Yeast transformation
来自 : 蚂蚁淘
YeastTransformation
- inoculate5-10mlculturewithsinglecolonyandgrowON
- measureOD600nmanddilutetoOD600nm=0.3in50ml
- growfor2-4hrs
- spin,washcellswith25mlH2O
- spin,resUSPendin2ml1xLiAc/0.5xTE
- incubateatRTfor10min
- combineintube:100µlcells,10µlsalmonspermDNA(10mg/ml),upto15µlDNAtobetransformed
- add700µl1xLiAc/1xTE/40%PEGmix
- incubatefor30minat30°C(shakingornotshaking)
- add85µlDMSO
- heatshockat42°Cfor7min
- spin,resuspendcellsin1ml1xTE
- spin,resuspendcellsin0.5ml1xTE
- plate100-200µl/plateandincubateat30°C
Buffers:10xTE:100mMTrispH7.5;10mMEDTA.10xLiAc:1MLiAcinH2O;sterilefilter.50%PEG3350:50%PEG3350inH2O;sterilefilter.
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