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OZ Biosciences/CombiMag/Starting Kit/KC30200
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- For all types of nucleic acids
Sizes:
- 100 µL: 100 transfections with 1 µg of DNA
- 200 µL: 200 transfections with 1 µg of DNA
- 1000 µL: 1000 transfections with 1 µg of DNA
- #KC30200: Starting Kit with Super Magnetic Plate + 100 µL of CombiMag, PolyMag, PolyMag Neo
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2020-01-07
泰耳光电有限公司在发布的平面脂双层膜片钳工作站BLM供应信息，浏览与平面脂双层膜片钳工作站BLM相关的产品或在搜索更多与平面脂双层膜片钳工作站BLM相关的内容。 查看更多
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2017-12-05
《膜片钳技术及其应用》是2003年科学出版社出版的一本图书。作者康华光。本书主要介绍了膜片钳技术的工艺及应用。... 查看更多
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2019-07-20
Port-a-Patch科研级膜片钳工作站是由北京安麦格贸易有限公司代理或销售的Nanion品牌的仪器，产品来源于德国。北京安麦格贸易有限公司是中国最权威的Port-a-Patch科研级膜片钳工作站销售服务商之一，在北京等地方销售Port-a-Patch科研级膜片钳工作站已经多年。同时，生物在线为您提供众多企业Port-a-Patch科研级膜片钳工作站仪器产品及图片，以便挑选到性价比高，合适的Port-a-Patch科研级膜片钳工作站产品 查看更多
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2020-08-26
Port-a-Patch科研级全自动膜片钳系统是由北京安麦格贸易有限公司代理或销售的Nanion品牌的仪器，产品来源于德国。北京安麦格贸易有限公司是中国最权威的Port-a-Patch科研级全自动膜片钳系统销售服务商之一，在北京等地方销售Port-a-Patch科研级全自动膜片钳系统已经多年。同时，生物在线为您提供众多企业Port-a-Patch科研级全自动膜片钳系统仪器产品及图片，以便挑选到性价比高，合适的Port-a-Patch科研级全自动膜片钳系统产品 查看更多
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2021-07-19
Molecular Devices公司与东乐自然基因生命科学公司联合举办的AXON膜片钳第十四届膜片钳技术培训班将于2018年7月4-6日在西安空军军医大学（原第四军医大学）举办。本届培训班将与西安空军军医大学（原第四军医大学）联合承办，青岛海威磐石生物医药科技有限公司赞助支持。 本次培训班安排如下：一、注册报到 1、培训课程及安排： 7月3日（周二） 13:00-... 查看更多
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2019-03-21
北京赛贝生物技术有限公司在发布的心肌药筛-膜片钳供应信息，浏览与心肌药筛-膜片钳相关的产品或在搜索更多与心肌药筛-膜片钳相关的内容。 查看更多
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2020-03-24
