜模式:当前视野全屏显示,鼠标移动到四周可以显示4组成像工具,分辨率更高,调整成像参数后,可以实时观察效果。
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目前主流的活细胞成像系统从原理上可以分为两大类:
基于宽场反卷积技术
基于共聚焦技术
两种技术作为目前最流行的活细胞成像技术,均可以实现在维持细胞存活的情况下,快速获取单一焦平面的信号,在具体性能上则各有擅长。
宽场反卷积技术
对光线进行反卷积运算是光学成像领域的成熟技术,最早由美国国家航空航天局开发并成为观察微弱天体信号的标准技术。去卷积和共聚焦技术是光学显微镜领域获得单一焦平面光线的两大主流技术(J.M.Murray, live cell imaging, 2010)。通过将非焦平面的光线还原至焦平面上,大大提高了样品信号的强度以及图像的信噪比。由于去卷积技术设计到大量的后期运算,因此在高性能计算机发明以前,一直受制于运算能力,没有得到大规模的推广。随着近年来计算机性能的大幅提升和价格的下降,去卷积技术逐渐成为光学显微镜的主流技术。一个点光源经过显微镜的光路,由于镜片对光线的衍射和散射,最终呈现在观察者面前的是一个模糊的点,所以点光源变成模糊的点的过程即为卷积。反卷积就是把模糊的点还原成点光源的过程。
以API 公司的DeltaVision 系统为例,其反卷积过程经历以下几步:
1)首先通过无数的计算和实验,得到点光源经过显微镜物镜后变模糊的规律,建立模型。
2)选择完美的物镜,保证样品信号经过物镜后变模糊的规律符合步骤一中得到的模型。
3)将通过显微镜光路的所有的光信号进行收集,因为点光源经过显微镜光路后会变成一个空间中的倒圆锥形,所以在收集信号的时候需要很准确的记录信号的Z 轴信息。
4)对收集到的所有光信号按照步骤一中的模型进行还原,最终将模糊的点还原成清晰的点,客观反映它在空间的位置和强度。
目前去卷积技术越来越广泛地应用于生物学图像的研究中。
共聚焦技术
共聚焦显微镜它采用点光源(point lightsource) 照射标本,在焦平面上形成了一个轮廓分明的小的光点(light spot ) ,该点被照射后发出的荧光被物镜收集,并沿原照射光路回送到探测器。探测器前方有一个针孔(pinhole) ,几何尺寸可调。这样,来自焦平面的光,可以会聚在探测针孔范围之内,而其它来自焦平面上方或下方的散射光,都被挡在探测针孔之外而不能成象。光束扫描器又分为单光束、多光束或狭缝扫描器几种。其中单光束扫描获得的图像质量最好,狭缝扫描器虽然产生图像的速率很高(可达实时水平) ,但其图像信噪比低于单光束扫描,这是因为从狭缝长轴来的漫射光不能被有效遮挡。多光束扫描如碟片式共聚焦是由电动马达驱动Nipkow 盘旋转而实现的,其荧光量较低,速率一般较高。
宽场反卷积技术与共聚焦技术比较表
二、API 高分辨活细胞成像系统的主要特点
DeltaVision 活细胞成像系统有以下优势:
1)高灵敏:得益于精密和高效的光路,以及领先的还原型反卷积技术,DeltaVision 将宽场显微镜的灵敏度和分辨率提高到新的水平,标准配置下最低可以探测到13个GFP 分子,成为目前为止最灵敏的光学显微系统之一。
HIV 病毒通过DC 细胞和T 细胞的接触侵染T 细胞,绿色颗粒为HIV 病毒
2)高速:标配下可达到 21 帧/秒(512×512)的成像速度。当配备EM-CCD 后,最高可达到224 帧/秒(64×64),可用于囊泡运动和钙火花等快速的生理生化过程观察。
3)低光毒性:得益于灵敏度的显著提高,即使微弱的荧光,也可以收集到足够的信号,因此激发光的强度和时间可以大幅度减少。光损伤和光淬灭不再是活细胞和微弱荧光观察的障碍。
4)智能:焦点漂移和细胞脱离视野是活细胞观察的梦魇。DeltaVision 特有的自动对焦(autofocus)和细胞跟踪(cell tracking)功能,不仅可以自动维持焦平面的稳定,而且能够跟踪移动的细胞,使这些问题迎刃而解,长时间连续的活细胞观察不再困难。
通过对荧光信号和细胞轮廓的识别,DeltaVision 可以精确的跟踪需要观察的细胞。
5)免维护:整个系统无易损易耗部件,光源寿命在 5000 小时以上,可正常使用7-10年以上,无需更换光源和校准光路。。系统控制和图形处理基于Linux 操作系统,更适合多线程控制和数据处理,不仅大幅度降低了数据处理时间,也避免了在数据传输过程中感染病毒的危险。人性化的softWoRX软件简单易用,一个对话框内即可完成所有的控制操作。
