COST REDUCTION AND CONTROL BEST PRACTICES ...
来自 : 蚂蚁淘
Electro-TransformationofYeast
DavidAmberg
- Growcellsto1X10E8orOD600of1.2-1.3.
- Spincellsat5,000rpmfor5min,andwashpelletsinanequalvolumeoficecoldwater.
- Washin1/2volumecoldwater.
- Washin1/25volumeice-cold1M.sorbitol.
- Treatcellswith25mM.DTTfor10minutesatroomtemperature.
- Washcellswith1M.coldsorbitol.
- ResUSPendcellsin1/200originalvolumecold1M.sorbitol.
- Mix50µl.ofcellsuspensionwithnotmorethan5µl.DNA(inlowionicstrengthbuffer).
- Immediatelytapcell/DNAsuspensiontothebottomofa0.2cmcuvette,pulseat1.5kV,200Æ,25µFaradays(pulsetimeÅ5millisec).
- Immediatelyadd1ml.YEPD/1M.sorbitolandallowtorecoveratpermissivetemperatureforonehour.
- Spindowncellsandresuspendin1ml.1M.sorbitol.
- Plateonselectivemedia.
Notethat10ml.istheminimumculturevolumeandthatcellscanbestoredforafewdaysiftheyarenotDTTtreated.
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