SyncroPatch96工业型96通道全自动膜片钳系统是由北京安麦格贸易有限公司代理或销售的Nanion品牌的仪器，产品来源于德国。北京安麦格贸易有限公司是中国最权威的SyncroPatch96工业型96通道全自动膜片钳系统销售服务商之一，在北京等地方销售SyncroPatch96工业型96通道全自动膜片钳系统已经多年。同时，生物在线为您提供众多企业SyncroPatch96工业型96通道全自动膜片钳系统仪器产品及图片，以便挑选到性价比高，合适的SyncroPatch96工业型96通道全自动膜 查看更多
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2019-06-07
高通量全自动膜片钳是由普升科技有限公司代理或销售的SyncroPatch384PE品牌的仪器，产品来源于德国。普升科技有限公司是中国最权威的高通量全自动膜片钳销售服务商之一，在0等地方销售高通量全自动膜片钳已经多年。同时，生物在线为您提供众多企业高通量全自动膜片钳仪器产品及图片，以便挑选到性价比高，合适的高通量全自动膜片钳产品 查看更多
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2018-12-26
Instruments For ElectrophysiologyProducts include microelectrode, voltage and current clamp amplifiers, perfusion chambers, perfusion heating systems, perfus 查看更多
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2017-10-30
多通道全自动膜片钳系统是由北京安麦格贸易有限公司代理或销售的Nanion品牌的仪器，产品来源于德国。北京安麦格贸易有限公司是中国最权威的多通道全自动膜片钳系统销售服务商之一，在北京等地方销售多通道全自动膜片钳系统已经多年。同时，生物在线为您提供众多企业多通道全自动膜片钳系统仪器产品及图片，以便挑选到性价比高，合适的多通道全自动膜片钳系统产品 查看更多
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2019-01-01
运用膜片钳进行膜离子通道特性的研究，是一项艰辛、细致、繁杂的工作，要求较高的技术水平和实验条件作保证，现在大致介绍一下膜片钳实验的过程，粗略地包括以下几个方面。1. 标本制备 根据研究目的的不同，可采用不同的细胞组织，如心肌细胞、平滑肌细胞、肿瘤细胞等，现在几乎可对各种细胞进行膜片钳的研究。对所采用的细胞，必须满足实验要求，一般多采用酶解分离法，也可采用细胞培养法；另外，由于与分子生物学技术的结合，现在也运用分子克隆技术表达 ... 查看更多
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2021-07-25
工作原理：Port-a-Patch全自动膜片钳是新一代细胞膜离子通道信息测量系统。该系统通过平板芯片电极（芯片上约1-2μm的小孔）作为记录离子通道电流的工具，用户可将一定密度的细胞悬液滴加在芯片电极上，细胞液会随机下降，并在负压控制器的吸引下形成高阻封接；然后通过细胞外液自动灌流系统(配件)，由电脑控制自动完成细胞的封接、破膜、药物灌流处理和电信号的记录，以观察细胞膜离子通道的变化并进行药学实验。另外，温度控制仪（配件）可控制系统... 查看更多
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何谓刺激伪迹?有什么意义?_问答详情_蚂蚁淘,【正品极速】生物...123
儍缺粘0012021-07-29