三、API 高分辨活细胞成像系统的主要功能与应用领域
1)多维成像
目前可以做到六维(XYZ 三维,时间,不同点,不同波长)成像。通过光学切片(optical section)技术,实现对样品的3D 观察,构建样品的立体结构。
经过3D 重建的肿瘤细胞:A 为正面,B 为旋转30 度后,C 为旋转90 度后。
2)3D 还原型反卷积处理
显微镜的分辨率和图像的对比度取决于物镜收集的光学信息。显微镜光路中衍射和折射现象的存在,使得样品信号的位置和强度都发生了变化,降低了系统的分辨率和图像的质量。API 作为对图像数据进行反卷积处理最早的实践者,将显微镜的硬件设计和后期软件处理完美的结合在一起,通过对光学信号的3D 还原型反卷积处理,大大提高了显微镜的灵敏度和分辨率。
原始图像和经过3D 反卷积处理后图像的对比:A,B 为处理前,C,D 为处理后。
经过反卷积处理后,信号的强度和图像对比度得到很大提升。
3)延时摄影
通过软件精确的控制,拍摄的时间间隔从数秒到数小时不等,在长时间拍摄下也不会造成荧光信号的淬灭。根据实验需求的不同,无论单一层面还是3 维结构,都可以获得良好的效果。
正在分裂的Hela 细胞,其中绿色标记微管蛋白,红色标记染色体
4)高速离子成像
结合高速 CCD 和高效的光路,在512×512 像素下仍然可以实现21 帧/秒的成像速度。对于快速的离子浓度的变化,最快可以50-100 帧/秒的速度获取图像。
细胞间钙信号的传递。使用Fluo‐3 标记胞内的钙离子,并给予荧光信号对钙离子的强度进
5.荧光共定位分析
通过比较多个荧光通道的定位情况,即可知道他们在空间上和时间上的分布信息,进而得到相应的荧光信号是否存在相互作用、协同运动、定向运输等。
体外重组的病毒颗粒侵染细胞,绿色标记病毒的壳蛋白,红色标记病毒的RNA结合蛋白。病毒入侵前,由于病毒颗粒完整,绿色信号和红色信号共定位。病毒入侵细胞后,脱掉表面的壳蛋白,绿色信号和红色信号分离。
6)荧光共振能量转移(FRET)
DeltaVision 特制的活细胞滤片组保证CFP/YFP,GFP/mcherry(RFP)荧光强度的精确记录,并进一步计算出蛋白对之间精确的能量转移系数。
计算不同荧光通道荧光信号的强度,进一步可得到能量转移系数。
主要应用领域:
1)细胞迁移与细胞骨架;
2)细胞分裂与细胞周期;
3)细胞信号转导;
4)组织分化与发育;
5)囊泡和蛋白运输;
6)生理学和神经科学;
7)钙离子信号研究;
8)蛋白质与DNA 的相互作用;
9)宿主与病原体相互作用;
10)癌症研究;
11)药理研究;
12)生物物理研究。
荧光高分子在生物成像中的应用;摘要:生物荧光成像技术在生命科学、医学及相关交叉;关键词:荧光高分子生物成像生物标记;直接在活体细胞内研究细胞内分子或器官的生物意义是;1荧光材料简介;荧光材料主要分为三类:无机荧光纳米粒子、有机荧光;新型荧光高分子材料是当前材料学科研究的热点;相对荧光小分子而言,荧光高分子作为一种新型功能材;生色团以化学键结合在高分子中,不容
荧光高分子在生物成像中的应用
摘要:生物荧光成像技术在生命科学、医学及相关交叉领域具有重要应用与广阔前景。荧光材料主要分为无机纳米荧光材料、有机小分子荧光材料和有机高分子荧光材料。目前,这三类荧光材料在生物成像方面均有一定的研究与使用,比如Zn2+型探针、荧光共振能量转移(Fluorescence
Resonance Energy Transfer, FRET)探针、荧光蛋白等[1]。本文将对有机高分子荧光材料及其在生物成像中的应用进行介绍。
关键词:荧光 高分子 生物成像 生物标记
直接在活体细胞内研究细胞内分子或器官的生物意义是后基因组时代的一个巨大挑战。如果可以将细胞内的分子或体内器官进行可视化,则可以直接研究其生化活动与功能。生物成像技术(Biological
Imaging)是近年来发展起来的一项分子、基因表达的分析检测系统。利用荧光探针(Fluorescent
Probe),对特定分子或器官进行标记,利用灵敏的检测方法,让研究人员能够直接监控活体生物体内肿瘤的生长及转移、感染性疾病发展过程、特定基因的表达等生物学过程。传统的动物实验方法需要在不同的时间点宰杀实验动物以获得数据,得到多个时间点的实验结果。相比之下,可见光体内成像通过对同一组实验对象在不同时间点进行记录,跟踪同一观察目标(标记细胞及基因)的移动及变化,所得的数据更加真实可信。因其操作极其简单、所得结果直观、灵敏度高等特点,已广泛应用于生命科学、医学研究及药物开发等方面。

