
Artikelnummer | KTD3002-1 |
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Artikelgruppe | Biochemische Assays |
Artikelbezeichnung | Protein Quantification Kit (Bradford Assay) |
Spezies-Reaktivität | alle |
Beschreibung | kolorimetrischer Proteinassay zur Quantifizierung von Proteinen |
Inhalt | Albumin-Standard (BSA), Coomassie-Assay-Reagenz |
Nachweisgrenze | 25 µg/ml |
Detektionsbereich | 50-1000 µg/ml |
Zweckbestimmung | nur für Forschungszwecke |
Temperatur - Lagerung | 2-8°C |
Temperatur - Transport | gekühlt |
Packungsgröße | 500 Tests |
Hersteller / Marke | Abbkine Scientific |
- KTD3002-1 – Datenblatt
Abbkine Protein Quantification Kit (Bradford Assay) provides a simple and rapid procedure for determining the concentration of protein in samples. The method utilizes an improved Coomassie blue G reagent which forms a blue complex in the presence of protein. When coomassie dye binds protein in an acidic medium, an immediate shift in absorption maximum occurs from 465nm to 595nm with a concomitant color change from brown to blue.The intensity of the blue complex is proportional to the amount of proteinin the sample.
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小弟是神经科学研究生新生一枚,导师叫我分分钟把钠钾钙离子通道的全细胞记录方法给他,现在查了一些文献有了一些内外液配方,但是不知道电压钳刺激的protocol怎么编。悬赏35蚁豆(基本全部家当)求protocol,只有钙通道的也OK哟~
本人是一名专业研究生,正在参加北京市规培。尽管作为一名专硕,导师交给的却是基础课题,实验需要用到膜片钳,本人对此一无所知,科里实验室目前也没有膜片钳,还要联系外面实验室学习。听一个师兄说,他当初光学技术就有近半年时间,对此真是苦恼,实在觉不出规培能挤出那么多时间。
请问做过的老师,膜片钳学习曲线一般要多久?你们认为我一个专硕在完成规培的前提下能兼顾到膜片钳实验么?
2)内面向外式膜片( inside outpatch)细胞内外和电极内的溶液均可调控,既能较容易地改变细胞内的离子或物质浓度,又能把酶等直接加于膜的内侧面,适宜研究胞内物质对通道活动的影响。但实验中难以改变膜外侧物质,且需浸于低钙液中。常用于研究依赖细胞内钙的离子通道,如钙敏感的钾通道,还可用于细胞内激素和第二信使与通道的调节作用。
3) 外面向外式膜片(outside outpatch)能接触膜的两侧,可以任意改变膜外物质的浓度,有利于研究离子、递质对膜外表面的作用,多用于研究细胞膜外侧受体控制的离子通道。这些受体直接作用于离子通道,而不需经过第二信使系统。因细胞外液容易更换,故加药方便。缺陷是实验中难以改变胞内成分,而且电极管内必须充以低钙液。
4) 全细胞式膜片(whole cell patch)方式使细胞内与浴槽之间的漏流极少。电极本身阻抗(1~10MΩ)与细胞封接后的阻抗相比较低,这种低接触阻抗使单管电压钳容易实现。电极管内与细胞之间弥散交换与平衡快,因而容易控制细胞内液的成分。细胞钳记录的是许多通道的平均电流,有利于综合分析。如果有目的地将膜电位钳制在某一程度,可做到选择性抑制某些通道的活性而只记录某种通道电流的总和,并可在同一细胞上观察几种不同通道的情况。通过改变内部介质,如改变电极液成分,或在电极液中加入所需药物,通过渗透很快改变胞浆成分并达到平衡,该手段在全细胞记录中广泛应用。它适合于小细胞的电压钳位,对于直径大于30μm的细胞很难实现钳位。不足之处是由于电极与细胞间交换快,细胞内环境很容易破坏,因此记录所用的电极液应与胞浆主要成分相同,如高K+,低Na+和Ca2+及一定的缓冲成分和能量代谢所需的物质。
5) 穿孔膜片(perforated patch)是为克服常规全细胞模式的胞质渗漏问题,有学者将与离子亲和的制霉菌素或二性霉素B经微电极灌流到含有类甾醇的细胞膜上,形成只允许一价离子通过的孔,用此法在膜片上做很多导电性孔道,借此对全细胞膜电流进行记录。由于此模式的胞质渗漏极为缓慢,局部串联阻抗较常规全细胞模式高,所以钳制速度很慢,也称为缓慢全细胞模式。
感觉这样的提问没有什么意义
建议,可以自己查阅下资料
电压钳技术是保持细胞膜两侧电压恒定的技术,使细胞膜两次电压稳定在某一个数值,这样就能够测定在这个电位的水平下细胞膜上离子通道的活动情况。
膜片钳技术是固定一片非常小的细胞膜,测定这片膜上的离子通道开放情况,解决了可以单个离子通道活动的测量问题。
现在的膜片钳技术同时包括了以前的电压签技术。
膜片钳技术及其发展概况(烟台绿叶).part1.rar(9216.0k)
膜片钳技术及其发展概况(烟台绿叶).part2.rar(5975.16k)
我在做的是海马神经元的wholecellpatch,入液前给正压并hold,入液后阻值4-5M欧,碰到细胞后阻值有零点几欧的变化。撤掉正压,用嘴吸给负压(无法hold住)进行封接,但是封接时候一直没有阻值变化,更别提升到G欧级别了。我们后来也试过用注射器给负压并hold住,但是封接阻值仍旧没有非常大的变化,甚至到不了50M欧。这是为什么???求问
传统膜片钳技术每次只能记录一个细胞(或一对细胞),对实验人员来说是一项耗时耗力的工作,它不适合在药物开发初期和中期进行大量化合物的筛选,也不适合需要记录大量细胞的基础实验研究。全自动膜片钳技术的出现在很大程度上解决了这些问题,它不仅通量高[3],一次能记录几个甚至几十个细胞,而且从找细胞、形成封接、破膜等整个实验操作实现了自动化,免除了这些操作的复杂与困难。这两个优点使得膜片钳技术的工作效率大大提高了!签于全自动膜片钳技术的这些优点,目前已经广泛的用于药物筛选。