电生理常规技术 电生理常规技术 一．电刺激。 二．生物放大器：正确选择，植物性神经冲动幅度多为50-100μV。不同组织，应采用不同的参 数。如 ECG：振幅0.1-2mV, 灵敏度0.5-1mV，时间常数0.1-1.0s，高频滤波1KHz 植物性神经冲动：振幅50-150μV, 灵敏度25-100μV，时间常数0.01-0.1s，高频滤波3-5KHz 中枢神经元单位放电：振幅100-300μV, 灵敏度50-100μV，时间常数0.01-0.1s，高频滤波5-10KHz 三．玻璃微电极： 常用尖端0.5-5μm，向细胞内插入时，需小于0.5μm（细胞直径的1/10~1/100），且尖端的倾斜度应相当缓和，一般微电极可分为金属微电极和玻璃微电极两类。 金属微电极，现多用镀铂钨丝电极（platinum-plated tungsten electrode），在钨丝上镀铂，可极大改善电极的电学特性，噪声可大大降低，加之机械强度大，适合长期体外记录（paré D， Gaudreau H. Projection cells and interneurons of the lateral and basolateral amygdala: distinct firing patterns and differential relation to the thera and delta rhythms in conscious cats. J Neursci, 1996,16(10):3334-3350 现要也常用镀银碳纤维电极。玻璃微电极记录易受机械位移的影响，加之尖端的电解质会漏出或堵塞，不适合半小时以上的长时间记录，玻璃微电极可分单管和多管微电极。 毛坯管在国外多用Pyrex管，国内多用GG-17和95料玻管。细胞外记录多采用外径1.5-2mm玻璃，细胞内记录则采用外径1mm细玻管，内外径之比约为2：3或5：6，长6-8cm。拉制前必须经过清洁处理。 清洁液：用等量的（250ml）王水（可反复应用）。一般毛坯管捆成把放入清洁液中1-2h，取出自来水冲洗20-30min，再放入无水酒精中洗 涤，再放入盛满蒸馏水烧杯中加热煮沸10min，倒去蒸馏水，再换新蒸馏水反复3次，再放入烤箱中烤干，备用，切不可用市售的洗涤剂，以防降低电极充灌液的表面张力而影响冲灌。 充灌液常用3mol/L KCl，为避免Cl-扩散，也可用2mol/L醋酸钾或柠檬酸钾充灌，也有人用0.5-1mol/L NaCl（低浓度）充灌可降低噪音。细胞外记录时，最后再用3-4mol/L NaCl +2%旁胺天蓝溶液定位。在膜片钳中还常加钙螯合剂，如EGTA。 阻抗与不同组织相关。 四．电生理实验中噪声和干扰的形成和排除。 （一）来源。 1．干扰信号与生物电生理信号的鉴别。准确区分生物电信号与干扰的伪迹是电生理实验的先决条件。 2．来源。主要有三个方面： 其一。物理性干扰。1）静电和电磁的干扰：实验室附近高压电，室内日光灯可产生50Hz的静电干扰，尤其是交流电，尤其是50Hz频率干扰最大（电子设备为50Hz）。其特点是幅度大，波形规则。2）噪声干扰：电子元件本身产生杂乱无章电压和电流称噪声，一般与放大器内部元件的质量与性能有关。 其二。接地不良。1）地线电阻应小。2）仪器故障。产生漏电电流，在地线上形成电位差，产生干扰。3）地线行走过程中打圈，形成线圈，易接受电场和磁场的干扰。4）各仪器设备应采用一点接地的方式，若采用多点接地，形成大地回路，也会引起干扰。5）地线过长与电源线形成交流环路。6）误用市电三孔中性线作为大地线（中性线上有4-5A电流）。 其三。生理性干扰。1）大脑电活动时，眨眼、眼球运动均对脑电具有干扰作用。2）实验中环境温度过低，动物寒战、抖动，引起肌电的发放而干扰记录，或因呼吸运动引起记录部位机械位移引起干扰信号。3）心电干扰，频率与心电一致。 （二）排除。 1．物理性干扰。1）屏蔽法：用于低频电和静电干扰，屏蔽线分布电容较大，线与线之间不可平行排列，更不可为了美观而将多线扎在一起，这会加大分布电容，易偶合高频干扰噪声。2）远离法。3）改变位置法。依电流方向相反，产生反向磁场的原理，改变各个仪器的位置或放大器输入的方位，会使干扰磁场抵消，微电极放大器探头阻抗高，易引入干扰，实验前可反复调整其方向和位置。4）微电极记录时尽量减少微电极本身的阻抗，减少输入阻抗及干扰信号在这个阻抗上形成干扰电压降，微电极到探头的连线<5cm。5）用监听器监听噪声，以便及时排除。 2．仪器质量，尽量改进。 3．接地不良。地线应尽量短粗，不能与电源线平行或打圈，不 要接在电源线的中性线 上，地线单独埋设，埋置处应较潮湿，附近无大型变压电动机，并在坑内加些食盐。 4．检查各仪器 是否漏电。 5．慢生物电变化时用乏极化电极，实验对象宜安静，勿受振动。 （三）刺激伪迹过大及防止。1）尽量减少刺激脉冲的波宽和强度。2）在动物体或标本上，尽量延长刺激部位 的距离，在刺激电极 和引导电极之间加一接地电极，此电极离引导电极愈近，刺激伪迹就越小；采用变换刺激极性，结合叠加处理，可抵消伪迹。 注：微电极中高浓度充灌液易蒸发，造成电极回路的开路，因此常在微电极插入Ag-AgCl丝或铂金丝后，在微电极尾部开口处涂上一层凡士林，防止水分蒸发。 动物麻醉和制动下，体温会下降，故应保温调节，加温维持肛温36-38℃. 记录脊髓背角或腹角神经元将脊柱前后拉直以减小呼吸运动造成的位移。记录脑神经元应在表面用温热石蜡制成一油槽，防止血管博动和呼吸运动的影响。 五．细胞内微电极记录 多用幼年离体标本，其原因：1）幼年动物骨骼骨化不完全，结缔组织少，神经组织易于分离，标本耐缺氧能力强，有的标本可存活数小时至数天，但标本也可能发育不完全，如背根和脑干到脊髓的投射纤维要到三周动物才完全。神经纤维髓鞘化不全，其药理作用与成年动物也不同。从实验角度上讲，脊髓背腹根短，不利于电生理刺激记录。小鼠一般应小于15g，制备标本才 有可能成功，而这样小鼠背腹根神经节不利于电生理实验。最适合的动物是金黄地鼠（hamster），介于大小鼠之间，制备标本活性很好，可能与其冬眠习性有关，而且其脊髓背腹根长达20-25mm，利于电生理记录。动物选择仍依实验而定，同一标本，不同中枢结构对缺氧耐受力也不同。金黄地鼠，若观察脊髓背角神经元活动，可用150-160g体重的鼠均可，但要研究腹角神经元，则体重不宜超过30g。 离体标本的灌流注，如ACSF。其中缓冲液成分有两种，一是重碳酸盐（bicarbonate）：温度低（4℃），配方有利于降低组织兴奋性。二是磷酸盐缓冲液和HEPES缓冲液：其优点是接近于 人体环境。各种缓冲液一般都先配母液，临用前一天，或临用前稀释。
膜片钳技术的膜片钳法的各种模式123
鬼鬼Ll362017-11-09
图1是表示膜片钳法各种模式的模式图，首先建立的单通道记录是细胞吸附式，其后又建立了膜内面向外和膜外面向内的模式。最近，又分别建立了开放的细胞吸附式膜内面向外和穿孔囊泡膜外面向外的模式。全细胞记录法是指在常规的方法的基础上，附加穿孔膜片的模式。 在细胞吸附模式上将膜打穿成孔，记录膜片以外部位的全细胞膜的离子电流，这时全细胞模式。
穿孔膜片钳记录猪冠状动脉平滑肌细胞K^+电流技术初探.pdf123
yinpeng22242021-07-30
当玻璃微电极压到细胞后，用嘴吸给负压，吸不动，取下玻璃电极，检查整个通路是畅通的，无堵塞。百思不得其解，求膜片钳高手指点！！不甚感谢！！
技术测IPSC或EPSC,细胞膜为什么要在 123
曼珠沙华77u32017-11-09
1．生物体具有共同的物质基础和结构基础。细胞是一切动植物结构的基本单位。病毒没有细胞结构。细胞是生物体的结构和功能的基本单位。
2．新陈代谢是生物体进行一切生命活动的基础，是生物最基本的特征，是生物与非生物的最
本质的区别。
3．生物遗传和变异的特征，使各物种既能基本上保持稳定，又能不断地进化。生物的遗传特
性，使生物物种保持相对稳定。生物的变异特性，使生物物种能够产生新的性状，以致形
成新的物种，向前进化发展。
4．生物体具应激性，因而能适应周围环境。生物体都能适应一定的环境，也能影响环境。
5．组成生物体的化学元素，在无机自然界都可以找到，没有一种化学元素是生物界所特有的，这个事实说明生物界和非生物界具统一性。生物界与非生物界还具有差异性。组成生物体的化学元素和化合物是生物体生命活动的物质基础。
6．糖类是细胞的主要能源物质，葡萄糖是细胞的重要能源物质。淀粉和糖元是植物、动物细胞内的储能物质。蛋白质是一切生命活动的体现者。脂肪是生物体的储能物质。核酸是一切生物的遗传物质。
7．组成生物体的任何一种化合物都不能够单独地完成某一种生命活动，只有这些化合物按照一定的方式有机地组织起来，才能表现出细胞和生物体的生命现象。细胞就是这些物质最基本的结构形式。
8．细胞膜具一定的流动性这一结构特点，具选择透过性这一功能特性。
9．细胞壁对植物细胞有支持和保护作用。线粒体是活细胞进行有氧呼吸的主要场所。叶绿体是绿色植物光合作用的场所。核糖体是细胞内将氨基酸合成为蛋白质的场所。染色质和染色体是细胞中同一种物质在不同时期的两种形态。细胞核是遗传物质储存和复制的场所，是细胞遗传特性和细胞代谢活动的控制中心。
10．构成细胞的各部分结构并不是彼此孤立的，而是互相紧密联系、协调一致的，一个细胞是一个有机的统一整体，细胞只有保持完整性，才能够正常地完成各项生命活动。展开
2．新陈代谢是生物体进行一切生命活动的基础，是生物最基本的特征，是生物与非生物的最
本质的区别。
3．生物遗传和变异的特征，使各物种既能基本上保持稳定，又能不断地进化。生物的遗传特
性，使生物物种保持相对稳定。生物的变异特性，使生物物种能够产生新的性状，以致形
成新的物种，向前进化发展。
4．生物体具应激性，因而能适应周围环境。生物体都能适应一定的环境，也能影响环境。
5．组成生物体的化学元素，在无机自然界都可以找到，没有一种化学元素是生物界所特有的，这个事实说明生物界和非生物界具统一性。生物界与非生物界还具有差异性。组成生物体的化学元素和化合物是生物体生命活动的物质基础。
6．糖类是细胞的主要能源物质，葡萄糖是细胞的重要能源物质。淀粉和糖元是植物、动物细胞内的储能物质。蛋白质是一切生命活动的体现者。脂肪是生物体的储能物质。核酸是一切生物的遗传物质。
7．组成生物体的任何一种化合物都不能够单独地完成某一种生命活动，只有这些化合物按照一定的方式有机地组织起来，才能表现出细胞和生物体的生命现象。细胞就是这些物质最基本的结构形式。
8．细胞膜具一定的流动性这一结构特点，具选择透过性这一功能特性。
9．细胞壁对植物细胞有支持和保护作用。线粒体是活细胞进行有氧呼吸的主要场所。叶绿体是绿色植物光合作用的场所。核糖体是细胞内将氨基酸合成为蛋白质的场所。染色质和染色体是细胞中同一种物质在不同时期的两种形态。细胞核是遗传物质储存和复制的场所，是细胞遗传特性和细胞代谢活动的控制中心。
10．构成细胞的各部分结构并不是彼此孤立的，而是互相紧密联系、协调一致的，一个细胞是一个有机的统一整体，细胞只有保持完整性，才能够正常地完成各项生命活动。展开
膜片钳的发展与应用123
JY_Maxwell2021-08-10
小弟是神经科学研究生新生一枚，导师叫我分分钟把钠钾钙离子通道的全细胞记录方法给他，现在查了一些文献有了一些内外液配方，但是不知道电压钳刺激的protocol怎么编。悬赏35蚁豆（基本全部家当）求protocol，只有钙通道的也OK哟~
膜片钳技术概述123
秋雨飒2882021-08-08
膜片钳技术 是用微玻管电极（膜片电极或膜片吸管）接触细胞膜，以千兆欧姆以上的阻抗使之封接，使与电极尖开口处相接的细胞膜的小区域（膜片）与其周围在电学上分隔，在此基础上固定点位，对此膜片上的离子通道的离子电流（pA级）进行监测记录的方法
用场效应管运算放大器构成的I-V转换器是测量回路的核心部分。在场效应管运算放大器的正负输入端子为等电位，向正输入端子施加指令电位时，由于短路负端子以及膜片都可等电位地达到钳制的目的，当膜片微电极尖端与默片之间形成10GΩ以上封接时，其间的分流电流达到最小，横跨膜片的电流可100%作为来自膜片电极的记录电流（lp）而被测量出来。
这一伟大的贡献，使Neher和Sakmann获得1991年度的诺贝尔生理学与医学奖。
用场效应管运算放大器构成的I-V转换器是测量回路的核心部分。在场效应管运算放大器的正负输入端子为等电位，向正输入端子施加指令电位时，由于短路负端子以及膜片都可等电位地达到钳制的目的，当膜片微电极尖端与默片之间形成10GΩ以上封接时，其间的分流电流达到最小，横跨膜片的电流可100%作为来自膜片电极的记录电流（lp）而被测量出来。
这一伟大的贡献，使Neher和Sakmann获得1991年度的诺贝尔生理学与医学奖。
怎样判断自己膜破没_怎么判断膜破没_处女膜修复123
寒冷的bone2017-11-09
看IV曲线是怎么看，？
生理学名词解释及大题123
2021-08-15
电压钳（voltage clamp）技术是通过插入细胞内的一根微电极向胞内补充电流，补充的电流量正好等于跨膜流出的反向离子流，这样即使膜通透性发生改变时，也能控制膜电位数值不变。经过离子通道的离子流与经微电极施加的电流方向相反，数量相等。因之可以定量测定细胞兴奋时的离子电流。膜通透性的改变是迅速的，但如使用一个高频响应的放大器，可以连续、快速、自动地调整注入电流，达到保持膜电位恒定的目的。它可以测量细胞的膜电位、膜电流和突触后电位。
欧文.内尔（Erwin Neher）和伯特.萨克曼（Bert Sakinann）在电压钳的基础上发展了膜片钳（patch clamp）技术，采用较大的微电极和神经元的细胞膜紧紧接触，两者间形成一高阻抗密封区。于是，微电极就以一个低阻抗的电特性进入细胞内(右图示)。膜片钳不仅可以观察单离子通道电流，而且有多种模式可以方便地对细胞进行电压钳制和电流钳制，观察各种离子通道电流及其调控，并与分子生物学技术结合进行离子通道与受体的分子结构和功能研究，广泛应用于神经生物学、生理学、药理学等各个领域。为此他们获得 1991年诺贝尔生理学一医学奖。
欧文.内尔（Erwin Neher）和伯特.萨克曼（Bert Sakinann）在电压钳的基础上发展了膜片钳（patch clamp）技术，采用较大的微电极和神经元的细胞膜紧紧接触，两者间形成一高阻抗密封区。于是，微电极就以一个低阻抗的电特性进入细胞内(右图示)。膜片钳不仅可以观察单离子通道电流，而且有多种模式可以方便地对细胞进行电压钳制和电流钳制，观察各种离子通道电流及其调控，并与分子生物学技术结合进行离子通道与受体的分子结构和功能研究，广泛应用于神经生物学、生理学、药理学等各个领域。为此他们获得 1991年诺贝尔生理学一医学奖。
用成年鼠分离的心肌细胞做膜片钳怎样能让细胞快速贴壁?123
zxf米修米修2021-08-03
原代培养心肌细胞作为一种主要的研究模型，被广泛应用于心血管研究之中.我们实验室经过长期尝试，摸索出了一些行之有效的方法，并积累了一些经验，现总结如下：
1新生大鼠鼠龄的选择新生大鼠心肌细胞在出生后3 d内具有部分的增殖能力，成年大鼠心肌细胞则为终末分化细胞，不再具有分裂增殖能力.因此，大鼠出生时间越短，其心肌细胞分离后成活率越高，越容易贴壁生长.大量观测表明，选择1~3 d龄大鼠分离其心肌细胞进行原代培养较为理想.其中尤以半日龄大鼠心肌细胞培养效果最佳.
2消化酶的选择及使用
新生大鼠心肌细胞的分离可采用组织块法和消化法，前者因不易获得密度均一的细胞且难控制成纤维细胞的生长而较少采用.消化法中常使用的酶有3种：胰蛋白酶、胶原酶I或Ⅱ以及透明质酸酶.透明质酸酶多与胰蛋白酶或胶原酶联合应用.胰蛋白酶作用较强，容易造成心肌细胞损坏.胶原酶作用较缓和，能消化细胞间质中的胶原纤维以释放细胞，对细胞损伤小，且在新生大鼠心肌组织，以胶原I为主,故我们选用胶原酶I.文献报道胶原酶的工作浓度一般在0.6~1 g?L1,我们使用的为0.8 g?L1.胶原酶最好现用现配.
3消化程度的把握
新生大鼠心肌细胞对酶消化极为敏感.消化过度可使肌原纤维出现萎缩，细胞死亡率增加或丧失贴壁能力及搏动能力;消化不足，细胞聚集成团，无法分清细胞边界，难以形态学观测.消化过程中使用磁力搅拌器时应注意1)转速一般控制在60~80 r?min1左右.(2)每次消化的时间须结合消化酶浓度确定.(3)将粘附在搅拌子上的心肌组织吹散，使酶液充分接触组织.(4)适宜温度为35~37℃.(5)当组织由红转白呈半透明状态时，应停止消化.
4接种的细胞密度
心肌细胞接种密度不仅影响细胞间的相互接触，进而影响细胞对肥大刺激的反应，而且影响长期培养细胞的成活率.接种细胞的绝对数量应经精确计算.一般而言，应根据实验的观测目的决定单位面积上的细胞数量.例如，如作形态学观测,六孔板中每孔的接种细胞数量应控制在1×105~2×105个;若需收获心肌细胞作mRNA或蛋白表达水平的观测，则每孔的接种密度可增加到5×105~6×105个.
1新生大鼠鼠龄的选择新生大鼠心肌细胞在出生后3 d内具有部分的增殖能力，成年大鼠心肌细胞则为终末分化细胞，不再具有分裂增殖能力.因此，大鼠出生时间越短，其心肌细胞分离后成活率越高，越容易贴壁生长.大量观测表明，选择1~3 d龄大鼠分离其心肌细胞进行原代培养较为理想.其中尤以半日龄大鼠心肌细胞培养效果最佳.
2消化酶的选择及使用
新生大鼠心肌细胞的分离可采用组织块法和消化法，前者因不易获得密度均一的细胞且难控制成纤维细胞的生长而较少采用.消化法中常使用的酶有3种：胰蛋白酶、胶原酶I或Ⅱ以及透明质酸酶.透明质酸酶多与胰蛋白酶或胶原酶联合应用.胰蛋白酶作用较强，容易造成心肌细胞损坏.胶原酶作用较缓和，能消化细胞间质中的胶原纤维以释放细胞，对细胞损伤小，且在新生大鼠心肌组织，以胶原I为主,故我们选用胶原酶I.文献报道胶原酶的工作浓度一般在0.6~1 g?L1,我们使用的为0.8 g?L1.胶原酶最好现用现配.
3消化程度的把握
新生大鼠心肌细胞对酶消化极为敏感.消化过度可使肌原纤维出现萎缩，细胞死亡率增加或丧失贴壁能力及搏动能力;消化不足，细胞聚集成团，无法分清细胞边界，难以形态学观测.消化过程中使用磁力搅拌器时应注意1)转速一般控制在60~80 r?min1左右.(2)每次消化的时间须结合消化酶浓度确定.(3)将粘附在搅拌子上的心肌组织吹散，使酶液充分接触组织.(4)适宜温度为35~37℃.(5)当组织由红转白呈半透明状态时，应停止消化.
4接种的细胞密度
心肌细胞接种密度不仅影响细胞间的相互接触，进而影响细胞对肥大刺激的反应，而且影响长期培养细胞的成活率.接种细胞的绝对数量应经精确计算.一般而言，应根据实验的观测目的决定单位面积上的细胞数量.例如，如作形态学观测,六孔板中每孔的接种细胞数量应控制在1×105~2×105个;若需收获心肌细胞作mRNA或蛋白表达水平的观测，则每孔的接种密度可增加到5×105~6×105个.
膜片钳123
chliang20062021-08-13
【膜片钳】关于膜片钳试验中破膜问题 实验室建设与采购 ...123
ftphttp20123332017-11-09
什么时候这两种方式不能通用，只能选择其中一种对细胞破膜？
外源性磷酸肌酸对缺血心肌细胞离子通道的影响及其心衰治疗机制的...123
达6361562021-07-21
1）细胞吸附式膜片(cell attached patch)是膜片钳的基本方式,其它方式由此衍生。这种膜片形式比较稳定,因细胞骨架及有关代谢过程是完整的,故对细胞结构和环境干扰最小。但这种膜片形式易在电极尖端形成囊泡,从而细胞骨架可能有所变化。另外这种膜片不能控制细胞内成分。且任何影响膜电位的处理均可影响其电位水平。
2）内面向外式膜片( inside outpatch)细胞内外和电极内的溶液均可调控,既能较容易地改变细胞内的离子或物质浓度,又能把酶等直接加于膜的内侧面,适宜研究胞内物质对通道活动的影响。但实验中难以改变膜外侧物质,且需浸于低钙液中。常用于研究依赖细胞内钙的离子通道,如钙敏感的钾通道,还可用于细胞内激素和第二信使与通道的调节作用。
3) 外面向外式膜片(outside outpatch)能接触膜的两侧,可以任意改变膜外物质的浓度,有利于研究离子、递质对膜外表面的作用,多用于研究细胞膜外侧受体控制的离子通道。这些受体直接作用于离子通道,而不需经过第二信使系统。因细胞外液容易更换,故加药方便。缺陷是实验中难以改变胞内成分,而且电极管内必须充以低钙液。
4) 全细胞式膜片(whole cell patch)方式使细胞内与浴槽之间的漏流极少。电极本身阻抗(1~10MΩ)与细胞封接后的阻抗相比较低,这种低接触阻抗使单管电压钳容易实现。电极管内与细胞之间弥散交换与平衡快,因而容易控制细胞内液的成分。细胞钳记录的是许多通道的平均电流,有利于综合分析。如果有目的地将膜电位钳制在某一程度,可做到选择性抑制某些通道的活性而只记录某种通道电流的总和,并可在同一细胞上观察几种不同通道的情况。通过改变内部介质,如改变电极液成分,或在电极液中加入所需药物,通过渗透很快改变胞浆成分并达到平衡,该手段在全细胞记录中广泛应用。它适合于小细胞的电压钳位,对于直径大于30μm的细胞很难实现钳位。不足之处是由于电极与细胞间交换快,细胞内环境很容易破坏,因此记录所用的电极液应与胞浆主要成分相同,如高K+,低Na+和Ca2+及一定的缓冲成分和能量代谢所需的物质。
5) 穿孔膜片(perforated patch)是为克服常规全细胞模式的胞质渗漏问题,有学者将与离子亲和的制霉菌素或二性霉素B经微电极灌流到含有类甾醇的细胞膜上,形成只允许一价离子通过的孔,用此法在膜片上做很多导电性孔道,借此对全细胞膜电流进行记录。由于此模式的胞质渗漏极为缓慢,局部串联阻抗较常规全细胞模式高,所以钳制速度很慢,也称为缓慢全细胞模式。
感觉这样的提问没有什么意义
建议，可以自己查阅下资料
2）内面向外式膜片( inside outpatch)细胞内外和电极内的溶液均可调控,既能较容易地改变细胞内的离子或物质浓度,又能把酶等直接加于膜的内侧面,适宜研究胞内物质对通道活动的影响。但实验中难以改变膜外侧物质,且需浸于低钙液中。常用于研究依赖细胞内钙的离子通道,如钙敏感的钾通道,还可用于细胞内激素和第二信使与通道的调节作用。
3) 外面向外式膜片(outside outpatch)能接触膜的两侧,可以任意改变膜外物质的浓度,有利于研究离子、递质对膜外表面的作用,多用于研究细胞膜外侧受体控制的离子通道。这些受体直接作用于离子通道,而不需经过第二信使系统。因细胞外液容易更换,故加药方便。缺陷是实验中难以改变胞内成分,而且电极管内必须充以低钙液。
4) 全细胞式膜片(whole cell patch)方式使细胞内与浴槽之间的漏流极少。电极本身阻抗(1~10MΩ)与细胞封接后的阻抗相比较低,这种低接触阻抗使单管电压钳容易实现。电极管内与细胞之间弥散交换与平衡快,因而容易控制细胞内液的成分。细胞钳记录的是许多通道的平均电流,有利于综合分析。如果有目的地将膜电位钳制在某一程度,可做到选择性抑制某些通道的活性而只记录某种通道电流的总和,并可在同一细胞上观察几种不同通道的情况。通过改变内部介质,如改变电极液成分,或在电极液中加入所需药物,通过渗透很快改变胞浆成分并达到平衡,该手段在全细胞记录中广泛应用。它适合于小细胞的电压钳位,对于直径大于30μm的细胞很难实现钳位。不足之处是由于电极与细胞间交换快,细胞内环境很容易破坏,因此记录所用的电极液应与胞浆主要成分相同,如高K+,低Na+和Ca2+及一定的缓冲成分和能量代谢所需的物质。
5) 穿孔膜片(perforated patch)是为克服常规全细胞模式的胞质渗漏问题,有学者将与离子亲和的制霉菌素或二性霉素B经微电极灌流到含有类甾醇的细胞膜上,形成只允许一价离子通过的孔,用此法在膜片上做很多导电性孔道,借此对全细胞膜电流进行记录。由于此模式的胞质渗漏极为缓慢,局部串联阻抗较常规全细胞模式高,所以钳制速度很慢,也称为缓慢全细胞模式。
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